要的價(jià) 值。
[0032] 本發(fā)明提高了鐵皮石斛優(yōu)良種苗選育的準(zhǔn)確性，加快雜交育種的速度，大大提高 了鐵皮石斛育種效率；快速地為鐵皮石斛大田生產(chǎn)提供能夠保證鐵皮石斛質(zhì)量且抗熱穩(wěn)定 的優(yōu)良種苗。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面結(jié)合實(shí)例對(duì)本發(fā)明的三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0034] 本發(fā)明的一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮石斛雜交育種一鐵皮 石斛群體改良一鐵皮石斛優(yōu)良品系選育一鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁，具體步驟如下：
[0035] I:鐵皮石斛雜交育種
[0036] i.收集三清山野生鐵皮石斛，同時(shí)收集云南產(chǎn)耐熱、植株粗壯、莖長(zhǎng)、花多、產(chǎn)量高 的鐵皮石斛；
[0037] ii.以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn) 行人工授粉雜交，得到蒴果；
[0038] II:鐵皮石斛群體改良
[0039] i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植 株，即為基礎(chǔ)群體；
[0040] ii.將基礎(chǔ)群體置入人工氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長(zhǎng) 勢(shì)和有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu)良單株；
[0041] iii.以ii中選出的優(yōu)良單株進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)繁，獲得優(yōu)良個(gè)體；
[0042] iv.選擇一個(gè)以上種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較試驗(yàn)，控制植株之間 合理的生長(zhǎng)距離，從而選出優(yōu)良個(gè)體，繼續(xù)培養(yǎng)或種植，待種子成熟后混收種子，即為改良 群體；
[0043] III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育
[0044] 在步驟II得到的改良群體中選擇所需要的優(yōu)良個(gè)體，并利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng) 技術(shù)對(duì)這些個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，選擇一個(gè)以上地區(qū)進(jìn)行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選 出優(yōu)良后代培育成新品系。
[0045] IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁
[0046] 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)將步驟III中所得的新品系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定 且有效成分含量測(cè)定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
[0047] 實(shí)施例一：
[0048] -種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，具體步驟如下：
[0049] I:鐵皮石斛雜交育種
[0050] i.收集三清山野生鐵皮石斛30份種質(zhì)，同時(shí)收集云南鐵皮石斛36份種質(zhì)；
[0051] ii.以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn) 行雜交，得到蒴果，實(shí)施例1中，經(jīng)對(duì)所收集鐵皮石斛種質(zhì)進(jìn)行培育，經(jīng)植株間比較，選出整 體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的植株作為新的母本和父本進(jìn)行雜交，選擇整體表現(xiàn)較好的 標(biāo)準(zhǔn)為：株高、莖桿形狀和粗壯度、節(jié)間縱紋顏色、葉片顏色這類外觀指標(biāo)；有效成分含量 高的標(biāo)準(zhǔn)是：含鐵皮石斛多糖即以含葡萄糖計(jì)不得少于25. 0%，含甘露糖為13. 0-38. 0%， 實(shí)施例1中的雜交是指在花期采用人工授粉的形式進(jìn)行；
[0052] II:鐵皮石斛群體改良
[0053] i.將I⑴得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛 植株，即為基礎(chǔ)群體，鐵皮石斛蒴果的標(biāo)準(zhǔn)為10-11月份選取外表發(fā)黃但未開裂、飽滿的 蒴果，操作方法為：把果實(shí)放入干凈的消毒容器中，加入75%酒精浸泡消毒果實(shí)，30秒后， 將酒精倒出，再加入〇. 1 %生汞進(jìn)行果實(shí)表現(xiàn)消毒，輕搖容器，使果實(shí)滅菌徹底，然后倒出 生汞液體，再用無菌水沖洗4?5次，采用MS培養(yǎng)基+香蕉汁30g/L+0. 5mg/LNAA+白糖 30g/L+花寶3g/L為基質(zhì)，培養(yǎng)溫度30 ± 2°C，相對(duì)濕度60-80 %，每天光照8-12h，光照強(qiáng)度 1000-2000LX，待種子萌發(fā)后，再轉(zhuǎn)接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L培養(yǎng)基 上進(jìn)行原球莖誘導(dǎo)增殖，然后轉(zhuǎn)接至MS+ 土豆汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L+NAA0. 2mg/ L的培養(yǎng)基上進(jìn)行分化成苗，最后轉(zhuǎn)接至MS+0. 2mg/LNAA+30g/L土豆汁的培養(yǎng)基上進(jìn)行壯 苗生根，經(jīng)煉苗后即可作為大田用苗使用；
