本發(fā)明涉及微生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種白僵菌可濕性粉劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

由于化學(xué)農(nóng)藥長(zhǎng)期大量使用，造成害蟲抗藥性增強(qiáng)，同時(shí)又會(huì)殺死害蟲天敵，從而造成農(nóng)作物害蟲頻頻成災(zāi)。采用基于昆蟲病原微生物的生物殺蟲劑替代化學(xué)農(nóng)藥成為害蟲綜合防控技術(shù)的重要手段。

玉米螟(Ostrinia furnacalis Guenée)，屬于鱗翅目，螟蛾科，又叫玉米鉆心蟲，主要為害玉米、高粱、谷子等，也能為害棉花、甘蔗、大麻、向日葵、水稻、甜菜、甘蔗豆類等作物，玉米螟分布廣泛，危害嚴(yán)重，生態(tài)適應(yīng)性強(qiáng)，屬于世界性害蟲。玉米螟主要以幼蟲為害，破壞莖稈組織，侵害花苞、雄穗及雌穗，受害玉米長(zhǎng)勢(shì)衰弱，莖稈易折，雌穗發(fā)育不良，影響結(jié)實(shí)。玉米螟是我國(guó)玉米生產(chǎn)中最重要的害蟲之一，一般發(fā)生年份可使玉米減產(chǎn)10％左右，大發(fā)生年份所造成的產(chǎn)量損失在30％以上，甚至絕收。

二化螟(Chilo suppressalis Walker)，屬鱗翅目，螟蛾科，俗名鉆心蟲、蛀心蟲、蛀稈蟲等，是我國(guó)水稻上危害最為嚴(yán)重的常發(fā)性害蟲之一。二化螟除為害水稻外，還能為害茭白、玉米、高粱、甘蔗、油菜、蠶豆、麥類以及蘆葦、稗、李氏禾等雜草。二化螟幼蟲通過蛀害水稻葉鞘、心葉、稻莖等部位造成枯鞘、枯心苗、白穗等危害，在成熟期則會(huì)造成半枯穗狀蟲 傷株，導(dǎo)致嚴(yán)重減產(chǎn)，二化螟一般可導(dǎo)致水稻減產(chǎn)5％-10％，嚴(yán)重的高達(dá)20％-30％。

球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是目前國(guó)內(nèi)廣泛應(yīng)用的昆蟲病原真菌之一，可侵染15個(gè)目149個(gè)科的700多種昆蟲及蜱螨類，具有致病性強(qiáng)、殺蟲范圍廣、對(duì)害蟲天敵安全、不易產(chǎn)生抗藥性、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)在全國(guó)范圍內(nèi)廣泛應(yīng)用，但在防治過程中仍存在劑型單一、勞動(dòng)效率低、殺蟲速度慢、殺蟲效率低等缺點(diǎn)。

粉劑是將真菌孢子或菌絲與填充劑等混合加工而成的劑型，雖能克服殺蟲真菌不耐貯藏的問題，但施用勞動(dòng)效率低，受環(huán)境影響大，田間應(yīng)用不穩(wěn)定，此外，粉劑還容易隨風(fēng)飄散，產(chǎn)生粉塵，污染環(huán)境。

可濕性粉劑容易加工、藥害低、毒性小，利于運(yùn)輸、貯藏、使用安全方便并具有良好的生物活性。但白僵菌可濕性粉劑國(guó)內(nèi)的研究進(jìn)展比較緩慢，究其原因主要為白僵菌可濕性粉劑在貯存過程中容易失去活力，同時(shí)一些助劑會(huì)對(duì)孢子的活性產(chǎn)生不利影響。因此，如何選擇合適的助劑，在提高其使用便利性的同時(shí)，提高其活性同時(shí)延長(zhǎng)產(chǎn)品的貨架期就成為要解決的主要問題。

有鑒于此，提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種白僵菌可濕性粉劑，助劑及配比選擇合理，各質(zhì)量指標(biāo)良好，活性高，對(duì)玉米螟和水稻二化螟具有良好的防治效果，同時(shí)使用方便，貯存時(shí)間長(zhǎng)，成本低，對(duì)人畜安全，環(huán)境相容性好。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述白僵菌可濕性粉劑在防治玉米螟和水稻二化螟方面的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種白僵菌可濕性粉劑，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉45-55份、載體15-20份、潤(rùn)濕劑3-5份、分散劑2-4份、乳化劑4-6份、吸附劑13-17份和調(diào)節(jié)劑4-6份。

