本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種杏梅組織培養(yǎng)快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

梅花(prunusmume)是中國傳統(tǒng)十大名花之一，花色絢麗多彩，枝型變異豐富，是重要的觀賞花木與果樹。梅花的栽培范圍，2000多年來一直局限在長江及淮河流域，為了將這一傳統(tǒng)名花擴大栽培地區(qū)范圍，尤其是將梅花推廣應(yīng)用到三北地區(qū)，在半世紀(jì)前就已開展抗寒梅花育種工作。早期通過將真梅系品種與杏等近緣種進行種間雜交，培育出具有抗寒能力的杏梅梅花品種，豐富了北方早春的植物景觀。

為了保持梅花品種的優(yōu)良性狀，生產(chǎn)上常采取嫁接和扦插等無性繁殖手段擴繁植株，但存在著擴繁系數(shù)小、受季節(jié)限制、周期長等問題。傳統(tǒng)梅花品種改良和新品種選育一般采用雜交育種及實生苗選擇育種等方法，由于梅花從開花授粉到果實成熟，需要2-3個月的時間，收獲的種子必須經(jīng)過沙藏處理后才能萌發(fā)，梅花傳統(tǒng)育種存在育種周期長，選擇局限性等限制因素。隨著植物基因工程技術(shù)的發(fā)展，利用植物遺傳轉(zhuǎn)化體系可以客服傳統(tǒng)育種技術(shù)的局限性，加快育種進程并促進梅花新優(yōu)奇特種質(zhì)創(chuàng)制。

梅花的離體快繁工作是建立梅花遺傳轉(zhuǎn)化體系的前提，無性系的建立以及試管苗的獲得可以為下一步的轉(zhuǎn)基因育種工作提供重要的試材。

公開號為cn102550404a的發(fā)明公開了一種梅花葉片愈傷組織高效誘導(dǎo)方法，該方法以真梅系梅花品種‘淡寒紅’種子實生苗葉片為外植體，在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+蔗糖(20-40g/l)+2,4-d(0.25-2.0)mg/l，ph＝5.8-6.0的固體培養(yǎng)基，能夠高效誘導(dǎo)愈傷組織。

呂英民(呂英民，曹亮，張啟翔.梅花品種‘美人’葉片離體再生體系的建立[j].分子植物育種，2006，4(6):887--894.)等以櫻李梅品種‘美人梅’葉片材料為外植體，以愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/2wpm+2,4-d(5mg/l)獲得愈傷組織后，再轉(zhuǎn)入1/2wpm+6-ba(1.0mg/l)+naa(0.1mg/l)+agno3(8mg/l)+水解乳蛋白(100mg/l)培養(yǎng)基，最終獲得生根苗。

楊潔(楊潔，聞娟，晏曉蘭，包滿珠，張俊衛(wèi).‘雪梅’未成熟合子胚體胚發(fā)生與植株再生[j].北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報,2013,v.35(s1):21-24.)等以梅花‘雪梅’未成熟合子胚為外植體，在胚誘導(dǎo)培養(yǎng)基1/2ms+2,4-d(1.0mg/l)+6-ba(0.2mg/l)上獲得體胚，體胚在增殖培養(yǎng)基1/2ms+6-ba(0.1mg/l)+naa(0.05mg/l)中產(chǎn)生次生體胚，在1/2ms+6-ba(1.0mg/l)+naa(0.1mg/l)+ga3(0.5mg/l)培養(yǎng)基上長出不定芽。

上述通過葉片、胚培養(yǎng)等器官發(fā)生途徑和體細(xì)胞胚發(fā)生途徑雖然獲得了再生植株，但還存在著離體組織培養(yǎng)分化慢、叢生莖少、生根困難等問題，不能滿足實際生產(chǎn)需求及梅花遺傳轉(zhuǎn)化操作。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)用技術(shù)的局限性提供一種繁殖速度快，操作簡便的杏梅離體快繁方法。利用該方法，可以快速、大量的獲得無菌組培苗，用于規(guī)范化生產(chǎn)擴繁與科學(xué)研究中的遺傳轉(zhuǎn)化。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種杏梅組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括：以當(dāng)年生杏梅種子為外植體，經(jīng)消毒、冷藏、啟動培養(yǎng)后，將無菌苗子葉和/或嫩莖接種在分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)3-4周；獲得不定芽后，將不定芽轉(zhuǎn)移至抽莖培養(yǎng)基上，繼續(xù)培養(yǎng)2-3周；待叢生苗長至3-4cm長時，將叢生苗轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2-3周；然后將生根苗移栽(出瓶)、(罩瓶)煉苗(一般1周后)，正常培養(yǎng)。

