專利名稱：大量生產(chǎn)人工種用馬鈴薯(馬鈴薯微塊莖)的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及利用植物組織培養(yǎng)技術大量生產(chǎn)無病原菌(尤其是病毒)的人工種用馬鈴薯(馬鈴薯微塊莖)的新的改進方法。
馬鈴薯是一種Solanaceae科的植物，其特征在于通過塊莖進行繁殖。在大量繁殖中，普遍存在的一個極其嚴重的問題是病毒感染造成減產(chǎn)，這種危害在馬鈴薯中顯得特別嚴重(Manzer，F(xiàn).E.，Merriam，D.C.andHelper，P.R.，1978，Am.PotatoJour.，55∶601-609;Schultz，E.S.ar. Bonde，R.，1944，Am.PotatoJ.，21∶278-283;Wright，N.S.，1977，Am.PotatoJ.，54∶147-149;Korea′sseedpotatoprogramorganization，impactandissues，1987，InternationalPotatoCenter，pp19-24)。因此，保證供應無病毒種用馬鈴薯在決定每年塊莖作物的產(chǎn)量方面起著極其重要的作用。
業(yè)已知道，大多數(shù)病毒感染是由蚜蟲引起的，蚜蟲通過其口很容易傳播病毒。因此，為了生產(chǎn)無病毒種用馬鈴薯，種用馬鈴薯生產(chǎn)區(qū)必須位于帶病毒的蚜蟲群集很少的高山區(qū)。然而采用這種傳統(tǒng)方法，生產(chǎn)無病毒種用馬鈴薯的效率很低，很難滿足每年所需要的大量優(yōu)質種用馬鈴薯。
近來由于植物組織培養(yǎng)技術的迅速發(fā)展，已能采用試管技術大量繁殖許多種植物。用馬鈴薯苗尖組織培養(yǎng)技術迅速繁殖無病毒幼苗的體系已經(jīng)建立(Goodwin，P.B.，Kim，Y.C.andAdisarwanto，T.，1980，PotatoRes.，23∶9-23;Hussey，G.andStacey，N.J.，1981，Ann.Bot.，48∶787-796;Roset，S.andBokelmann，G.S.，1976，PotatoRes.，19∶173-178)，并已有一定量的產(chǎn)品見諸于市。但就生產(chǎn)效率而言，上述體系還存在若干嚴重的缺陷，其中之一則是從試管移植到土壤的過程是一個耗時費力的過程，在該過程中需要十分小心，許多在試管中培養(yǎng)的嬌嫩的馬鈴薯幼苗經(jīng)不住生長環(huán)境的突然變化。
自1970年以來，有關試管生長馬鈴薯微塊莖的若干報告已經(jīng)發(fā)表，但其生產(chǎn)效率極低，致使研究人員只能利用這種微塊莖形成現(xiàn)象作為研究馬鈴薯塊莖形成生理的試驗手段(Garcia-Torres，L.andGomez-Campo.C.，1973，PotatoRes.，16∶73-79;Abbott，A.J.andBelcher，A.R.，1986，InPlantTissueCultureanditsAgriculturalapplications，Butterworths，pp.113-122，Hussey，G.andStacey，N.J.，1984，Ann.Bot.53∶565-578)。
近來也有人試圖采用液體培養(yǎng)方法種植試管生產(chǎn)的馬鈴薯微塊莖，以生產(chǎn)大量無病毒優(yōu)質種用馬鈴薯(Wang，P.J.andHu，C.Y.1982，Amer.PotatoJour.，59∶33-39，InternationalpatentapplicationNumberPCT/HU86/00053，1986)。但是，采用上述方法生產(chǎn)微塊莖的效率仍然很低，不足以取代天然種用馬鈴薯。何況采用上述液體培養(yǎng)方法生產(chǎn)的微塊莖還存在某些嚴重的缺陷，例如貯藏期間易于脫水，微塊莖經(jīng)常發(fā)生玻璃化，不能用作人工種用馬鈴薯。盡管存在這許多問題，通過馬鈴薯苗的組織培養(yǎng)產(chǎn)生的馬鈴薯微塊莖似乎仍可用來代替馬鈴薯苗尖，因為馬鈴薯微塊莖不太嬌嫩，移栽時給組織培養(yǎng)產(chǎn)生的幼苗更易于處理。由于馬鈴薯繁殖的特點，畢竟每年所需要的種用馬鈴薯的量很大，即使證明微塊莖可以應用，但其意義幾乎被認為等于零，除非研究一些其他方法，能在很小的空間內大量生產(chǎn)微塊莖，從而能以足夠低的價格將它們供應給農(nóng)民，以代替天然的種用馬鈴薯。
