本發(fā)明屬于食用菌及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種玉米秸稈枝條型食用菌固定化菌種生產(chǎn)和栽培方法。

背景技術(shù)：

食用菌是一類可產(chǎn)生子實體并具有極高營養(yǎng)和藥用價值的大型真菌，常見種類有香菇、雙孢蘑菇、平菇、杏鮑菇、銀耳等。食用菌營養(yǎng)豐富，含有蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸、氨基酸、膳食纖維、維生素、微量元素等，其蛋白質(zhì)含量高于蔬菜。食用菌還含有特殊風(fēng)味物質(zhì)，使其味道鮮美，因此，食用菌是一種深受人們喜愛的食物，目前已成為人們?nèi)粘ｏ嬍持械囊坏乐匾似?。尤其引人關(guān)注的是食用菌含有多種生物活性分子，以多糖最為著名，具有抗腫瘤、抗氧化、抗衰老、免疫調(diào)節(jié)等生理活性，因此，食用菌還成為新藥開發(fā)的重要來源，其潛力越來越受到研究人員的重視。

食用菌生長需要特殊光、濕、溫度等自然環(huán)境，野生資源極其有限，人工采集不能滿足人們不斷增長的需求，因此，人工栽培是一種必然選擇，目前代料栽培已成為食用菌生產(chǎn)的主要方式，20多種食用菌已實現(xiàn)商業(yè)規(guī)模生產(chǎn)。食用菌栽培主要利用林業(yè)、農(nóng)業(yè)、食品工業(yè)等所產(chǎn)生的不同廢棄物如木屑、棉籽殼、甘蔗渣、玉米芯、稻草、麥桿、豆桿、花生殼、蓮子殼、野草、酒渣等作為主料，額外添加麩皮、玉米粉、米糠、石灰、石膏等作為輔料滿足食用菌生長繁殖需求。由于食用菌生產(chǎn)原料大都可再生，且來源廣泛，價格低，易于大量獲得，因此食用菌屬于可持續(xù)發(fā)展產(chǎn)業(yè)，具有極大發(fā)展空間和前景。此外，食用菌栽培在為人類提供大量食物的同時還可減輕廢棄物對環(huán)境的極大破壞作用，因此食用菌栽培也具有重要的生態(tài)意義。

我國是食用菌生產(chǎn)大國，栽培分布全國各地，產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的70%以上，其產(chǎn)值繼糧、棉、油、果、蔬后占第六位，因此食用菌已成為我國農(nóng)業(yè)的重要組成部分。食用菌栽培中主要使用木屑種、木枝條種以及液體菌種等。木屑種應(yīng)用最為普遍，近年來木枝條種的生產(chǎn)應(yīng)用呈上升趨勢，兩者均屬固態(tài)發(fā)酵法生產(chǎn)，但兩者生產(chǎn)周期長以及對森林造成破壞。為有效利用農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中產(chǎn)生的廢棄物如玉米秸稈以及縮短菌種生產(chǎn)周期，本發(fā)明公布了利用農(nóng)業(yè)廢棄物玉米秸稈，將其制作為薄片作為細(xì)胞吸附載體，液體培養(yǎng)和食用菌菌絲細(xì)胞吸附法生產(chǎn)枝條型固定化菌種及其栽培應(yīng)用方法。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種以玉米秸稈枝條型薄片為載體，液體培養(yǎng)自然吸附技術(shù)生產(chǎn)枝條型食用菌固定化菌種及其栽培方法。

具體方法為：

（1）收集玉米采收后的新鮮秸稈，將其去葉去皮，切成長、寬、厚為120mm×10mm×2mm的薄片，70℃烘干；

（2）以薄片為載體，生產(chǎn)枝條型固定化菌種方法為：每20根薄片用棉繩子捆成一捆；每3捆放置于1l三角瓶，移入400ml發(fā)酵培養(yǎng)基，膠塞封口；121℃滅菌30min；冷卻后接種50ml均質(zhì)（研磨、均質(zhì)機或超聲波破碎進(jìn)行均質(zhì)）處理的液體菌種，150rev/min、30℃培養(yǎng)；4-5d收集吸附和生長大量食用菌菌絲的薄片，即為玉米秸稈枝條型食用菌固定化菌種；

（3）上述枝條型固定化菌種栽培應(yīng)用方法：將枝條型固定化菌種接種放置于中心已預(yù)留孔洞的滅菌培養(yǎng)料，孔洞直徑為1.5cm、從料面穿至近料底，25℃培養(yǎng)走菌吃料；10-14d吃料完全后，經(jīng)出菇管理（開袋、通風(fēng)、提供光源及濕度），收獲菇子實體。

所述的發(fā)酵培養(yǎng)基配方為每升中含葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g。

所述的滅菌培養(yǎng)料，每包750克濕料配方按質(zhì)量分?jǐn)?shù)為：棉籽殼60%、木屑20%、麩皮18%、石膏2%，其含水量為60-65%。