可選地，所述載體為硅藻土。

可選地，所述潤(rùn)濕劑為拉開粉BX或K12。

可選地，所述分散劑為NP-10或NNO。

可選地，所述乳化劑為AEO-3或吐溫T-20。

可選地，所述吸附劑為氧化鋁或活性炭。

可選地，所述調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉。

進(jìn)一步地，白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉50份、載體18份、潤(rùn)濕劑4份、分散劑3份、乳化劑5份、吸附劑15份和調(diào)節(jié)劑5份。

可選地，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉45-55份、硅藻土15-20份、拉開粉BX 3-5份、NP-10 2-4份、AEO-3 4-6份、活性炭13-17份和磷酸二氫鉀4-6份。

優(yōu)選地，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉開粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-3 5份、活性炭15份和磷酸二氫鉀5份。

優(yōu)選地，所述白僵菌為球孢白僵菌菌株EHM-068，分類命名為球孢白僵菌(Beauveria Bassiana)，已于2016年3月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC No.12110。

優(yōu)選地，所述白僵菌可濕性粉劑中白僵菌孢子含量不小于250億/克，且孢子萌發(fā)率≥90％。

上述白僵菌可濕性粉劑在防治玉米螟和水稻二化螟方面的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明提供的白僵菌可濕性粉劑，助劑選擇及配比合理，各質(zhì)量指標(biāo)良好，活性高，對(duì)玉米螟和水稻二化螟具有良好的防治效果，同時(shí)使用方便，貯存時(shí)間長(zhǎng)，成本低，對(duì)人畜安全，環(huán)境相容性好。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為不同載體混合物中白僵菌孢子的萌發(fā)率；

圖2為不同潤(rùn)濕劑對(duì)白僵菌孢子的潤(rùn)濕時(shí)間；

圖3為不同分散劑下白僵菌孢子的分散懸浮率。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明提供的白僵菌可濕性粉劑，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉45-55份、載體15-20份、潤(rùn)濕劑3-5份、分散劑2-4份、乳化劑4-6份、吸附劑13-17份和調(diào)節(jié)劑4-6份。

本發(fā)明中，白僵菌孢子粉典型但非限定性含量為：45份、46份、47份、48份、49份、50份、51份、52份、53份、54份或55份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述載體為硅藻土。

本發(fā)明中，載體典型但非限定性含量為：15份、16份、17份、18份、19份或20份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述潤(rùn)濕劑為拉開粉BX或K12。

本發(fā)明中，潤(rùn)濕劑典型但非限定性含量為：3份、4份或5份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述分散劑為NP-10或NNO。

本發(fā)明中，分散劑典型但非限定性含量為：2份、3份或4份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述乳化劑為AEO-3或吐溫T-20。

本發(fā)明中，乳化劑典型但非限定性含量為：3份、4份或5份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述吸附劑為氧化鋁或活性炭。

本發(fā)明中，吸附劑典型但非限定性含量為：13份、14份、15份、16份或17份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，所述調(diào)節(jié)劑為磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉。

本發(fā)明中，調(diào)節(jié)劑典型但非限定性含量為：4份、5份或6份。

作為本發(fā)明的可選實(shí)施方式，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉45-55份、硅藻土15-20份、拉開粉BX 3-5份、NP-10 2-4份、AEO-3 4-6份、活性炭13-17份和磷酸二氫鉀4-6份。

作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，按重量份數(shù)計(jì)，所述白僵菌可濕性粉劑包括白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉開粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-35份、活性炭15份和磷酸二氫鉀5份。

本發(fā)明中，所述白僵菌為球孢白僵菌菌株。

作為本發(fā)明的一種實(shí)施方式，所述白僵菌為球孢白僵菌菌株EHM-068，分類命名為球孢白僵菌(Beauveria Bassiana)，已于2016年3月30日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏號(hào)為CGMCC No.12110。球孢白僵菌菌株EHM-068的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本發(fā)明中，所述白僵菌可濕性粉劑中白僵菌孢子含量不小于250億/克，且孢子萌發(fā)率≥90％。

實(shí)驗(yàn)例1 載體的篩選

不同載體：硅藻土、凹凸棒土、高嶺土和白炭黑

試驗(yàn)方法：將球孢白僵菌分生孢子粉分別與硅藻土、凹凸棒土、高嶺土和白炭黑四種不同的供試載體，按照重量份數(shù)1:1的比例均勻混合，置于低溫冷庫(kù)內(nèi)，在溫度為(3±1)℃、相對(duì)濕度為5％條件下，黑暗貯存，每月取定量混合粉末于孢子萌發(fā)液中，(25±1)℃、120r/min震蕩培養(yǎng)24h后測(cè)定孢子萌發(fā)率，以相同條件下貯存的白僵菌純孢子粉作對(duì)照，每次測(cè)定5個(gè)試樣，共測(cè)定5個(gè)月。