因此，本發(fā)明的目的在于研究大量生產(chǎn)廉價馬鈴薯微塊莖的改進方法，足以將它們直接供給農(nóng)民，以便真正取代天然種用馬鈴薯。
根據(jù)本發(fā)明的任務及其優(yōu)點，研究用于大量生產(chǎn)無病原菌的人工種用馬鈴薯(馬鈴薯微塊莖)的植物組織培養(yǎng)的改進方法，這種馬鈴薯微塊莖在生產(chǎn)天然種用馬鈴薯前能代替天然種用馬鈴薯或用作種用馬鈴薯代用品?，F(xiàn)在本發(fā)明的結果已能大量生產(chǎn)人工種用馬鈴薯，與已知微塊莖生產(chǎn)方法相比，效率至少為已知方法的30倍。因此，由于本發(fā)明的結果，已有可能生產(chǎn)廉價人工種用馬鈴薯，足能供給農(nóng)民以取代天然種用馬鈴薯。從本發(fā)明的附圖及詳盡說明中，將清楚地了解本發(fā)明的其他目的及其優(yōu)點。


圖1在培養(yǎng)皿快速繁殖人工培養(yǎng)基上的優(yōu)良品種的形成微塊莖苗。
圖2優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖在培養(yǎng)皿中的人工培養(yǎng)基上快速形成。
圖3優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖長期無菌保藏在低溫條件下的培養(yǎng)皿中。
圖4即將收獲由微塊莖長成的馬鈴薯。
圖5由優(yōu)良品種的微塊莖產(chǎn)生的植株中收獲到的馬鈴薯的平均產(chǎn)量。
本發(fā)明大量生產(chǎn)人工種用馬鈴薯的整個方法包括若干步驟。下述試驗將更詳盡地說明本發(fā)明的實施，但并不限制本發(fā)明。
實施例1誘導、保持和大量繁殖形成微塊莖的無病毒馬鈴薯苗的方法的建立從農(nóng)業(yè)開發(fā)局園藝試驗站獲得的優(yōu)良品種的無病毒馬鈴薯作為試驗材料。將該馬鈴薯用自來水洗凈后，浸在70%乙醇中3分鐘，再用20%Clolox(商品)表面消毒10分鐘，最后種在裝有經(jīng)過消毒的土壤(蛭石∶珍珠巖＝1∶1)的方缽中。約一周后，在25℃恒溫培養(yǎng)和16小時光照周期的培養(yǎng)室中塊莖開始萌芽。
兩周后，苗平均長到大約5-10cm高時，切下1-2cm長的苗尖，用作苗尖培養(yǎng)的基本材料。將切下的苗尖在無菌蒸餾水中洗滌3次，浸在70%乙醇中30秒鐘，用10%Clorox表面消毒10分鐘，最后接種到特殊配制的液體或固體培養(yǎng)基(見表2)上誘導和繁殖形成微塊莖的苗尖。
培養(yǎng)室的環(huán)境條件與母體塊莖發(fā)芽的條件相同。在這樣的培養(yǎng)環(huán)境中，接種后一周，開始出現(xiàn)腋生枝，在大多數(shù)情況下，3-4周后生長迅速，需要進行次代培養(yǎng)。此時需采用離體壓條技術，以最大限度地刺激誘導腋生枝的生長，但在燒瓶或試管中，該項技術需要豐富的經(jīng)驗，使在該試驗中腋生枝能在平底培養(yǎng)皿(直徑10cm，高1.5cm)中生長，從而自動誘導離體壓條，大量增加腋生枝(見表3)。一般說來，液體培養(yǎng)的生長速度比固體培養(yǎng)快。但是當液體培養(yǎng)經(jīng)過長時間的次代培養(yǎng)后，由于吸收過量的水分導致生長衰退或玻璃化，經(jīng)常發(fā)生抑制馬鈴薯試管苗的正常生長。因此，最好在開始階段僅用液體培養(yǎng)基，以后則主要用固體培養(yǎng)基。
