本發(fā)明涉及花卉組培繁育領域，具體涉及一種白芨組培快繁方法。

背景技術：

白芨又名連及草、甘根、白給、箬蘭、朱蘭、紫蘭、紫蕙、百笠，為蘭科白芨屬多年生草本植物，廣泛分布于我國長江流域各省，主產(chǎn)于貴州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陜西等地。白芨不僅具有較高的觀賞價值，也是我國重要的中藥材之一，以塊莖入藥，能收斂止血、消腫生肌，廣泛應用于治療肺結(jié)核及支氣管擴張咳血、胃潰瘍出血等癥。

長期以來，白芨市場主要依靠野生資源，隨著需求量的增加以及價格的高漲，導致野生資源日漸枯竭。因此，解決白芨種苗快速繁殖技術是緩解市場供需矛盾的關鍵?，F(xiàn)有的白芨種苗組培快繁多采用種子播種到固體培養(yǎng)基，然后經(jīng)繼代及生根最終生產(chǎn)出組培苗。然而，現(xiàn)有白芨組培快繁技術在種子萌發(fā)率、移栽成活率、組培苗生根及球莖大小等方面還有待進一步改進。

技術實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提供了一種白芨組培快繁方法，該種組培繁育方法簡單易行，能提高種子萌發(fā)率、縮短培養(yǎng)時間、提高獲得的組培苗球莖大小、提高生根率及移栽成活率，以便快速繁殖白芨組培苗，滿足市場需要，適宜推廣應用。

為了達到上述目的，本發(fā)明通過以下技術方案來實現(xiàn)的：

一種白芨組培快繁方法，按照以下步驟進行：

(1)外植體消毒：選取健康無病的白芨種子作為外植體，用清水洗去種子表面的毛和異物，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先用無菌水洗滌2-4次，放入濃度為75％的酒精中浸泡30-40s，再用無菌水洗滌2-4次，后置于濃度為0.1～0.3％的升汞溶液中消毒5～15min，期間不停的搖動，使其消毒徹底，消毒結(jié)束后無菌水洗滌4-6次，最后用無菌濾紙吸干表面水分待用；

(2)接種誘導：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，促使發(fā)芽成苗，且接種誘導培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為17±2℃，室內(nèi)相對濕度78％-82％，室內(nèi)光照強度為1000-1200lx，光照時間設定為12±1h/d；

(3)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段2.0-4.0cm，轉(zhuǎn)入到繼代培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為18±2℃，室內(nèi)相對濕度76％-80％，室內(nèi)光照強度為1000-1200lx，光照時間設定為12±1h/d；

(4)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長至2.0-6.0cm時，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為18±2℃，室內(nèi)相對濕度76％-80％，室內(nèi)光照強度為1000-1200lx，光照時間設定為12±1h/d。

優(yōu)選地，在步驟(2)中，所述固體培養(yǎng)基是由ls培養(yǎng)基和wpm培養(yǎng)基兩種基本培養(yǎng)基組成的。

進一步地，所述ls培養(yǎng)基和wpm培養(yǎng)基兩種基本培養(yǎng)基的成分占比為(2-4):1。

進一步地，在步驟(2)中，在所述的固體培養(yǎng)基中還添加4-8g/l蛋白胨、1-3g/l瓊脂、10-20g/l蔗糖以及0.1-0.3mg/liba。

優(yōu)選地，在步驟(3)中，所述繼代培養(yǎng)基是以1/2ms為基本培養(yǎng)基。

進一步地，在所述的繼代培養(yǎng)基中還添加0.2-0.4mg/liba、0.4-0.6mg/lnaa、20-30g/l甘露醇、15-25g/l蔗糖以及3.0-5.0g/l瓊脂。

優(yōu)選地，在步驟(4)中，所述生根培養(yǎng)基是以b5為基本培養(yǎng)基。

進一步地，在所述的生根培養(yǎng)基中還添加0.2-0.4mg/liba、0.4-0.6mg/lnaa、6-10g/l蛋白胨、20-30g/l蔗糖以及3.0-5.0g/l瓊脂。

本發(fā)明具有如下的有益效果：

(1)本發(fā)明的白芨組培快繁方法出芽速度快，增殖率高，可在45-55天內(nèi)獲得成品生根苗，且在人為控制條件下進行，不受季節(jié)、氣候條件與土壤等因素的制約，可排除病蟲害的侵襲和農(nóng)藥殘留的影響，嚴格控制、保證了白芨組培苗的質(zhì)量；

(2)本發(fā)明的白芨組培快繁方法采用多種不同基本培養(yǎng)基以及營養(yǎng)液對白芨外植體進行栽培，為白芨組培苗提供了充足的營養(yǎng)成分，促使白芨組培苗快速生長，獲得根系發(fā)達、球莖大、植株健壯，移栽成活率高的優(yōu)良組培苗；

(3)本發(fā)明的白芨組培快繁方法簡單易行，育苗成本大大降低，能大大提高了白芨的種子萌發(fā)率，使其萌發(fā)率達到98％以上。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明的具體實施方式作進一步描述，以下實施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護范圍。

實施例1

一種白芨組培快繁方法，按照以下步驟進行：

(1)外植體消毒：選取健康無病的白芨種子作為外植體，用清水洗去種子表面的毛和異物，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先用無菌水洗滌2次，放入濃度為75％的酒精中浸泡30s，再用無菌水洗滌2次，后置于濃度為0.1％的升汞溶液中消毒5min，期間不停的搖動，使其消毒徹底，消毒結(jié)束后無菌水洗滌4次，最后用無菌濾紙吸干表面水分待用；

(2)接種誘導：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，促使發(fā)芽成苗，所述固體培養(yǎng)基是由ls培養(yǎng)基和wpm培養(yǎng)基兩種基本培養(yǎng)基按2:1的成分比組成的；