進一步地，所述獲取無菌苗嫩莖及子葉的方法包括：采集杏梅成熟果實，破碎果核后，對種子進行消毒；將消毒后的種子接種于冷藏培養(yǎng)基中，在4℃冰箱黑暗處理培養(yǎng)3-4周；然后將種子轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基，在光照下繼續(xù)培養(yǎng)2-3周直到種子萌發(fā)；待萌發(fā)苗長至2-3cm時候，即可切取子葉和/或嫩莖。然后可進行后續(xù)操作(轉(zhuǎn)移至分化培養(yǎng)基上)。

進一步地，本發(fā)明還對外植體消毒方法進行改進，采用預(yù)處理除菌加延時消毒相結(jié)合的方法，不僅有效保護外植體，還可以徹底殺除微生物，有效解決污染問題。所述杏梅種子外植體消毒包括：選用完整杏梅種子為外植體，室內(nèi)流水沖洗30min后，在無菌條件下，利用2％次氯酸鈉(含0.03％tween-20)消毒30min，再利用無菌水清洗3-4遍，鋪于無菌濾紙上晾干。

進一步地，所用種子冷藏處理方法包括：將消毒后的種子轉(zhuǎn)接入冷藏培養(yǎng)基中，一個組培容器中放置6-7枚，種子與種子之間間隔1-2cm，并用封口膜封口；將組培容器放置于4℃冰箱黑暗處理培養(yǎng)3-4周。

進一步地，所用啟動培養(yǎng)方法包括：將冷藏處理后的種子轉(zhuǎn)移至新鮮的啟動培養(yǎng)基中，在組織培養(yǎng)室中培養(yǎng)2-3周，直到種子萌發(fā)。培養(yǎng)環(huán)境如下：溫度23±2℃，16h光照/8h黑暗，光照強度2500lux-3000lux。

進一步地，所用分化培養(yǎng)方法包括：將萌發(fā)的無菌苗的上部子葉和/或嫩莖接種至分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)形成不定芽。

進一步地，所用抽莖培養(yǎng)方法包括：將形成的不定芽團剪切后，接種于抽莖培養(yǎng)基，進行叢生抽莖培養(yǎng)。

進一步地，所用生根培養(yǎng)方法包括：將形成的叢生芽，剪切接種至生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)。

進一步地，所用移栽與煉苗方法包括將獲得的生根苗，移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，罩瓶煉苗1周后，正常培養(yǎng)。

更進一步地，本發(fā)明還對移栽與煉苗方式進行改進，采用移栽后模擬組培環(huán)境的方法，有效提高了組培苗的移栽成活率并縮短了緩苗期。所述移栽與煉苗包括：生根培養(yǎng)后2-3周，將生根苗移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，將組培瓶倒扣至移栽苗上，罩瓶培養(yǎng)1周后，保持空氣濕度為60％-70％，去瓶正常培養(yǎng)。本發(fā)明所述一種杏梅組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體包括以下步驟：

(1)種子消毒處理：每年6-7月，收集杏梅成熟果實，利用夾核器破碎果核，收集完整種子。利用流水沖洗30min后，在超凈工作臺中，利用2％次氯酸鈉(含0.03％tween-20)消毒25min，轉(zhuǎn)移消毒后的種子至無菌水中清洗3-4遍；

(2)種子冷藏處理：將步驟(1)中消毒后的種子轉(zhuǎn)接入冷藏培養(yǎng)基中，一個組培容器中放置6-7枚，種子與種子之間間隔1-2cm，并用封口膜封口。將組培容器放置于4℃冰箱黑暗處理培養(yǎng)3-4周；

(3)啟動培養(yǎng)：將步驟(2)中冷藏處理后的種子轉(zhuǎn)移至新鮮的啟動培養(yǎng)基中，在組織培養(yǎng)室中培養(yǎng)2-3周，直到種子萌發(fā)。培養(yǎng)環(huán)境如下：溫度23±2℃，16h光照/8h黑暗，光照強度2500lux-3000lux；