四種不同載體與白僵菌孢子均勻混合貯存5個(gè)月，其孢子萌發(fā)率變化見表1和圖1。

表1 不同載體混合物中白僵菌的孢子萌發(fā)率

表1為不同載體混合物中白僵菌的孢子萌發(fā)率。圖1為不同載體混合物中白僵菌孢子的萌發(fā)率。從表1和圖1中可以看出，在貯存1個(gè)月后，四種不同載體的混合物中白僵菌的孢子萌發(fā)率都超過了80％，其中，以硅藻土作為載體與純孢子粉的孢子萌發(fā)率超過了90％，孢子萌發(fā)率影響不大；但是隨著貯存時(shí)間的延長(zhǎng)，混合物中白僵菌孢子萌發(fā)率開始下降，貯存2 個(gè)月后，分別以凹凸棒土、高嶺土和白炭黑為載體的三種混合物中白僵菌孢子萌發(fā)率下降明顯，至貯存5個(gè)月時(shí)，這三種混合物中白僵菌孢子萌發(fā)率均低于51％，而以硅藻土為載體的混合物中白僵菌孢子萌發(fā)率還能維持在85％以上，與對(duì)照組的純孢子粉無明顯差異。因此，硅藻土為白僵菌初篩的最佳載體。

實(shí)驗(yàn)例2 潤(rùn)濕劑的篩選

不同潤(rùn)濕劑：Morwet EFW、MF-5(甲基萘磺酸鹽甲醛縮合物)、K12(十二烷基硫酸鈉)和拉開粉BX(二異丁基萘磺酸鈉)

試驗(yàn)方法：取標(biāo)準(zhǔn)硬水100mL±1mL，注入250mL燒杯中，將此燒杯置于25±1℃的恒溫水浴中，使其液面與水浴的水平面平齊。待硬水至25±1℃時(shí)，稱取5g±0.1g的試樣(潤(rùn)濕劑與白僵菌按1:10比例均勻混合)，置于表面皿上，將全部試樣從與燒杯口齊平的位置一次性均勻地傾倒在該燒杯的液面上，但不要過分地?cái)_動(dòng)液面，加試樣時(shí)立即用秒表計(jì)時(shí)，直至試樣全部潤(rùn)濕為止，記下潤(rùn)濕時(shí)間。如此重復(fù)5次，取平均值作為各樣品的潤(rùn)濕時(shí)間，以不加濕潤(rùn)劑的白僵菌純孢子粉作為對(duì)照。

不同潤(rùn)濕劑對(duì)白僵菌孢子的潤(rùn)濕時(shí)間見圖2。

從圖2中可以看出，拉開粉BX和K12兩種潤(rùn)濕劑的潤(rùn)濕時(shí)間都在120秒內(nèi)，拉開粉BX的潤(rùn)濕時(shí)間僅為97秒，Morwet EFW和MF-5的潤(rùn)濕時(shí)間都比較長(zhǎng)，分別為247秒和305秒。因此，潤(rùn)濕劑拉開粉BX和K12可為初篩備用潤(rùn)濕劑。

實(shí)驗(yàn)例3 分散劑的篩選

不同分散劑：Morwet D425、NP-10(壬基酚聚氧乙烯醚)、NNO(亞甲基雙萘磺酸鈉)、木質(zhì)素磺酸鈣和木質(zhì)素磺酸鈉。

稱取適量試樣(精確至0.0002g)，置于盛有50mL的標(biāo)準(zhǔn)硬水(30±1℃)的250mL燒杯中，用手搖蕩作圓周運(yùn)動(dòng)，約每分鐘120次，進(jìn)行2min，將 該懸浮液在同一溫度的水浴中放置13min，然后用30±1℃的標(biāo)準(zhǔn)硬水將其全部洗入100mL量筒中，并稀釋至刻度，蓋上塞子，以量筒底部為軸心，使量筒在1min內(nèi)上下顛倒30次。打開塞子，再垂直放入無振動(dòng)的恒溫水浴中，放置30min。用吸管在10s-15s內(nèi)將內(nèi)容物的9/10(即90mL)懸浮液移出，不要搖動(dòng)或攪起量筒內(nèi)的沉降物，確保吸管的頂端總是在液面下幾毫米處。把留在量筒底部的10mL懸浮液用蒸餾水洗250mL燒杯中，加熱，將水蒸發(fā)近干，于50℃烘箱烘至恒重，取出燒杯稱重。重復(fù)5次，最后計(jì)算平均數(shù)。以不加濕潤(rùn)劑的白僵菌純孢子粉作為對(duì)照。