另外，在所述的固體培養(yǎng)基中還添加4g/l蛋白胨、1g/l瓊脂、10g/l蔗糖以及0.1mg/liba；

且接種誘導培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為15℃，室內(nèi)相對濕度78％，室內(nèi)光照強度為1000lx，光照時間設定為11h/d；

(3)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段2.0cm，轉(zhuǎn)入到繼代培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，所述繼代培養(yǎng)基是以1/2ms為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的繼代培養(yǎng)基中還添加0.2mg/liba、0.4mg/lnaa、20g/l甘露醇、15g/l蔗糖以及3.0g/l瓊脂；

且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為16℃，室內(nèi)相對濕度76％，室內(nèi)光照強度為1000lx，光照時間設定為11h/d；

(4)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長至2.0cm時，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基是以b5為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的生根培養(yǎng)基中還添加0.2mg/liba、0.4mg/lnaa、6g/l蛋白胨、20g/l蔗糖以及3.0g/l瓊脂；

且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為16℃，室內(nèi)相對濕度76％，室內(nèi)光照強度為1000lx，光照時間設定為11h/d。

(5)上述步驟完成后便得到了成品的白芨組培苗，就可以進行之后的移栽煉苗處理。

實施例2

一種白芨組培快繁方法，按照以下步驟進行：

(1)外植體消毒：選取健康無病的白芨種子作為外植體，用清水洗去種子表面的毛和異物，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先用無菌水洗滌3次，放入濃度為75％的酒精中浸泡35s，再用無菌水洗滌3次，后置于濃度為0.2％的升汞溶液中消毒10min，期間不停的搖動，使其消毒徹底，消毒結(jié)束后無菌水洗滌5次，最后用無菌濾紙吸干表面水分待用；

(2)接種誘導：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，促使發(fā)芽成苗，所述固體培養(yǎng)基是由ls培養(yǎng)基和wpm培養(yǎng)基兩種基本培養(yǎng)基按3:1的成分比組成的；

另外，在所述的固體培養(yǎng)基中還添加6g/l蛋白胨、2g/l瓊脂、15g/l蔗糖以及0.2mg/liba；

且接種誘導培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為17℃，室內(nèi)相對濕度80％，室內(nèi)光照強度為1100lx，光照時間設定為12h/d；

(3)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段3.0cm，轉(zhuǎn)入到繼代培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，所述繼代培養(yǎng)基是以1/2ms為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的繼代培養(yǎng)基中還添加0.3mg/liba、0.5mg/lnaa、25g/l甘露醇、20g/l蔗糖以及4.0g/l瓊脂；

且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為18℃，室內(nèi)相對濕度78％，室內(nèi)光照強度為1100lx，光照時間設定為12h/d；

(4)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長至4.0cm時，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基是以b5為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的生根培養(yǎng)基中還添加0.3mg/liba、0.5mg/lnaa、8g/l蛋白胨、25g/l蔗糖以及4.0g/l瓊脂；

且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為18℃，室內(nèi)相對濕度78％，室內(nèi)光照強度為1100lx，光照時間設定為12h/d。

(5)上述步驟完成后便得到了成品的白芨組培苗，就可以進行之后的移栽煉苗處理。

實施例3

一種白芨組培快繁方法，按照以下步驟進行：

(1)外植體消毒：選取健康無病的白芨種子作為外植體，用清水洗去種子表面的毛和異物，然后轉(zhuǎn)移至超凈工作臺，先用無菌水洗滌4次，放入濃度為75％的酒精中浸泡40s，再用無菌水洗滌4次，后置于濃度為0.3％的升汞溶液中消毒15min，期間不停的搖動，使其消毒徹底，消毒結(jié)束后無菌水洗滌6次，最后用無菌濾紙吸干表面水分待用；

(2)接種誘導：將步驟(1)消毒后的外植體接種于固體培養(yǎng)基上進行愈傷誘導，促使發(fā)芽成苗，所述固體培養(yǎng)基是由ls培養(yǎng)基和wpm培養(yǎng)基兩種基本培養(yǎng)基按4:1的成分比組成的；

另外，在所述的固體培養(yǎng)基中還添加8g/l蛋白胨、3g/l瓊脂、20g/l蔗糖以及0.3mg/liba；

且接種誘導培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為19℃，室內(nèi)相對濕度82％，室內(nèi)光照強度為1200lx，光照時間設定為13h/d；

(3)增值繼代培養(yǎng)：切取步驟(2)中形成的幼苗莖段4.0cm，轉(zhuǎn)入到繼代培養(yǎng)基中，直至莖段增殖，得叢生芽，所述繼代培養(yǎng)基是以1/2ms為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的繼代培養(yǎng)基中還添加0.4mg/liba、0.6mg/lnaa、30g/l甘露醇、25g/l蔗糖以及5.0g/l瓊脂；

且增值繼代培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為20℃，室內(nèi)相對濕度80％，室內(nèi)光照強度為1200lx，光照時間設定為13h/d；

(4)生根培養(yǎng)：待所述叢生芽的單芽長至6.0cm時，將郁金香組培苗移植至生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基是以b5為基本培養(yǎng)基；

另外，在所述的生根培養(yǎng)基中還添加0.4mg/liba、0.6mg/lnaa、10g/l蛋白胨、30g/l蔗糖以及5.0g/l瓊脂；

且生根培養(yǎng)的環(huán)境條件為：室內(nèi)溫度為20℃，室內(nèi)相對濕度80％，室內(nèi)光照強度為1200lx，光照時間設定為13h/d。

(5)上述步驟完成后便得到了成品的白芨組培苗，就可以進行之后的移栽煉苗處理。

以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。