值得注意的是所有在人工培養(yǎng)基上繁殖的苗，在轉入到產(chǎn)生微塊莖條件的下一階段時，并不都形成微塊莖，僅具有特殊性狀的苗才能形成微塊莖，換言之，只有那些帶無柄葉的節(jié)間略長的、根部生長健壯，尤其是帶鉤狀苗尖的那些苗(見圖1)才能大量產(chǎn)生微塊莖(見表5)。本文中將這些具有特殊性狀的苗稱為“形成微塊莖苗”，并作為專利植物細胞系登記保藏在南朝鮮典型培養(yǎng)物保藏中心(KCTC)(良種專利細胞系№8445P)。這些產(chǎn)生馬鈴薯微塊莖的苗僅僅在含有特殊組份的誘導形成微塊莖的培養(yǎng)基上才能形成，并且一旦形成后，至少在每年連續(xù)次代培養(yǎng)24次后仍能保持其形成微塊莖的特征。
實施例2大量生產(chǎn)馬鈴薯微塊莖的方法將實施例1所述在迅速繁殖階段中的形成微塊莖苗首先轉移到高溫(30℃)培養(yǎng)室(其他培養(yǎng)條件與上述形成微塊莖苗的繁殖培養(yǎng)基相同)培養(yǎng)一周，然后移到完全黑暗的低溫(10℃)培養(yǎng)室再培養(yǎng)一周。經(jīng)低溫處理過的形成微塊莖苗在微塊莖誘導培養(yǎng)基(見表2和4)上溫育，用石蠟密封置于培養(yǎng)室內培養(yǎng)，培養(yǎng)室內的溫度白天保持20℃，夜間保持12℃，光照周期為6小時光照，18小時黑暗，光強度約為500勒克司。為了充分利用培養(yǎng)室的空間，盡可能將培養(yǎng)皿擠放在一起。在大多數(shù)情況下，大約在將它們轉移到所述微塊莖誘導條件后10天，開始形成馬鈴薯微塊莖，培養(yǎng)40至50天后，每個培養(yǎng)皿上形成的微塊莖平均10個以上，長得黃豆般大小(見圖2)。
將濃度為50ppm的氯化磷、Amo-1618、B-905(N-二甲基-氨基琥珀酰胺酸)和氯化氯膽堿(CCC)等生長抑制劑加到培養(yǎng)基中，則微塊莖的產(chǎn)率可顯著提高。
在優(yōu)良品種的情況下，以一個人的培養(yǎng)空間單位的生產(chǎn)效率進行對比研究，說明在用不形成微塊莖苗并按燒瓶液體培養(yǎng)的傳統(tǒng)方法和用本發(fā)明的形成微塊莖苗(包括用于提高微塊莖誘導效率的所有其他處理)并按培養(yǎng)皿固體培養(yǎng)方法之間不同的結果。結果示于表6和表7。
實施例3馬鈴薯微塊莖的長期保藏方法和保藏期間抑制和刺激發(fā)芽的方法在培養(yǎng)皿大量生產(chǎn)的優(yōu)良品種微塊莖經(jīng)無菌收獲后，用無菌蒸餾水沖洗3-4次，洗去留在表面上的培養(yǎng)基。將它們平置于干凈的種植臺中干燥至表面水分完全去除。把干微塊莖放置在空的無菌培養(yǎng)皿中，用3層石蠟密封后放入4℃低溫冰箱中(見圖3)。在冰箱中大約放置2個月后，打破了休眠狀態(tài)，然后如果需要可在室溫條件下大約2周就很容易發(fā)芽(見表8)。需要將它們保藏很長時間而不需要發(fā)芽時，可先用5mg/l脫落酸溶液處理3小時，然后低溫保藏。采用這種方法就能在安全條件下，將微塊莖保藏一年以上，而且已經(jīng)證明發(fā)芽率并未喪失或被抑制(見表9)。如果在收獲后需要立即誘導發(fā)芽，則用赤霉酸處理或先用38℃溫浴處理后再用赤霉酸處理打破休眠的方法，可使其早發(fā)芽(見表8)。這種赤霉素和高溫處理也可用于縮短休眠已經(jīng)打破的微塊莖發(fā)芽所需要的時間(見表10)。
實施例4優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖的產(chǎn)量試驗為了將天然種用馬鈴薯和馬鈴薯微塊莖進行產(chǎn)量對比，進行了驗證試驗。當按實施例3所述進行發(fā)芽處理后，發(fā)芽微塊莖的節(jié)長達到2-3cm時，將微塊莖直播在土壤中。與天然種用馬鈴薯相比，在早期，微塊莖生長相當差，但在中期后，生長非常迅速。在播種后三個月收獲時，土壤上的微塊莖長得比天然種用馬鈴薯高2/3。單株的最終產(chǎn)量與土壤上的生長速度幾乎成相同比例。由馬鈴薯長出的植株，其馬鈴薯的單株產(chǎn)量約507克，而天然種用馬鈴薯的單株產(chǎn)量約812克(見表11和圖4、5)。換句話說，如果它們按與天然種用馬鈴薯同樣的方法進行播種，則馬鈴薯微塊莖的平均產(chǎn)量約為天然種用馬鈴薯產(chǎn)量的60-70%。然而由于微塊莖長出的植株比天然種用馬鈴薯長出的植株小，所以密植有可能增加前者的單位面積產(chǎn)量。
