一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo屬蘭科石斛屬多年生附生草 本植物，又稱黑節(jié)草，是一種珍貴的藥用植物，自古以來被認(rèn)為是滋陰補(bǔ)益的珍品，并被道 家養(yǎng)生經(jīng)典《道藏》譽(yù)為"中華九大仙草之首"，民間則稱其為"救命仙草"，《中國藥典》稱 其具有"益胃生津，滋陰清熱"功效，用于熱病津傷，口干煩渴，胃陰不足，食少干嘔，病后虛 熱不退，陰虛火旺，骨蒸勞熱，目暗不明，筋骨瘺軟，現(xiàn)代研宄表明，鐵皮石斛含有多糖、生物 堿、氨基酸等成分，能顯著提高機(jī)體免疫功能，具有養(yǎng)胃出津、補(bǔ)腎益力、滋陰清熱、耐缺氧、 抗疲勞、抗腫瘤等功效，現(xiàn)代藥理學(xué)研宄發(fā)現(xiàn)，石斛還具有抗衰老和擴(kuò)張血管的作用，目前， 國內(nèi)以鐵皮石斛為原料和配叢的產(chǎn)品有數(shù)十種，如石斛夜光丸、石斛片等。
[0003] 我國出產(chǎn)的野生鐵皮石斛主要分布在秦嶺淮河以南的安徽、湖南、云南、貴州、廣 東、廣西、福建、江西、浙江等地區(qū)，其中又以云南最多，秦嶺淮河的最高溫度可超過攝氏40 度，如廣東粵中北部地區(qū)粵中北部的極端最高氣溫可達(dá)40°C?42°C，然而，這些地區(qū)也有 野生鐵皮石斛的分布，當(dāng)然野生鐵皮石斛生長的小氣候環(huán)境的溫度可能會與人們記錄到的 極端高低溫并不完全一樣，如果野生鐵皮石斛植株生長的小氣候環(huán)境是半陰半陽的（因?yàn)?有別的植物為之遮住部分陽光），也許極端高溫達(dá)不到40°C，但如果是陽光能直射到的生 境，也許極端高溫達(dá)會超過40°C，此外，鐵皮石斛在40°C的高溫條件下，鐵皮石斛能生存在 多長的時間，目前尚不清楚。
[0004] 野生鐵皮石斛喜蔭涼、濕潤的環(huán)境，常附在高海拔懸崖峭壁或林內(nèi)樹干和巖石縫 隙中，主要分布于安徽、江西、浙江、福建、廣東、廣西、云南等省，由于其藥用價值高、生長 條件特殊和分布受局限，以及鐵皮石斛種子極小、無胚乳、自然繁殖率極低，加之價格過高 導(dǎo)致的過度采挖以及自然環(huán)境的變化，野生鐵皮石斛已經(jīng)瀕臨滅絕，被列為國家二級保護(hù) 植物，為了保護(hù)和發(fā)展鐵皮石斛資源，充分發(fā)揮鐵皮石斛巨大的資源優(yōu)勢，浙江、江西、安 徽、云南、四川等地紛紛開展鐵皮石斛的人工種植，人工種植鐵皮石斛一般控制室溫在日溫 25°C?30°C，夜溫15?20°C，即鐵皮石斛適宜的生長溫度。但在鐵皮石斛的種植過程中， 特別是江西、安徽等山區(qū)，藥農(nóng)們在種植鐵皮石斛過程中，常因局部溫度超過35°C以上導(dǎo)致 鐵皮石斛長勢差、品質(zhì)無法保證等問題，因此，選育出品質(zhì)純正、適合高溫區(qū)域人工栽培的 抗熱鐵皮石斛優(yōu)良新品種是勢在必行。
[0005] 云南是國內(nèi)鐵皮石斛野生資源最為豐富的省，也是鐵皮石斛的主產(chǎn)區(qū)，云南產(chǎn)鐵 皮石斛的特點(diǎn)是耐熱、植珠粗壯、莖長、花多、產(chǎn)量高。
[0006] 目前國內(nèi)已有浙江、廣東、云南等省的科研單位與企業(yè)，對鐵皮石斛開展了人工選 育研宄，選育出仙斛1號、仙斛2號、中科1號、紅鑫1號等新品種（系），這些新品種（系） 都是一些全同胞或半同胞家系，即對特定新本進(jìn)行自交或雜交后，再用其蒴果（種子）繁殖 形成下一代種苗群體，且選育這些新品種（系）的主要目的是高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)，對于抗性方面的研 宄未見公開報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的旨在提供一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，使鐵皮石斛改良 群體的整體表現(xiàn)、有效成分含量得到提高，同時優(yōu)良單株的出現(xiàn)頻率大幅度提高。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮 石斛雜交育種一鐵皮石斛群體改良一鐵皮石斛優(yōu)良品系選育一鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁， 具體步驟如下：
[0009] I:鐵皮石斛雜交育種
[0010] i.收集三清山野生鐵皮石斛，同時收集云南產(chǎn)耐熱、植株粗壯、莖長、花多、產(chǎn)量高 的鐵皮石斛；
[0011] ii.以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn) 行人工授粉雜交，得到蒴果；
[0012] II:鐵皮石斛群體改良
[0013] i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植 株，即為基礎(chǔ)群體；