其中：懸浮率X＝10/9*(M1-M2)/M1*100％

M1：所取試樣有效成分質(zhì)量，g

M2：留在量筒底部10mL懸浮液中有效成分質(zhì)量，g

不同分散劑下白僵菌孢子的分散懸浮率見圖3。

從圖3中可以看出：分散劑Morwet D425對(duì)白僵菌孢子的分散率最低，僅為36％，木質(zhì)素磺酸鈣和木質(zhì)素磺酸鈉對(duì)白僵菌孢子的懸浮率也都在50％以下，分散劑NNO對(duì)白僵菌孢子的分散率達(dá)到了71％，分散劑NP-10對(duì)白僵菌孢子的分散率最高，達(dá)到了85％。因此，將NNO和NP-10兩種分散劑作為白僵菌可濕性粉劑初篩備用分散劑。

實(shí)施例1

白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、拉開粉BX 4份、NP-10 3份、AEO-35份、活性炭15份和磷酸二氫鉀5份。

實(shí)施例2

白僵菌孢子粉45份、硅藻土20份、拉開粉BX 4份、NP-10 4份、吐溫T-20 6份、活性炭17份和磷酸二氫鉀4份。

實(shí)施例3

白僵菌孢子粉55份、硅藻土15份、拉開粉BX 5份、NP-10 2份、吐溫T-20 4份、活性炭13份和磷酸二氫鉀6份。

實(shí)施例4

白僵菌孢子粉50份、硅藻土18份、K12 4份、NNO 3份、吐溫T-20 5份、活性炭15份和磷酸二氫鈉5份。

實(shí)施例5

白僵菌孢子粉50份、硅藻土16份、K12 5份、NNO 2份、AEO-3 4份、氧化鋁17份和磷酸二氫鉀6份。

對(duì)比例1

白僵菌孢子粉30份、硅藻土40份、拉開粉BX 8份、NP-10 8份、AEO-38份、活性炭4份和磷酸二氫鉀2份。

對(duì)比例2

白僵菌孢子粉70份、硅藻土10份、拉開粉BX 2份、NP-10 1份、AEO-33份、活性炭12份和磷酸二氫鉀2份。

對(duì)比例3

白僵菌孢子粉50份、高嶺土18份、Morwet EFW 4份、木質(zhì)素磺酸鈣3份、農(nóng)乳400號(hào)5份、活性炭15份和磷酸二氫鉀5份。

對(duì)比例4

白僵菌孢子粉50份、凹凸棒土18份、MF-5 4份、Morwet D425 3份、AEO-3 5份、活性炭15份和磷酸二氫鉀5份。

效果例1

對(duì)實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑，分別進(jìn)行不同質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定。

質(zhì)量指標(biāo)測(cè)定：

1)潤(rùn)濕性測(cè)定

取標(biāo)準(zhǔn)硬水100mL±1mL，注入250mL燒杯中，將此燒杯置于25℃±1℃的恒溫水浴中，使其液面與水浴的水平面平齊。待硬水至25℃±1℃時(shí)，稱取5g±0.1g的試樣(試樣應(yīng)為有代表性的均勻粉末，而且不允許成團(tuán)、結(jié)塊)，置于表面皿上，將全部試樣從與燒杯口齊平的位置一次性均勻地傾倒在該燒杯的液面上，但不要過分地?cái)_動(dòng)液面。加試樣時(shí)立即用秒表記時(shí)，直至試樣全部潤(rùn)濕為止，記下潤(rùn)濕時(shí)間。如此重復(fù)5次，取其平均值，作為該樣品的潤(rùn)濕時(shí)間。

