紫萁離體培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及蕨類植物的組織培養(yǎng)技術(shù)，尤其涉及紫萁離體培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002] 紫萁Thunb)屬于蕨類植物門，真蕨類，原始厚囊蕨綱，紫萁 目，紫萁科，紫萁屬的一種多年生草本植物，既是一種山野菜又是一種名貴中藥材。貴州境 內(nèi)各縣都有紫萁（薇菜）分布，老百姓每年春季采摘野生紫萁加工成薇菜干銷售或食用，。 紫萁中含有黃酮類、內(nèi)酯類、留酮類、多糖類、鞣質(zhì)及氨基酸類成分。薇菜干富含蛋白質(zhì)、氨 基酸、纖維素、碳水化合物，以及鉀、娃、鎂、磷、鐵、鋅等營養(yǎng)成分，營養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良，可與金菜 干、木耳、竹蓀等名貴山珍食品媲美，是目前我國主銷日本、韓國等地的一種名貴山野菜。紫 萁的根莖及葉柄殘基能清熱解毒，止血殺蟲，有小毒。利用紫萁為原材料提取有效成分用于 醫(yī)藥用品及開發(fā)保健食品，符合當(dāng)今世界食品營養(yǎng)學(xué)和預(yù)防醫(yī)學(xué)的發(fā)展方向。但由于紫萁 自然繁殖力低，大量的采掘野生蕨類資源作為母種，對于水土保持和野生資源的保護(hù)是不 利的，限制了薇菜的規(guī)?；a(chǎn)，因此，以孢子體為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)在紫萁規(guī)?；a(chǎn)上 有很大的發(fā)展和應(yīng)用前景。
[0003] 紫萁(薇菜)，在其生活史中，要經(jīng)歷孢子體和配子體兩個世代，其配子體有性生活 世代的授精過程中需要水作為介質(zhì)，用常規(guī)的離體培養(yǎng)方法很難獲得成功，本發(fā)明根據(jù)蕨 類植物的這一特點，探索出一套紫萁(薇菜）離體培養(yǎng)的組合配方。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種紫萁離體培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基，以孢子體為材料進(jìn)行組 織培養(yǎng)，克服紫萁自然繁殖力低，限制了薇菜的規(guī)?；a(chǎn)，為紫萁規(guī)?；a(chǎn)提供技術(shù)條 件。
[0005] 具體各階段的培養(yǎng)基如下： 1)誘導(dǎo)孢子體萌發(fā)形成原葉體培養(yǎng)基配方： 1/2MS+2-3%蔗糖瓊脂培養(yǎng)基。
[0006] 2)原葉體（配子體）增殖培養(yǎng)基配方： MS+0. 2-0. 6mg/LKT+1.O-L5mg/LIBA瓊脂培養(yǎng)基。
[0007] 3)誘導(dǎo)原葉體受精萌發(fā)孢子體配方： MS液體培養(yǎng)基。
[0008] 4 )孢子體增殖培養(yǎng)基配方： MS+0. 2-0. 6mg/LNAA+0. 5-1.Omg/L6-BA液體培養(yǎng)基。
[0009] 本技術(shù)方案的有益效果：提供繁殖各階段的培養(yǎng)基配方，有助于提高紫萁的繁殖 能力，高效簡捷的培養(yǎng)方法有利于實現(xiàn)紫萁的規(guī)模化生產(chǎn)，無論對于企業(yè)還是農(nóng)民，都有相 當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
【具體實施方式】
[0010] 下面由具體實施例說明 采集不同成熟度植株數(shù)株，分別剪取不同成熟度的紫萁的孢子囊穗，將其用洗衣粉浸 泡5min，洗去表面灰塵，再用自來水沖洗30min,無菌條件下，用75%的酒精消毒60s，無菌 水沖洗3次,再用0. 1%的升萊溶液滅菌8min,無菌水沖洗4?5次,再用無菌吸水紙吸干 表面水分，切成〇. 5cm長的小段，然后將其接種于孢子萌發(fā)培養(yǎng)基中。
[0011] 誘導(dǎo)孢子體萌發(fā)形成原葉體 誘導(dǎo)孢子體萌發(fā)形成原葉體的培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，MS分為1/4、1/2、1 三個水平濃度，蔗糖分為2%、3%兩個水平(見表1)，接種材料紫萁孢子囊穗成熟度分為嫩綠 色的幼苗、深綠色的壯苗和褐色的老苗三個水平，分別記為成熟度I、成熟度II、成熟度III， 接入1個0. 5cm長的孢子囊穗段，放入培養(yǎng)室培養(yǎng)。觀察統(tǒng)計存活率，并結(jié)合成活率與生長 狀態(tài)，篩選出較好的培養(yǎng)基配方。 表1誘導(dǎo)孢子體萌發(fā)的培養(yǎng)基配方
【主權(quán)項】
1. 一種紫萁離體培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基，其特征在于，具體各階段的培養(yǎng)基如下： 1) 誘導(dǎo)孢子體萌發(fā)形成原葉體培養(yǎng)基配方： 1/2MS+2-3%蔗糖瓊脂培養(yǎng)基； 2) 原葉體即配子體增殖培養(yǎng)基配方： MS+O. 2-0. 6mg/LKT+1.O-L5mg/LIBA瓊脂培養(yǎng)基； 3) 誘導(dǎo)原葉體受精萌發(fā)孢子體配方： MS液體培養(yǎng)基； 4) 孢子體增殖培養(yǎng)基配方： MS+O. 2-0. 6mg/LNAA+0. 5-1.Omg/L6-BA液體培養(yǎng)基。
【專利摘要】一種紫萁離體培養(yǎng)各階段的培養(yǎng)基，各階段的培養(yǎng)基如下：①誘導(dǎo)孢子萌發(fā)較好的培養(yǎng)基為：1/2MS+2-3%蔗糖瓊脂培養(yǎng)基，②原葉體(配子體)增殖培養(yǎng)基配方MS+0.2-0.6mg/L KT+1.0-1.5mg/L IBA瓊脂培養(yǎng)基。③誘導(dǎo)原葉體受精萌發(fā)孢子體配方為：MS液體培養(yǎng)基，④孢子體增殖較好的培養(yǎng)基為：MS+0.2-0.6mg/L NAA+0.5-1.0mg/L 6-BA液體培養(yǎng)基。有益效果：提供繁殖各階段的培養(yǎng)基配方，有助于提高紫萁的繁殖能力，高效簡捷的培養(yǎng)方法有利于實現(xiàn)紫萁的規(guī)?；a(chǎn)，無論對于企業(yè)還是農(nóng)民，都有相當(dāng)大的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104542300
【申請?zhí)枴緾N201510042794
【發(fā)明人】鄧坦
【申請人】遵義師范學(xué)院
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月28日