(4)分化培養(yǎng)：將步驟(3)中萌發(fā)的無菌苗的上部子葉和/或嫩莖等接種至分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)形成不定芽；

(5)抽莖培養(yǎng)：將步驟(4)中形成的不定芽團剪切后，接種于抽莖培養(yǎng)基，進行叢生抽莖培養(yǎng)；

(6)生根培養(yǎng)：將步驟(5)中形成的叢生芽，剪切接種至生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)。

(7)移栽與煉苗：將步驟(6)中獲得的生根苗，移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，罩瓶煉苗1周后，正常培養(yǎng)。

本發(fā)明還提供用于杏梅組培快繁的種子冷藏培養(yǎng)基，所述種子冷藏培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(10-20g/l)+瓊脂適量(一般5.5-6.2g/l)，ph值5.8-6.0；優(yōu)選為1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(10g/l)+瓊脂適量(一般5.8g/l)，ph值5.8-6.0。

本發(fā)明還提供用于杏梅組培快繁的啟動培養(yǎng)基，所述啟動培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+蔗糖(20-25g/l)+6-ba(0.10-0.30mg/l)+naa(0.05-0.25mg/l)+瓊脂適量(一般5.5-6.2g/l)，ph值5.8-6.0；優(yōu)選為ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.05mg/l)+瓊脂適量(一般5.8g/l)，ph值5.8-6.0。

本發(fā)明還提供用于杏梅組培快繁的分化培養(yǎng)基(或稱不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基)，所述分化培養(yǎng)基為：ql培養(yǎng)基+蔗糖(20-30g/l)+6-ba(0.25-0.50mg/l)+naa(0.05-0.10mg/l)+iba(0.05-0.10mg/l)+瓊脂適量(一般5.5-6.2g/l)，ph值5.8-6.0；優(yōu)選為ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂適量(一般5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

本發(fā)明還提供用于杏梅組培快繁的抽莖培養(yǎng)基(或稱叢生培養(yǎng)基)，所述抽莖培養(yǎng)基為：ql培養(yǎng)基+蔗糖(20-25g/l)+6-ba(0.10-0.20mg/l)+naa(0.05-0.10mg/l)+瓊脂適量(一般5.5-6.2g/l)，ph值5.8-6.0；優(yōu)選為ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.20mg/l)+naa(0.10mg/l)+瓊脂適量(一般5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

本發(fā)明還提供用于杏梅組培快繁的生根培養(yǎng)基，所述生根培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20-25g/l)+iba(0.15-0.30mg/l)+瓊脂適量(一般5.5-6.2g/l)，ph值5.8-6.0；優(yōu)選為1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+iba(0.30mg/l)+瓊脂適量(一般5.8g/l)，ph值5.8-6.0。

進一步地，本發(fā)明所用杏梅種子為杏梅品種‘淡豐后’自交授粉所結(jié)果實。

本發(fā)明方法不定芽誘導(dǎo)數(shù)量達(dá)10.6，叢生苗莖高達(dá)3.56cm，叢生苗增值系數(shù)達(dá)5.5，生根率達(dá)95％。并且本發(fā)明對種子消毒方法進行了改進，采用2％次氯酸鈉(含表面活性劑)延時消毒方法，不僅操作簡單，還可以徹底殺除微生物，有效解決了污染問題。本發(fā)明還對組培苗煉苗方式進行改進，采取移栽后罩瓶的處理方式，不僅簡便易行，還增加移栽成活率。本發(fā)明實現(xiàn)了杏梅組培快繁，為梅花遺傳轉(zhuǎn)化及分子育種提供了技術(shù)支持。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實施例1中杏梅啟動培養(yǎng)基上的種子；

圖2為本發(fā)明實施例1中杏梅啟動培養(yǎng)基上的無菌苗；

圖3為本發(fā)明實施例1中杏梅分化培養(yǎng)基上形成愈傷組織；

圖4為本發(fā)明實施例1中杏梅分化培養(yǎng)基上形成不定芽；

圖5為本發(fā)明實施例1中杏梅叢生培養(yǎng)基上形成叢生莖；

圖6為本發(fā)明實施例1中杏梅生根培養(yǎng)基上形成不定根；

圖7為本發(fā)明實施例1中杏梅完整組培苗。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例進一步描述本發(fā)明，但這些實施例僅是示范性的，不限制本發(fā)明的范圍。若無特別指明，實施例中所用的技術(shù)手段均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)操作手段，所用原料均為市售商品。