表1用于誘導和大量繁殖優(yōu)良馬鈴薯品種的形成微塊莖苗的培養(yǎng)基組合物的組份組份含量(mg/l)硝酸銨2，000.000硝酸鉀2，500.000氯化鈣2H2O 440.000硫酸鎂7H2O 370.000磷酸鉀170.000乙二胺四乙酸二鈉37.250硫酸亞鐵7H2O 27.850硫酸錳H2O 16.900硼酸6.200硫酸鋅7H2O 8.600碘化鉀0.830鉬酸鈉2H2O 0.250硫酸銅5H2O 0.025氯化鈷6H2O 0.025Staba復合維生素組分見表2肌醇100.000抗壞血酸50.000赤霉酸(GA)0.100核苷玉米素0.100蔗糖20，000.000瓊脂10，000.000培養(yǎng)基pH＝5.7
表2產(chǎn)生和大量快速繁殖優(yōu)良馬鈴薯品種的形成微塊莖苗的培養(yǎng)基中所加Staba復合維生素組合物的組份組份含量/升維生素B121.5mg維生素Bc0.5mg維生素B20.5mg生物素1.0mg膽堿鹽酸鹽1.0mg泛酸鈣1.0mg維生素B11.0mg維生素PP2.0mg維生素B6鹽酸鹽 2.0mg對氨基苯甲酸0.5mg表3優(yōu)良馬鈴薯品種用培養(yǎng)皿組織培養(yǎng)的離體壓條技術對增加腋生枝數(shù)量的影響培養(yǎng)方法＊腋生枝數(shù)250ml燒瓶培養(yǎng)4±1.6＊＊培養(yǎng)皿培養(yǎng)13±3.5＊接種1株初生苗(3cm高)培養(yǎng)4周后腋生枝的數(shù)目。
＊＊每個處理20株培養(yǎng)物的平均±S.D.
表4用于大量生產(chǎn)優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖的培養(yǎng)基組合物的組分組份含量(mg/l)硝酸銨1，000.000硝酸鉀1，500.000氯化鈣2H2O 440.000硫酸鎂7H2O 370.000硫酸鎂500.000磷酸鉀37.250乙二胺四乙酸二鈉27.850硫酸亞鐵7H2O 16.900硫酸錳H2O 6.200硼酸8.600硫酸鋅7H2O 0.830碘化鉀0.250鉬酸鈉2H2O 0.025硫酸銅5H2O 0.025Staba復合維生素組分見表2肌醇100.000抗壞血酸50.000氯化氯膽堿(CCC)100.000核苷玉米素0.100蔗糖90，000.000瓊脂10，000.000培養(yǎng)基pH＝5.7
表5形成微塊莖苗和普通(不形成微塊莖)苗(均為優(yōu)良馬鈴薯品種)之間培養(yǎng)環(huán)境條件對微塊莖生產(chǎn)效率影響的對比每個培養(yǎng)皿產(chǎn)生微塊莖數(shù)普通苗在正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)＊0普通苗在微塊莖誘導條件下培養(yǎng)＊＊2±1.2形成微塊莖苗在正常培養(yǎng)條件下培養(yǎng)2±0.7形成微塊莖苗在微塊莖誘導條件下培養(yǎng)10±3.5＊25℃恒溫培養(yǎng)，16小時光照和8小時黑暗的光照周期。所用培養(yǎng)基與用于形成微塊莖苗繁殖的相同。
＊＊使用微塊莖誘導培養(yǎng)基，苗經(jīng)高溫(30℃)和黑暗低溫(10℃)預處理，培養(yǎng)溫度白天20℃，夜間12℃，6小時光照和18小時黑暗的光照周期，光照強度約500勒克司。