2)懸浮率測(cè)定

稱取適量試樣(精確至0.0002g)，置于盛有50mL的標(biāo)準(zhǔn)硬水(30±1℃)的250mL燒杯中，用手搖蕩作圓周運(yùn)動(dòng)，約每分鐘120次，進(jìn)行2min，將該懸浮液在同一溫度的水浴中放置13min，然后用30±1℃的標(biāo)準(zhǔn)硬水將其全部洗入100mL量筒中，并稀釋至刻度，蓋上塞子，以量筒底部為軸心，使量筒在1min內(nèi)上下顛倒30次。打開塞子，再垂直放入無振動(dòng)的恒溫水浴中，放置30min。用吸管在10s-15s內(nèi)將內(nèi)容物的9/10(即90mL)懸浮液移出，不要搖動(dòng)或攪起量筒內(nèi)的沉降物，確保吸管的頂端總是在液面下幾毫米處。把留在量筒底部的10mL懸浮液用蒸餾水洗250mL燒杯中，加熱，將水蒸發(fā)近干，于50℃烘箱烘至恒重，取出燒杯稱重。重復(fù)5次，最后計(jì)算平均數(shù)。

懸浮率X＝10/9*(M1-M2)/M1*100％

M1：所取試樣有效成分質(zhì)量，g

M2：留在量筒底部10mL懸浮液中有效成分質(zhì)量，g

3)細(xì)度測(cè)定

稱取20g試樣(精確至0.1g)，置于250mL燒杯，加入80mL自來水，用玻璃棒攪動(dòng)，使其完全濕潤(rùn)。用自來水將燒杯中潤(rùn)濕的試樣稀釋至約 150mL，攪拌均勻，然后全部倒入潤(rùn)濕的200目標(biāo)準(zhǔn)篩中，用自來水洗滌燒杯，洗滌水也倒入篩中，直至燒杯中粗顆粒完全移至篩中為止。用直徑為9-10mm的橡皮管導(dǎo)出的平緩自來水流沖洗篩上試樣，水流速度控制在4-5L/min，橡皮管末端出水口保持與篩緣平齊為度。在篩選過程中，保持水流對(duì)準(zhǔn)篩上的試樣，使其充分洗滌(如試樣中有軟團(tuán)塊可用玻璃輕壓，使其分散)，一直洗到通過試驗(yàn)篩的水清亮透明為止。再將試驗(yàn)篩移至盛有的容器中，上下移動(dòng)洗滌篩緣始終保持在水面之上，重復(fù)至2min內(nèi)無物料過篩為止。棄去過篩物，將篩中殘余物，先沖至一角再轉(zhuǎn)移至已恒重的100mL燒杯中。靜置，待燒杯中顆粒沉降至底部后，傾去大部分水，加熱，將殘余物蒸發(fā)近干，于100℃烘箱中烘至恒重，取出燒杯置于干燥器中冷卻至室溫，稱重。重復(fù)5次，最后計(jì)算平均數(shù)。

細(xì)度X＝10/9*(M1-M2)/M1*100

M1：可濕性粉劑試樣的質(zhì)量，g；

M2：燒杯中殘余物的質(zhì)量，g

4)水分測(cè)定

白僵菌可濕性粉劑含水量一般要采用105℃烘干法。采用105℃烘干法時(shí)，先將鋁盒清洗干凈并烘干，稱白僵菌可濕性粉劑10克左右，105℃烘4-6個(gè)小時(shí)后，進(jìn)行第一次稱重，然后放進(jìn)烘箱繼續(xù)烘半個(gè)小時(shí)，進(jìn)行第二次稱重，兩次質(zhì)量差不大于3毫克即可，如果大于3毫克要繼續(xù)烘干。重復(fù)5次，最后計(jì)算平均數(shù)。

絕對(duì)含水量，即以重量百分?jǐn)?shù)表示白僵菌可濕性粉劑含水量。白僵菌可濕性粉劑含水量以白僵菌可濕性粉劑中所含水分重量占烘干后白僵菌可濕性粉劑重量的百分?jǐn)?shù)表示。

計(jì)算公式如下:

白僵菌可濕性粉劑含水量(重量％)＝(原白僵菌可濕性粉劑重量-烘干后白僵菌可濕性粉劑重量)/烘干白僵菌可濕性粉劑重量×100％＝水重/烘干后白僵菌可濕性粉劑重量×100％

5)pH值測(cè)定

將沖洗干凈的玻璃電極和飽和甘汞電極插入試樣溶液中(稱取1g試樣于100mL燒杯中，加入100mL水，劇烈攪拌1min，靜置1min)，測(cè)其pH值。至少平行測(cè)定三次，測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值應(yīng)小于0.1，取其算術(shù)平均值即為試樣的pH值。