[0014] ii.將基礎(chǔ)群體置入人工氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長 勢和有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu)良單株；
[0015] iii.以ii中選出的優(yōu)良單株進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)繁，獲得優(yōu)良個體；
[0016] iv.選擇一個以上種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較試驗(yàn)，控制植株之間 合理的生長距離，從而選出優(yōu)良個體，繼續(xù)培養(yǎng)或種植，待種子成熟后混收種子，即為改良 群體；
[0017]III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育
[0018] 在步驟II得到的改良群體中選擇所需要的優(yōu)良個體，并利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng) 技術(shù)對這些個體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，選擇一個以上地區(qū)進(jìn)行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選 出優(yōu)良后代培育成新品系。
[0019] IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁
[0020] 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)將步驟III中所得的新品系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定 且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
[0021] 上述技術(shù)方案中，步驟I(i)分步中所用的鐵皮石斛母本為三清山野生鐵皮石斛， 父本為云南鐵皮石斛，三清山野生鐵皮石斛具有區(qū)域適應(yīng)性的特點(diǎn)，云南鐵皮石斛具有耐 熱、植株粗壯、莖長、花多、產(chǎn)量高的特點(diǎn)。
[0022] 上述技術(shù)方案中，步驟II中的基礎(chǔ)群體為能在30°C以上環(huán)境長勢好且有效成分 含量達(dá)到有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的優(yōu)良鐵皮石斛。
[0023] 上述技術(shù)方案中，步驟III中擴(kuò)繁的材料既可運(yùn)用蒴果（內(nèi)含種子）采用植物組 織細(xì)胞培養(yǎng)也可用所得單株的莖段或者根進(jìn)行無性繁殖。
[0024] 上述技術(shù)方案中，步驟IV所述的新品系快繁的材料可以是蒴果（內(nèi)含種子）也可 以是植株的莖段或根。
[0025] 上述技術(shù)方案中，步驟Il(iii)分步中的優(yōu)良個體可以是無性系，也可以是蒴果 (內(nèi)含種子）。
[0026] 上述技術(shù)方案中，步驟III中的優(yōu)良個體可以是無性系，也可以是蒴果（內(nèi)含種 子）。
[0027] 上述技術(shù)方案中，步驟II(ii)分步中所述有效成分是指鐵皮石斛多糖和甘露糖， 其中多糖含量以無水葡萄糖計不得少于25. 0%，甘露糖含量為13. 0%?38. 0%。
[0028] 上述技術(shù)方案中，步驟I、II、III、IV步驟中進(jìn)行鐵皮石斛培養(yǎng)時溫度控制在30°C 以上；所用的培養(yǎng)基可以是植物組織細(xì)胞培養(yǎng)所用的常規(guī)培養(yǎng)基，也可以根據(jù)所需采用自 制培養(yǎng)基進(jìn)行，光照強(qiáng)度、光照時間按照鐵皮石斛組織細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作。
[0029] 上述技術(shù)方案中，抗熱鐵皮石斛能在30°C?40°C甚至42°C的環(huán)境中生長良好。
[0030] 本發(fā)明的一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)異 效果。
[0031] 本發(fā)明通過采用三清山野生鐵皮石斛與云南鐵皮石斛雜交后所得后代，運(yùn)用植物 組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，把群體改良與優(yōu)良單株的選育、優(yōu)良新品系的選育與優(yōu)良種苗的快繁 相結(jié)合，利用高溫誘導(dǎo)，根據(jù)抗熱和有效成分含量來篩選出品種，大大加快了新品系的選育 速度，且通過形成鐵皮石斛優(yōu)良品種，豐富鐵皮石斛種質(zhì)資源，推動經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有重