用植物組織細胞培養(yǎng)技術 對這些個體進行擴繁獲得后代，選擇一個以上地區(qū)進行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗，選出優(yōu) 良后代培育成新品系。 IV.運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁 運用植物組織細胞培養(yǎng)技術將步驟III中所得的新品系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有 效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
2. 根據權利要求1所述的三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，其特征在于具體步驟如 下： I :鐵皮石斛雜交育種 i. 收集三清山野生鐵皮石斛30份種質，同時收集云南鐵皮石斛36份種質； ii. 以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進行雜 交，得到蒴果，實施例1中，經對所收集鐵皮石斛種質進行培育，經植株間比較，選出整體表 現(xiàn)較好、有效成分含量高的植株作為新的母本和父本進行雜交，選擇整體表現(xiàn)較好的標準 為：株高、莖桿形狀和粗壯度、節(jié)間縱紋顏色、葉片顏色這類外觀指標；有效成分含量高的 標準是：含鐵皮石斛多糖即以含葡萄糖計不得少于25. 0%，含甘露糖為13. 0-38. 0%，實施 例1中的雜交是指在花期采用人工授粉的形式進行； II :鐵皮石斛群體改良 i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植株， 即為基礎群體，鐵皮石斛蒴果的標準為10-11月份選取外表發(fā)黃但未開裂、飽滿的蒴果， 操作方法為：把果實放入干凈的消毒容器中，加入75%酒精浸泡消毒果實，30秒后，將酒 精倒出，再加入0. 1 %生汞進行果實表現(xiàn)消毒，輕搖容器，使果實滅菌徹底，然后倒出生汞 液體，再用無菌水沖洗4?5次，采用MS培養(yǎng)基+香蕉汁30g/L+0. 5mg/L NAA+白糖30g/ L+花寶3g/L為基質，培養(yǎng)溫度30±2°C，相對濕度60-80%，每天光照8-12h，光照強度 1000-2000LX，待種子萌發(fā)后，再轉接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L培養(yǎng)基 上進行原球莖誘導增殖，然后轉接至MS+ 土豆汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L+NAA0. 2mg/ L的培養(yǎng)基上進行分化成苗，最后轉接至MS+0. 2mg/LNAA+30g/L土豆汁的培養(yǎng)基上進行壯 苗生根，經煉苗后即可作為大田用苗使用； ii. 將基礎群體置入人工模擬氣候箱中進行培養(yǎng)，調節(jié)溫度控制，使氣候箱中的溫度保 持在30°C以上，根據基礎群體在人工氣候箱中的長勢和有效成分含量由高到低的順序選出 優(yōu)良單株50個； iii. 以ii中選出的優(yōu)良單株50個的蒴果（內含種子）進行植物組織細胞培養(yǎng)擴繁， 獲得50個單株的優(yōu)良后代個體，進行擴繁所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件同ii: iv. 選擇玉山、德興、婺源3個環(huán)繞三清山的種植區(qū)進行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較 試驗，根據試驗結果，從50個后代系中選擇出整體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的的優(yōu)良后 代16個，除去未中選的所有鐵皮石斛植株，并將中選的16個優(yōu)良后代分別疏去部分植株， 并進行相間移植，使其獲得充分受粉，種子成熟后混收種子，即為改良群體； III:運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育 在群體改良的第四個步驟中，選擇所需要的優(yōu)良個體，并利用植物組織細胞培養(yǎng)技術 以蒴果（內含種子）為材料對這些個體進行擴繁獲得后代，然后選擇3個不同種植地區(qū)進 行抗熱鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗，選出抗熱且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良后代培育成新品系； IV.運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁 運用植物組織細胞培養(yǎng)技術根據II(i)的方法與條件以蒴果（內含種子）進行新品系 快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