6)起泡性測(cè)定

稱取一定量的試樣，加到盛有100mL水的量筒中，攪拌均勻后靜置5min，測(cè)定懸浮于頂部泡沫的體積。

7)貯存穩(wěn)定性測(cè)定

將球孢白僵菌可濕性粉劑，置于(3±1)℃下黑暗貯存，3個(gè)月后取定量可濕性粉劑于孢子萌發(fā)液中，(25±1)℃、120r/min震蕩培養(yǎng)24h后測(cè)定孢子萌發(fā)率。重復(fù)5次，最后計(jì)算平均數(shù)。

白僵菌可濕性粉劑的質(zhì)量指標(biāo)見表2。

表2 白僵菌可濕性粉劑的質(zhì)量指標(biāo)

實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4的白僵菌可濕性粉劑的質(zhì)量指標(biāo)評(píng)價(jià)見表3。

表3 不同白僵菌可濕性粉劑的質(zhì)量指標(biāo)評(píng)價(jià)

從表3中可以看出，實(shí)施例1-5的各質(zhì)量指標(biāo)均符合標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比例1的起泡性和貯存穩(wěn)定性不符合標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比例2的潤(rùn)濕時(shí)間、懸浮率、細(xì)度、pH值和貯存穩(wěn)定性不符合標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比例3的水分、起泡性和貯存穩(wěn)定性均不符合標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)比例4的潤(rùn)濕時(shí)間、細(xì)度、水分、pH值、起泡性和貯存穩(wěn)定性均不符合標(biāo)準(zhǔn)。

效果例2

將實(shí)施例1白僵菌可濕性粉劑用于玉米螟的防治，觀察對(duì)玉米螟的防治效果。

1)試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)：

試驗(yàn)時(shí)間為2015年6月

試驗(yàn)地點(diǎn)為吉林省公主嶺市南崴子鎮(zhèn)

2)試驗(yàn)制劑：實(shí)施例1制備的白僵菌可濕性粉劑，性狀：白色粉末，無特殊氣味；白僵菌顆粒劑；化學(xué)農(nóng)藥呋喃丹顆粒劑。

3)試驗(yàn)方法：

選取面積為15畝玉米田作為玉米螟田間防效的試驗(yàn)田，試驗(yàn)設(shè)三個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列；處理一采用白僵菌顆粒劑撒施玉米心葉內(nèi)施用；處理二采用實(shí)施例1提供的白僵菌可濕性粉劑，用100倍的水稀釋后噴霧施用；處理三采用化學(xué)農(nóng)藥呋喃丹顆粒劑撒施玉米心葉內(nèi)施用，對(duì)照組不用任何防治措施，處理一至處理三的防治劑量均為80g/畝。

4)調(diào)查方法：

對(duì)于玉米螟的防效調(diào)查，采用秋后調(diào)查、每個(gè)處理隨機(jī)調(diào)查5點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查100株玉米植株，調(diào)查指標(biāo)為活蟲數(shù)、蛀孔數(shù)、被害株數(shù)。

5)試驗(yàn)結(jié)果：

蟲口減退率、蟲孔減退率、被害株減退率和防治效果按照如下公式進(jìn)行計(jì)算：

蟲口減退率按公式(1)計(jì)算：

式中：Y-------蟲口減退率，％；

Y1------對(duì)照區(qū)蟲口率，％；

Y2------處理區(qū)蟲口率，％。

蟲孔減退率按公式(2)計(jì)算：

式中：Z-------蟲孔減退率，％；

Z1------對(duì)照區(qū)蟲孔率，％；

Z2------處理區(qū)蟲孔率，％。

被害株減退率按公式(3)計(jì)算：

式中：X-------被害株減退率，％；

X1------對(duì)照區(qū)被害株率，％；

X2------處理區(qū)被害株率，％。

平均防治效果按公式(4)計(jì)算：

式中：E------平均防治效果，％；

X------被害株減退率，％；

Y------蟲口減退率，％；

Z------蟲孔減退率，％。

各處理防治玉米螟的試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 各處理防治玉米螟的試驗(yàn)結(jié)果

注:表中同一列數(shù)據(jù)后標(biāo)相同小寫(大寫)字母者表示經(jīng)Duncan氏新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)，在P_0.05(P_0.01)水平上差異不顯著，下表同。

從表4中可以看出，三個(gè)處理在活蟲數(shù)、蛀孔數(shù)、被害株數(shù)3個(gè)方面明顯低于對(duì)照組，其中處理二白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的蟲口減退率、蟲孔減退率、被害株減退率及防治效果方面均高于白僵菌顆粒劑且差異顯著；白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的蟲口減退率低于化學(xué)農(nóng)藥呋喃丹，而在對(duì)玉米螟的蟲孔減退率方面卻高于化學(xué)農(nóng)藥呋喃丹，但兩者對(duì)玉米螟的被害株減退率及防治效果方面差異不顯著；說明白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米田玉米螟具有很好的防治效果。

