本發(fā)明屬于藥理學(xué)領(lǐng)域，具體是一種快速構(gòu)建妊娠期糖尿病小鼠動(dòng)物模型的方法。

背景技術(shù)：

妊娠前糖代謝正?；蛴袧撛谔悄土繙p退、妊娠期才出現(xiàn)或確診的糖尿病，又稱為“妊娠期糖尿病(gdm)”。妊娠中、晚期，孕婦體內(nèi)抗胰島素樣物質(zhì)增加，如胎盤生乳素、雌激素、孕酮、皮質(zhì)醇和胎盤胰島素酶等使孕婦對(duì)胰島素的敏感性隨孕周增加而下降。為維持正常糖代謝水平，胰島素需求量必須相應(yīng)增加。對(duì)于胰島素分泌受限的孕婦，妊娠期不能代償這一生理變化而使血糖升高，使原有糖尿病加重或出現(xiàn)gdm。gdm患者糖代謝多數(shù)于產(chǎn)后能恢復(fù)正常，但將來患ii型糖尿病機(jī)會(huì)增加。糖尿病孕婦的臨床經(jīng)過復(fù)雜，母子都有風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)該給予重視。

目前建立的妊娠期糖尿病模型主要有轉(zhuǎn)基因型、自發(fā)型及誘發(fā)型等動(dòng)物模型。目前轉(zhuǎn)基因小鼠模型及自發(fā)性小鼠模型因體現(xiàn)出類似ⅰ型糖尿病或ⅱ型糖尿病的研究，如ob/ob小鼠或db/db小鼠模型。目前最受廣泛應(yīng)用的自發(fā)性gdm小鼠模型leprdb/+小鼠模型也被證實(shí)失去gdm表型?，F(xiàn)應(yīng)用最多的是誘發(fā)型，最受青睞的是鏈脲佐菌素(stz)誘導(dǎo)的糖尿病模型和高脂誘導(dǎo)肥胖模型，前者原理為stz藥物對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島β細(xì)胞毒性作用損傷胰島β細(xì)胞，使胰島素分泌不足，引起類似于1型糖尿病的表型(胰島素分泌不足)，且胎鼠體質(zhì)量降低，不符合gdm的特征；后者原理為高脂或高糖飼料喂養(yǎng)，致使小鼠妊娠前肥胖或ⅱ型糖尿病，交配后制造出肥胖或2型糖尿病合并妊娠的小鼠模型，而非妊娠后首次發(fā)生的糖尿病，不符合gdm的特征。我們通過首創(chuàng)造性地通過極短時(shí)間高脂飼料誘導(dǎo)c57小鼠，確保妊娠前小鼠無糖尿病，妊娠后小鼠出現(xiàn)血糖增高，胰島素抵抗、體質(zhì)量增加等gdm病理生理改變等，是與人類gdm非常相似的小鼠gdm模型。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種快速構(gòu)建妊娠期糖尿病小鼠動(dòng)物模型的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種快速構(gòu)建妊娠期糖尿病小鼠動(dòng)物模型的方法，包括以下步驟：

(1)將7周雌性小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，一周后合籠，查看陰栓，出現(xiàn)陰栓當(dāng)天登記為妊娠0.5天，并行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，以排除孕前糖尿病，并記錄體重；

(2)孕期繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)，于妊娠16.5天再次行ogtt，與標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)的小鼠對(duì)比，模型組出現(xiàn)葡萄糖耐量降低為模型成功。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：步驟(1)中小鼠合籠一周仍未妊娠，則舍棄。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的雌性小鼠采用c57雌性小鼠。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：高脂飼料采用researchdiet，d12451高脂飼料。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：高脂飼料喂養(yǎng)采用自由取食方式。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：

不同于既往gdm小鼠模型造模時(shí)間長(zhǎng)，表型不符合gdm的臨床特征等缺點(diǎn)，本發(fā)明建立了一種與人類gdm最相似的穩(wěn)定、可靠的小鼠模型，而且造模時(shí)間短，經(jīng)濟(jì)成本低，實(shí)用性強(qiáng)，可復(fù)制，表型顯著，符合人類gdm的臨床特征。