表6兩種不同培養(yǎng)方法(均為優(yōu)良品種)每個培養(yǎng)空間單位馬鈴薯微塊莖生產(chǎn)效率的對比每個培養(yǎng)空間單位＊培養(yǎng)方法之間培養(yǎng)方法產(chǎn)生的微塊莖數(shù)＊＊的生產(chǎn)效率a.燒瓶培養(yǎng)法＊＊＊385±42.2＊＊＊＊(用液體培養(yǎng)基)b/a＝31.9b.培養(yǎng)皿培養(yǎng)法＊＊＊＊＊12.280±981.4(用固體培養(yǎng)基)＊采用直徑120cm寬70cm高30cm的培養(yǎng)架。
＊＊直徑5cm和重100mg以上的微塊莖播種在土壤上時實際上用作種用馬鈴薯。
＊＊＊采用250ml的錐形燒瓶。
＊＊＊＊3個重復的平均±S.D.。
＊＊＊＊＊采用直徑10cm高1.5cm的培養(yǎng)皿。
表7按表6所述培養(yǎng)方法培養(yǎng)優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖生產(chǎn)效率的具體對比培養(yǎng)每個培養(yǎng)皿產(chǎn)生微塊莖生產(chǎn)時每個培養(yǎng)空間單方法微塊莖的平均數(shù)需培養(yǎng)時間位放置培養(yǎng)皿數(shù)a.燒瓶培養(yǎng)法514-16周1b.培養(yǎng)皿培養(yǎng)法108-10周10具體生產(chǎn)效率的對比2倍1.5倍10倍總生產(chǎn)效率的對比2×1.5×10＝約30倍＊＊對比說明按本發(fā)明的培養(yǎng)皿培養(yǎng)方法的生產(chǎn)率效約為傳統(tǒng)燒瓶培養(yǎng)方法的30倍。
表8低溫保藏的時間和赤霉酸處理＊對打破優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖休眠狀態(tài)的影響收獲后低溫保藏時間發(fā)芽率(%)＊＊經(jīng)赤霉酸處理的發(fā)芽率(%)1周052周0203周10604周25905周50956周80977周95958周9595＊經(jīng)5ppm濃度室溫處理1小時。
＊＊室溫條件下兩周后檢查發(fā)芽率。
表9低溫保藏期間脫落酸處理＊對抑制優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖發(fā)芽的影響處理抑制時間低溫保藏，未經(jīng)ABA處理6個月低溫保藏，經(jīng)ABA處理12個月＊經(jīng)10ppm濃度室溫處理3小時表10溫浴(38℃，1小時)和赤霉酸處理(5ppm，室溫，1小時)對刺激已經(jīng)打破休眠狀態(tài)的優(yōu)良品種的馬鈴薯微塊莖發(fā)芽的影響處理微塊莖＊達到90%以上發(fā)芽＊＊所需時間未處理14天GA處理7天38℃溫浴處理10天GA+38℃溫浴處理4天＊已經(jīng)打破休眼狀態(tài)的微塊莖＊＊處于節(jié)長1mm以上肉眼可看見的發(fā)芽狀態(tài)表11馬鈴薯微塊莖和天然種用馬鈴薯(均為優(yōu)良品種)單株產(chǎn)量＊對比處理平均產(chǎn)量馬鈴薯微塊莖507±156.5g天然種用馬鈴薯812±230.8g＊系微塊莖和天然種用馬鈴薯各30株的平均產(chǎn)量
權利要求
1.大量生產(chǎn)馬鈴薯微塊莖的方法，其特征在于使用含有特殊組份的培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿由優(yōu)良品種的無病毒馬鈴薯誘導和快速繁殖特殊的形成微塊莖苗和應用含有特殊組份的培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿培養(yǎng)方法，大量生產(chǎn)微塊莖。