3.根據權利要求1所述的三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，其特征在于具體步驟如 下： I :鐵皮石斛雜交育種 i. 收集三清山野生鐵皮石斛30份種質，同時收集云南鐵皮石斛36份種質。 ii. 以三清山野生鐵皮石斛粗壯植株為母本，以云南鐵皮石斛粗壯植株為父本，進行雜 交，得到蒴果，實施例2中，經對所收集鐵皮石斛種進行培育，經植株間比較，選出整體表現(xiàn) 較好、有效成分含量高的植株作為新本進行雜交，選擇整體表現(xiàn)較好的標準為：株高、莖桿 形狀和粗壯度、節(jié)間縱紋顏色、葉片顏色這類外觀指標；有效成分含量高的標準是：含鐵皮 石斛多糖即以含葡萄糖計不得少于25. 0 %，含甘露糖為13. 0?38. 0 %，實施例2中的雜交 是指在花期采用人工授粉的形式進行； II :鐵皮石斛群體改良 i.將I(i)得到的蒴果播種在植物組織細胞培養(yǎng)基上萌發(fā)、培養(yǎng)，得到鐵皮石斛植株， 即為基礎群體，鐵皮石斛蒴果的標準為10-11月份選取外表發(fā)黃但未開裂、飽滿的蒴果， 操作方法為：把果實放入干凈的消毒容器中，加入75%酒精浸泡消毒果實，30秒后，將酒 精倒出，再加入0. 1 %生汞進行果實表現(xiàn)消毒，輕搖容器，使果實滅菌徹底，然后倒出生汞 液體，再用無菌水沖洗4?5次，采用MS培養(yǎng)基+香蕉汁30g/L+0. 5mg/LNAA+白糖30g/ L+花寶3g/L為基質，培養(yǎng)溫度30±2°C，相對濕度60-80%，每天光照8-12h，光照強度 1000-2000LX，待種子萌發(fā)后，再轉接至1/2MS+香蕉汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L培養(yǎng)基 上進行原球莖誘導增殖，然后轉接至MS+ 土豆汁30g/L+白糖30g/L+花寶3g/L+NAA0. 2mg/L的培養(yǎng)基上進行分化成苗，最后轉接至MS+O. 2mg/LNAA+30g/L土豆汁的培養(yǎng)基上進行壯 苗生根，經煉苗后即可作為大田用苗使用； ii. 將基礎群體置人工模擬氣候箱中進行培養(yǎng)，調節(jié)溫度控制，使氣候箱中的溫度保持 在30°C以上，根據基礎群體在人工氣候箱中的長勢和有效成分含量由高到低的順序選出優(yōu) 良單株70個； iii. 以ii中選出的優(yōu)良單株70個的莖段或者根莖進行植物組織細胞培養(yǎng)擴繁，獲得 70個單株的優(yōu)良后代個體，進行擴繁所用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件同ii; iv. 選擇玉山、德興、婺源3個環(huán)繞三清山的種植區(qū)進行鐵皮石斛單株優(yōu)良后代的比較 試驗，根據試驗結果，從70個后代系中選擇出整體表現(xiàn)較好、有效成分含量高的的優(yōu)良后 代20個，除去未中選的所有鐵皮石斛植株，并將中選的20個優(yōu)良后代分別疏去部分植株， 并進行相間移植，使其獲得充分受粉，種子成熟后混收種子，即為改良群體； III:運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良品系選育 在群體改良的第四個步驟中，選擇所需要的優(yōu)良個體，并利用植物組織細胞培養(yǎng)技術 以莖段或根莖為材料對這些個體進行擴繁獲得后代，然后選擇3個不同種植地區(qū)進行抗熱 鐵皮石斛穩(wěn)定性試驗，選出抗熱且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良后代培育成新品系； IV.運用植物組織細胞培養(yǎng)技術進行鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁 運用植物組織細胞培養(yǎng)技術根據II(i)的方法與條件以莖段或根莖為材料進行新品 系快速繁殖，得到抗熱穩(wěn)定且有效成分含量測定高的鐵皮石斛優(yōu)良種苗。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種三清山抗熱鐵皮石斛種苗培育方法，通過鐵皮石斛雜交育種→鐵皮石斛群體改良→鐵皮石斛優(yōu)良品系選育→鐵皮石斛優(yōu)良種苗的擴繁，本發(fā)明提高了鐵皮石斛優(yōu)良種苗選育的準確性，加快雜交育種的速度，大大提高了鐵皮石斛育種效率；快速地為鐵皮石斛大田生產提供能夠保證鐵皮石斛質量且抗熱穩(wěn)定的優(yōu)良種苗。
【IPC分類】A01H4-00
【公開號】CN104542293
【申請?zhí)枴緾N201510008369
【發(fā)明人】劉慧芬
【申請人】江西瀚野農業(yè)開發(fā)有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月1日