附圖說明

圖1為一種快速構(gòu)建妊娠期糖尿病小鼠動(dòng)物模型的方法的過程示意圖。

圖2為本發(fā)明中g(shù)d0.5小鼠血液葡萄糖濃度圖。

圖3為本發(fā)明中g(shù)d0.5小鼠auc圖。

圖4為本發(fā)明中g(shù)d0.5小鼠體重圖。

圖5為本發(fā)明中g(shù)d16.5小鼠血液葡萄糖濃度圖。

圖6為本發(fā)明中g(shù)d16.5小鼠auc圖。

圖7為本發(fā)明中g(shù)d18.5小鼠空腹血糖水平圖。

圖8為本發(fā)明中g(shù)d18.5小鼠空腹胰島素水平圖。

圖9為本發(fā)明中g(shù)d18.5小鼠胰島素抵抗指數(shù)圖。

圖10為本發(fā)明中g(shù)d18.5小鼠體重圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。

一種通過高脂飲食構(gòu)建妊娠期糖尿病的小鼠動(dòng)物模型，包括以下步驟：

(1)購(gòu)入7周c57雌性小鼠，隨機(jī)分為模型組和對(duì)照組，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)，對(duì)照組給予動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，一周后合籠，查看陰栓，出現(xiàn)陰栓當(dāng)天登記為妊娠0.5天(gd0.5)，并行g(shù)d0.5口服葡萄糖耐量試驗(yàn)，以排除孕前糖尿病，并記錄體重。所述的高脂飼料采用researchdiet，d12451高脂飼料；喂養(yǎng)采用自由取食方式。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：gd0.5兩組小鼠血液葡萄糖濃度(圖2)及auc(圖3)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，體重比較亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(圖4)，符合gdm表型特征。若小鼠合籠1周仍未妊娠，則舍棄，最終模型組和對(duì)照組各6只。

(2)孕期繼續(xù)給予模型組高脂飼料喂養(yǎng)，對(duì)照組實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，于妊娠16.5天(gd16.5)再次行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)。結(jié)果顯示：模型組30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘血糖高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖5)。auc比較模型組明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(圖6)，模型組妊娠晚期糖耐量異常，符合gdm的表型特征。

(3)于妊娠18.5天(gd18.5)處死小鼠，記錄體重、空腹血糖水平、空腹胰島素水平并計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)。結(jié)果顯示：模型組孕晚期體重明顯高于對(duì)照組(圖10)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；雖然空腹血糖水平無明顯差異(圖7)，但hfd小鼠空腹胰島素水平(圖8)及胰島素抵抗指數(shù)(圖9)均較對(duì)照組顯著增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述表型均符合gdm的特有臨床特征。

本發(fā)明的原理是：通過極短時(shí)間高脂誘導(dǎo)c57小鼠可以高效地創(chuàng)建gdm小鼠模型，為未來gdm的研究提供更快、更好、更相似的動(dòng)物模型新選擇。

上面對(duì)本專利的較佳實(shí)施方式作了詳細(xì)說明，但是本專利并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種快速構(gòu)建妊娠期糖尿病小鼠動(dòng)物模型的方法，包括以下步驟：(1)(1)將7周雌性小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)，一周后合籠，查看陰栓，出現(xiàn)陰栓當(dāng)天登記為妊娠0.5天，并行口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)，以排除孕前糖尿病，并記錄體重；(2)孕期繼續(xù)給予高脂飼料喂養(yǎng)，于妊娠16.5天再次行OGTT，與標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)的小鼠對(duì)比，模型組出現(xiàn)葡萄糖耐量降低為模型成功。本發(fā)明建立了一種與人類GDM最相似的穩(wěn)定、可靠的小鼠模型，而且造模時(shí)間短，經(jīng)濟(jì)成本低，實(shí)用性強(qiáng)，可復(fù)制，表型顯著，符合人類GDM的臨床特征。

技術(shù)研發(fā)人員：余昕烊;漆洪波;張華;菲利普·貝克;陳竺;趙亞蘭;劉正飛;童超
受保護(hù)的技術(shù)使用者：重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：2017.06.05
技術(shù)公布日：2017.09.19