2.用于誘導和快速繁殖權利要求1所述的形成微塊莖苗的培養(yǎng)基組合物，該組合物的組份為硝酸銨2000mg/l，硝酸鉀2500mg/l，氯化鈣2H2O 440mg/l，硫酸鎂7H2O 370mg/l，磷酸鉀170mg/l，乙二胺四乙酸二鈉37.25mg/l，硫酸亞鐵7H2O 27.85mg，硫酸錳H2O 16.90mg/l，硼酸6.20mg/l，硫酸鋅7H2O 8.60mg/l，碘化鉀0.83mg/l，鉬酸鈉2H2O 0.25mg/L硫酸銅5H2O 0.025mg/l，氯化鈷6H2O 0.025mg/l，Staba復合維生素(維生素B121.5mg/l，維生素Bc 0.5mg/l，維生素B20.5mg/l，生物素1.0mg/l，膽堿鹽酸鹽1.0mg/l，泛酸鈣1.0mg/l，維生素B11.0mg/l，維生素PP 2.0mg/l，維生素B6鹽酸鹽2.0mg/l，對氨基苯甲酸0.5mg/l)，肌醇100mg/l，抗壞血酸50mg/l，赤霉酸(GA)0.10mg/l，核苷玉米素0.10mg/l，蔗糖20000mg/l，瓊脂10000mg/l。
3.按權利要求1的方法，其中形成微塊莖苗是由用權利要求2所述培養(yǎng)基誘導的細胞系(KCTC8445P，ATCC No.)。
4.離體自動壓條(水平而不是垂直培養(yǎng)馬鈴薯苗)的方法，其中使用例如形狀像陪替氏培養(yǎng)皿的平底培養(yǎng)皿最大限度地誘導權利要求1所述的腋生枝。
5.用于大量生產(chǎn)權利要求1所述馬鈴薯微塊莖的培養(yǎng)基組合物，該組合物的組份為硝酸銨1000mg/l，硝酸鉀1500mg/l，氯化鈣2H2O 440mg/l，硫酸鎂7H2O 370mg/l，磷酸鉀500mg/l，乙二胺四乙酸二鈉37.25mg/l，硫酸亞鐵7H2O 27.85mg，硫酸錳H2O 16.90mg/l，硼酸6.20mg/l，硫酸鋅7H2O 8.60mg/l，碘化鉀0.83mg/l，鉬酸鈉2H2O 0.25mg/l，硫酸銅5H2O 0.025mg/l，氯化鈷6H2O 0.025mg/l，Staba復合維生素(維生素B121.5mg/l，維生素Bc 0.5mg/l，維生素B20.5mg/l，生物素1.0mg/l，膽堿鹽酸鹽1.0mg/l，泛酸鈣1.0mg/l，維生素B11.0mg/l，維生素PP 2.0mg/l，維生素B6鹽酸鹽2.0mg/l，對氨基苯甲酸0.5mg/l)，肌醇100mg/l，抗壞血酸50mg/l，氯化氯膽堿(CCC)100mg/l，核苷玉米素0.1mg/l，蔗糖90000mg/l，瓊脂1000mg/l。
6.將50-100ppm的生長抑制劑加到微塊莖生產(chǎn)培養(yǎng)基中的方法，以提高微塊莖的生產(chǎn)效率，所述生長抑制劑，例如有氯化磷(2，4-二氯芐三丁基氯化磷)，Amo-1618(5-羥基香芹基)三氯化甲基哌啶羧酸銨)，B-905(N-二甲基-氨基琥珀酸)和氯化氯膽堿(CCC)。
7.一種預處理方法，該方法是在高溫(30℃)和低溫(10℃)黑暗條件下處理用于誘導權利要求1所述馬鈴薯微塊莖苗，其溫度按白天(20℃)至夜間(12℃)的范圍內變化。
8.保藏按權利要求1和3所述方法收獲的馬鈴薯微塊莖的方法，該方法是在低溫下長期保藏，其特征在于在保藏期間用脫落酸處理抑制發(fā)芽。
9.使用和放置任何形狀的類似于陪替氏培養(yǎng)皿(高度低于3cm)的方法，以最充分地利用權利要求1，3和4所述培養(yǎng)空間。
10.打破休眠狀態(tài)的方法，該方法是在4℃低溫下保藏微塊莖，然后僅用5ppm以上濃度的赤霉酸處理或結合38℃溫水浴處理，刺激發(fā)芽。
11.優(yōu)良品種的馬鈴薯(KCTC 8445P，ATCC)形成微塊莖苗，所述優(yōu)良品種馬鈴薯屬于Solanum tuberosum L.Solanaceae。
全文摘要
應用植物組織培養(yǎng)技術大量生產(chǎn)無病原菌人工種用馬鈴薯(馬鈴薯微塊莖)的改進方法，其中使用特殊的形成微塊莖苗、微塊莖生產(chǎn)培養(yǎng)基的特殊配方，獨特的培養(yǎng)條件，以及結合使用平底培養(yǎng)皿。大田試驗證明，人工種用馬鈴薯(馬鈴薯微塊莖)確能成功地用來代替天然種用馬鈴薯。
文檔編號A01C1/00GK1045906SQ9010133
公開日1990年10月10日 申請日期1990年3月10日 優(yōu)先權日1989年3月11日
發(fā)明者鄭革, 劉長烈, 丘廷淑, 梁承均, 李幸順, 田在興, 洪周奉 申請人:南朝鮮科學技術研究院