效果例3

將實(shí)施例1白僵菌可濕性粉劑用于水稻二化螟的防治，觀察對(duì)水稻二化螟的防治效果。

1)試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)：

試驗(yàn)時(shí)間為2016年6-7月

試驗(yàn)地點(diǎn)為吉林省東豐縣啦啦河鎮(zhèn)

2)試驗(yàn)制劑：實(shí)施例1制備的白僵菌可濕性粉劑，性狀：白色粉末，無特殊氣味；生物農(nóng)藥阿維菌素；化學(xué)農(nóng)藥殺蟲單。

3)試驗(yàn)方法：

在吉林省東豐縣啦啦河鎮(zhèn)選取水稻田作為水稻二化螟田間防效的試驗(yàn)基地，水稻田面積為1000m²，共設(shè)置四個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。處理一和處理二采用50倍液的白僵菌可濕性粉劑，處理一噴施量為每公頃250g，處理二每公頃500g，處理三采用生物農(nóng)藥阿維菌素(250ml/公頃)噴施，處理四采用化學(xué)農(nóng)藥殺蟲單(1000g/公頃)噴施，處理一至四用背負(fù)式噴霧器向稻田莖葉均勻噴霧，對(duì)照組不用任何防治措施。

4)調(diào)查方法：

試驗(yàn)6月30、7月7日分別進(jìn)行施藥防治水稻二化螟，于7月25日調(diào)查二化螟危害的枯心率、枯鞘率、白穗率。

5)試驗(yàn)結(jié)果：

枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效的計(jì)算公式如下：枯心率防效按公式(1)計(jì)算：

式中：Y-------枯心率防效，％；

Y1------對(duì)照區(qū)枯心率，％；

Y2------處理區(qū)枯心率，％。

枯鞘率防效按公式(2)計(jì)算：

式中：Z-------枯鞘率防效，％；

Z1------對(duì)照區(qū)枯鞘率，％；

Z2------處理區(qū)枯鞘率，％。

白穗率防效按公式(3)計(jì)算：

式中：X-------白穗率防效，％；

X1------對(duì)照區(qū)白穗率，％；

X2------處理區(qū)白穗率，％。

平均防治效果

平均防治效果按公式(4)計(jì)算：

式中：E------平均防治效果，％；

X------白穗率防效，％；

Y------枯心率防效，％；

Z------枯鞘率防效，％。

各處理防治水稻二化螟的試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 各處理防治水稻二化螟的試驗(yàn)結(jié)果

從表5中可以看出，四個(gè)處理對(duì)水稻二化螟在枯心率、枯鞘率、白穗率方面明顯低于對(duì)照組，處理三采用的生物農(nóng)藥阿維菌素對(duì)水稻二化螟在枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效方面明顯高于處理一(白僵菌可濕性粉劑，每公頃250g)且差異顯著；但也低于處理二(白僵菌可濕性粉劑，每公頃500g)對(duì)水稻二化螟在枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效，且各項(xiàng)指標(biāo)差異也顯著，說明白僵菌可濕性粉劑對(duì)水稻二化螟具有較好的防治效果。

盡管與處理四采用化學(xué)農(nóng)藥殺蟲單相比，處理一、處理二、處理三3個(gè)生物農(nóng)藥處理在對(duì)水稻二化螟枯心率防效、枯鞘率防效、白穗率防效和平均防效方面偏低且均存在顯著差異，但作為生物農(nóng)藥，處理二和處理三對(duì)水稻二化螟的平均防效分別為75.39％、70.85％，均超過了70％，效果已經(jīng)很好。

效果例4

將實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑用于玉米螟的防治，觀察對(duì)玉米螟的防治效果。

1)試驗(yàn)時(shí)間：2015年6月

試驗(yàn)地點(diǎn)：吉林省公主嶺市南崴子鎮(zhèn)

2)試驗(yàn)制劑：實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑

3)試驗(yàn)方法：

在吉林省公主嶺市南崴子鎮(zhèn)選取玉米田作為玉米螟田間防效的試驗(yàn)田，玉米田面積為15畝，試驗(yàn)設(shè)九個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。處理一至處理九采用實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑，用100倍的水稀釋后噴霧施用，對(duì)照組不用任何防治措施。處理一至處理九的防治劑量均為80g/畝。