[0054] ii.將基礎(chǔ)群體置入人工模擬氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，調(diào)節(jié)溫度控制，使氣候箱中的溫 度保持在30°C以上，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長(zhǎng)勢(shì)和有效成分含量由高到低的順序 選出優(yōu)良單株50個(gè)；
[0055] iii.以ii中選出的優(yōu)良單株50個(gè)的蒴果（內(nèi)含種子）進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò) 繁，獲得50個(gè)單株的優(yōu)良后代個(gè)體，進(jìn)行擴(kuò)繁所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件同ii;
[0056] iv.選擇玉山、德興、婺源3個(gè)環(huán)繞三清山的種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的 比較試驗(yàn)，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，從50個(gè)后代系中選擇出整體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的的優(yōu) 良后代16個(gè)，除去未中選的所有鐵皮石斛植株，并將中選的16個(gè)優(yōu)良后代分別疏去部分植 株，并進(jìn)行相間移植，使其獲得充分受粉，種子成熟后混收種子，即為改良群體；
[0057] 上述四個(gè)步驟的工作可使鐵皮石斛原來群體（基礎(chǔ)群體）得到改良，并通過上述 步驟進(jìn)行多次循環(huán)，使鐵皮石斛改良群體的整體表現(xiàn)、有效成分含量得到提高，同時(shí)優(yōu)良單 株的出現(xiàn)頻率可大幅度提高。
[0058] 在群體改良的過程中，可不斷地從群體外向群體內(nèi)導(dǎo)入新的種質(zhì)，豐富基因源。
[0059] III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育
[0060] 在群體改良的第四個(gè)步驟中，選擇所需要的優(yōu)良個(gè)體，并利用植物組織細(xì)胞培養(yǎng) 技術(shù)以蒴果（內(nèi)含種子）為材料對(duì)這些個(gè)體進(jìn)行擴(kuò)繁獲得后代，然后選擇3個(gè)不同種植地 區(qū)進(jìn)行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗(yàn)，選出抗熱且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良后代培育成新品系；
[0061] IV.運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁
[0062] 運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)根據(jù)II(i)的方法與條件以蒴果（內(nèi)含種子）進(jìn)行新 品系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有效成分含量測(cè)定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
[0063] 實(shí)施例1得到的抗熱鐵皮石斛有效成分含量數(shù)據(jù)（每個(gè)地區(qū)隨機(jī)取5株）。
[0064] 表1抗熱鐵皮石斛有效成分含量數(shù)據(jù)
[0065]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮石斛雜交育種一鐵皮石斛群體改 良一鐵皮石斛優(yōu)良品系選育一鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴(kuò)繁，其特征在于具體步驟如下： I:鐵皮石斛雜交育種 i. 收集三清山野生鐵皮石斛，同時(shí)收集云南產(chǎn)耐熱、植株粗壯、莖長(zhǎng)、花多、產(chǎn)量高的鐵 皮石斛； ii. 以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進(jìn)行人 工授粉雜交，得到蒴果； II:鐵皮石斛群體改良
1. 將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細(xì)胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植株， 即為基礎(chǔ)群體； ii. 將基礎(chǔ)群體置入人工氣候箱中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)基礎(chǔ)群體在人工氣候箱中的長(zhǎng)勢(shì)和 有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu)良單株； iii. 以ii中選出的優(yōu)良單株進(jìn)行植物組織細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)繁，獲得優(yōu)良個(gè)體； iv. 選擇一個(gè)以上種植區(qū)進(jìn)行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較試驗(yàn)，控制植株之間合 理的生長(zhǎng)距離，從而選出優(yōu)良個(gè)體，繼續(xù)培養(yǎng)或種植，待種子成熟后混收種子，即為改良群 體； III:運(yùn)用植物組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育 在步驟II得到的改良群體中選擇所需要的優(yōu)良個(gè)體，并利