以下實施例所用實驗材料：

1.杏梅種子

實施例中所用杏梅種子采自北京林業(yè)大學(xué)鷲峰國際梅園，為杏梅品種‘淡豐后’自交授粉所結(jié)果實。

2.植物激素

所用植物激素采用美國sigma公司的naa(萘乙酸)、6-ba(6-芐氨基腺嘌呤)、iba(吲哚丁酸)。

3.植物培養(yǎng)基

所用植物培養(yǎng)基采用美國caisson公司的ms培養(yǎng)基(murashige&skoogmedium)、1/2ms培養(yǎng)基(1/2murashige&skoogmedium)、ql培養(yǎng)基(quoirin&lepoivrebasalsaltmixture)。

實施例1

杏梅組織培養(yǎng)快速繁殖方法，具體如下：

一、實驗方法

1.種子消毒處理：利用夾核器破碎杏梅成熟果實果核，收集完整種子。分別進行如下3種方法消毒：

(1)利用75％酒精消毒30s，在超凈工作臺中，轉(zhuǎn)入3％次氯酸鈉消毒20min；

(2)利用流水沖洗30min后，在超凈工作臺中，轉(zhuǎn)入2％次氯酸鈉消毒30min；

(3)利用流水沖洗30min后，在超凈工作臺中，利用2％次氯酸鈉(含0.03％tween-20)消毒30min。3種方法消毒后的種子均用無菌水中清洗3-4遍；

2.種子冷藏處理：將消毒后的種子轉(zhuǎn)接入冷藏培養(yǎng)基中，每個組培容器中放置6-7枚，種子與種子之間間隔1-2cm，并用封口膜封口。將組培容器放置于4℃冰箱黑暗處理培養(yǎng)3-4周；

3.啟動培養(yǎng)：將冷藏處理后的種子轉(zhuǎn)移至新鮮的啟動培養(yǎng)基中，啟動培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.05mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0；在組織培養(yǎng)室中培養(yǎng)2-3周，直到種子萌發(fā)。培養(yǎng)環(huán)境如下：溫度23±2℃，16h光照/8h黑暗，光照強度2500lux-3000lux；

4.分化培養(yǎng)：將萌發(fā)后無菌苗的上部嫩莖、子葉等分別接種至下列分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)形成不定芽。分別采用如下分化培養(yǎng)基：

(1)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.05mg/l)+iba(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(2)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.05mg/l)+iba(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(3)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(4)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(5)ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.05mg/l)+iba(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(6)ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.05mg/l)+iba(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(7)ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(8)ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

5.抽莖培養(yǎng)：將形成的不定芽團剪切后，接種于下列抽莖培養(yǎng)基，進行叢生抽莖培養(yǎng)。分別采用如下培養(yǎng)基：

(1)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.10mg/l)+naa(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(2)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.10mg/l)+naa(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(3)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.20mg/l)+naa(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0；

(4)ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.20mg/l)+naa(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

6.生根培養(yǎng)：將形成的叢生芽，剪切接種至生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)。分別采用如下培養(yǎng)基：

(1)1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+iba(0.15mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0；

(2)1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+iba(0.30mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0；

(3)1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+naa(0.15mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0；

(4)1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+naa(0.30mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0。

7.移栽與煉苗：將獲得的生根苗，分別進行如下煉苗處理：

(1)在弱光下開蓋處理3天，移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，將透明組培瓶罩瓶煉苗1周后，去瓶正常培養(yǎng)；

(2)在弱光下開蓋處理5天，移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，將透明組培瓶罩瓶煉苗1周后，去瓶正常培養(yǎng)；