4)調(diào)查方法：

對(duì)于玉米螟的防效調(diào)查，采用秋后調(diào)查，每個(gè)處理隨機(jī)調(diào)查5點(diǎn)，每點(diǎn)調(diào)查100株玉米植株，調(diào)查指標(biāo)為活蟲數(shù)、蛀孔數(shù)、被害株數(shù)。

5)試驗(yàn)結(jié)果：

實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑防治玉米螟的試驗(yàn)結(jié)果見表6。

從表6可以看出：實(shí)施例1-5制成白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的防治效果均較好，都在70％以上，其中實(shí)施例1制成白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的防治效果最高，達(dá)到了75.99％；而對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的防治效果均在55％以下，防治效果很不好。說明白僵菌可濕性粉劑的組分組成和配比對(duì)玉米螟的防治效果有一定的影響，本發(fā)明提供的白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟具有良好的防治效果。

表6白僵菌可濕性粉劑對(duì)玉米螟的防治效果

效果例5

將實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑用于水稻二化螟的防治，觀察對(duì)水稻二化螟的防治效果。

1)試驗(yàn)時(shí)間和地點(diǎn)：

試驗(yàn)時(shí)間為2016年6-7月

試驗(yàn)地點(diǎn)為吉林省東豐縣啦啦河鎮(zhèn)

2)試驗(yàn)制劑：實(shí)施例1-5和對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑；

3)試驗(yàn)方法：

在吉林省東豐縣啦啦河鎮(zhèn)選取水稻田作為水稻二化螟田間防效的試驗(yàn)田，水稻田面積為30畝，共設(shè)置九個(gè)處理，每個(gè)處理3次重復(fù)，隨機(jī)排列。處理一至處理九采用50倍液的白僵菌可濕性粉劑用背負(fù)式噴霧器向稻田莖葉均勻噴霧，對(duì)照組不用任何防治措施。

4)調(diào)查方法：

試驗(yàn)6月30、7月7日分別進(jìn)行施藥防治水稻二化螟，于7月25日調(diào)查二化螟危害的枯心率、枯鞘率、白穗率。

5)試驗(yàn)結(jié)果：

白僵菌可濕性粉劑防治水稻二化螟的試驗(yàn)結(jié)果見表7。

從表7可以看出：對(duì)比例1-4制成白僵菌可濕性粉劑雖然枯心率、枯鞘率、白穗率雖然明顯低于對(duì)照，但對(duì)二化螟的防治效果均在50％以下，防治效果很不理想；而實(shí)施例1-5制成白僵菌可濕性粉劑枯心率、枯鞘率、白穗率不但明顯低于對(duì)照，且對(duì)二化螟的防治效果均較好，都在70％以上，其中實(shí)施例1制成白僵菌可濕性粉劑對(duì)二化螟的防治效果最高，達(dá)到了73.36％，說明白僵菌可濕性粉劑的組分組成及配比對(duì)水稻二化螟的防治效果有很大的影響，本發(fā)明提供的白僵菌可濕性粉劑對(duì)二化螟具有良好的防治效果。

表7 白僵菌可濕性粉劑對(duì)二化螟的防治效果

最后應(yīng)說明的是：以上各實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。

SEQUENCE LISTING

<110> 吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院

<120> 白僵菌可濕性粉劑及其應(yīng)用

<130> 2017

<160> 1

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 591

<212> DNA

<213> 球孢白僵菌

<400> 1

ttagaggaag taaaagtcgt aacaaggtct ccgttggtga accagcggag ggatcattac 60

cgagttttca actccctaac ccttctgtga acctacctat cgttgcttcg gcggactcgc 120

cccagcccgg acgcggactg gaccagcggc ccgccgggga cctcaaactc ttgtattcca 180

gcatcttctg aatacgccgc aaggcaaaac aaatgaatca aaactttcaa caacggatct 240

cttggctctg gcatcgatga agaacgcagc gaaacgcgat aagtaatgtg aattgcagaa 300

tccagtgaat catcgaatct ttgaacgcac attgcgcccg ccagcattct ggcgggcatg 360

cctgttcgag cgtcatttca accctcgacc tccccttggg gaggtcggcg ttggggaccg 420

gcagcacacc gccggccctg aaatggagtg gcggcccgtc cgcggcgacc tctgcgcagt 480

aatacagctc gcaccgggac cccgacgcgg ccacgccgta aaacacccaa cttctgaacg 540

ttgacctcga atcaggtagg actacccgct gaacttaagc atatcaaagc g 591