(3)將組培苗直接移栽至草炭土基質(zhì)(含10％珍珠巖)中，將透明組培瓶罩瓶煉苗1周后，去瓶正常培養(yǎng)。

二、實驗結(jié)果

1.不同消毒方式對種子萌發(fā)的影響

不同消毒方式對種子萌發(fā)的影響見表1。在冷藏培養(yǎng)基中，經(jīng)過3-4周培養(yǎng)后，編號3的消毒方式：利用流水清洗30min后，利用2％次氯酸鈉(含0.03％tween-20)消毒30min的處理方式，污染率為零，無污染，種皮保持淡黃色。將冷藏后的種子轉(zhuǎn)移入新鮮的啟動培養(yǎng)基中進行種子的啟動培養(yǎng)(圖1)。經(jīng)過2-3周的啟動培養(yǎng)，絕大多數(shù)種子均能正常萌發(fā)，長出根、莖及葉等組織(圖2)。本發(fā)明優(yōu)選的啟動培養(yǎng)基為：ms培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.25mg/l)+naa(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

表1不同消毒方式對種子萌發(fā)的影響

2.不同外植體及培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)的影響

將萌發(fā)后無菌苗的上部嫩莖、子葉等接種至下列分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)形成愈傷組織和不定芽，結(jié)果見表2。在外植體選擇上，子葉比嫩莖具有更高的不定芽誘導(dǎo)率，且ql培養(yǎng)基比ms培養(yǎng)基更適合作為杏梅的培養(yǎng)基，ql培養(yǎng)基形成的不定芽顏色綠色，長勢良好(圖3，圖4)。本發(fā)明優(yōu)選的分化培養(yǎng)基(或稱不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基)為：ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.50mg/l)+naa(0.10mg/l)+iba(0.05mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

表2不同培養(yǎng)基對不定芽誘導(dǎo)的影響

注:小寫字母表示0.05水平上差異顯著，下同。

3.不同培養(yǎng)基對抽莖培養(yǎng)的影響

將形成的不定芽團剪切后，接種于下列抽莖培養(yǎng)基，進行叢生抽莖培養(yǎng)，結(jié)果見表3。在培養(yǎng)基種類上只選擇了更合適李屬植物分化的ql培養(yǎng)基，當(dāng)naa濃度為0.10mg/l時，不定芽能獲得最多的叢生莖，且抽莖速度快，增殖倍數(shù)達(dá)到最大化(圖5)。本發(fā)明優(yōu)選的抽莖培養(yǎng)基為：ql培養(yǎng)基+蔗糖(25g/l)+6-ba(0.20mg/l)+naa(0.10mg/l)+瓊脂(5.5g/l)，ph值5.8-6.0。

表3不同培養(yǎng)基對抽莖培養(yǎng)的影響

4.不同培養(yǎng)基對生根培養(yǎng)的影響

將形成的叢生芽，剪切長度在2-3cm的莖段接種至生根培養(yǎng)基中，進行生根培養(yǎng)，生根情況見表4。處理發(fā)現(xiàn)，不同生長素對誘導(dǎo)生根具有不同效果，生根處理2周后，0.30mg/liba誘導(dǎo)莖段產(chǎn)生細(xì)、長(3.0-5.0cm)的不定根，數(shù)量較少(3-5條)(圖6，圖7)，而0.30mg/lnaa能誘導(dǎo)莖段產(chǎn)生短(0.5-1.0cm)、粗的不定根，且數(shù)量眾多(5-10條)，但naa誘導(dǎo)形成的粗壯不定根極易在移栽過程中脫落，影響組培苗的移栽成活率。本發(fā)明優(yōu)選的生根培養(yǎng)基為：1/2ms培養(yǎng)基+蔗糖(20g/l)+iba(0.30mg/l)+瓊脂(5.8g/l)，ph值5.8-6.0。

表4不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根情況

5.不同煉苗方式對移栽成活率的影響

將生根培養(yǎng)3周后的組培苗，移栽至育苗盆中。隨著開蓋處理時間的延長，培養(yǎng)基內(nèi)水分含量降低，培養(yǎng)基硬化，在移栽過程中容易造成根系脫落與斷裂，此外，還增加了真菌污染率，最終不同時間開蓋煉苗處理下的成活率僅為60-70％。而本發(fā)明的罩瓶處理，不僅操作簡單，而且組培苗成活率達(dá)95％以上。

以上實施例的說明僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，對于本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員來說，實驗細(xì)節(jié)及形式的適當(dāng)修改或替換是可操作的，但值得注意的是，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的任何修改或替換，均應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。