本發(fā)明的有益效果是：與木屑種生產(chǎn)周期（以活化的母種接種至裝有600克培養(yǎng)料的菌包，長滿通常需30d以上）相比，本發(fā)明玉米秸稈枝條型固定化菌種生產(chǎn)周期僅為9d（活化的母種接種搖瓶培養(yǎng)約5d時，均質(zhì)后接種固定化培養(yǎng)約4d），菌種制備時間顯著縮短；本發(fā)明采用玉米秸稈為食用菌細(xì)胞固定化材料，提高了玉米秸稈的利用價值；本發(fā)明采用玉米秸稈作為固定化材料，可降低菌種生產(chǎn)成本；本發(fā)明生產(chǎn)的玉米秸稈枝條型固定化菌種應(yīng)用于栽培，接種操作方便，并降低菌包雜菌污染率；本發(fā)明的玉米秸稈枝條型固定化菌種栽培發(fā)菌周期僅為10-14d，與木屑種發(fā)菌周期（約25-40d）相比，本發(fā)明縮短了15-26d，極大提高了生產(chǎn)效率。本發(fā)明具有極大的應(yīng)用和推廣價值。

具體實施方式

本發(fā)明公布了一種以玉米秸稈薄片為載體，液體培養(yǎng)自然吸附生產(chǎn)枝條型食用菌固定化菌種及栽培方法，下面實施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明的使用方法，但這些實施例僅是規(guī)范性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。此外，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換仍在本發(fā)明保護(hù)范圍。

實施例1平菇的玉米秸稈枝條型固定化菌種生產(chǎn)及栽培應(yīng)用

1、收集玉米采收后的新鮮秸稈，將其去葉、去皮，切成長、寬、厚為120mm×10mm×2mm的薄片，70℃烘干；

2、每20根薄片用棉繩子捆成一捆；將3捆放置于1l三角瓶，移入400ml發(fā)酵培養(yǎng)基，配方（每升）為葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g；膠塞封口，121℃滅菌30min；；

3、培養(yǎng)基冷卻后接種50ml均質(zhì)（超聲波破碎進(jìn)行均質(zhì)）處理的平菇液體菌種，150rev/min、30℃培養(yǎng)；

4、培養(yǎng)4d后吸附和生長大量菌絲的薄片，即為平菇枝條型固定化菌種；

5、將枝條型固定化菌種接種至滅菌的預(yù)留孔洞的培養(yǎng)料菌包。菌包對折徑規(guī)格為17cm×33cm，裝料量為750g，配方為60%棉籽殼、20%木屑、18%麩皮、2%石膏，調(diào)含水量為63%，孔洞直徑為1.5cm，從培養(yǎng)料表面至近料底。

6、菌包放置于菇棚，遮陰，暗培養(yǎng)，溫度在25℃，相對濕度65%，每2天通風(fēng)一次；

7、菌包菌絲吃料完全后(12d)開袋，提供光照1000lux，溫度控制在15℃，經(jīng)常噴水，每天通風(fēng)3次誘導(dǎo)原基形成和子實體生長；

8、子實體菇蓋長至近平展時采收，采收一潮菇，稱重,計算生物轉(zhuǎn)化率。

與利用木屑種栽培相比，枝條型固定化菌種菌種制備時間僅為9d（活化后的母種接種到搖瓶液體培養(yǎng)需5d，均質(zhì)后搖瓶培養(yǎng)固化時間需4d），木屑種通常需30d(活化母種接種于裝有600克培養(yǎng)料的菌包，吃料完全約需30d),菌種制備時間縮短21d；本發(fā)明的枝條型固定化菌種接種方便，接種效率高；本發(fā)明枝條型固定化菌種走菌時間為12d，木屑種為37d，走菌時間縮短25d；本發(fā)明枝條型固定化菌種生物轉(zhuǎn)化率為71%,木屑種為62%，有很大提高。

實施例2杏鮑菇玉米秸稈枝條型固定化菌種生產(chǎn)及栽培應(yīng)用

1、收集玉米采收后的新鮮秸稈，將其去葉、去皮，切成長、寬、厚為120mm×10mm×2mm的長條薄片，70℃烘干；

2、每20根薄片用棉繩子捆成一捆；每3捆放置于1l的三角瓶，移入400ml發(fā)酵培養(yǎng)基，配方（每升）為葡萄糖35g、蛋白胨5g、酵母粉4g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g；膠塞封口，121℃滅菌30min；；

3、培養(yǎng)基冷卻后接入50ml經(jīng)均質(zhì)（用均質(zhì)機進(jìn)行均質(zhì)）處理的杏鮑菇液體菌種，150rev/min、30℃培養(yǎng)；

4、培養(yǎng)5d后，收集吸附和生長大量菌絲的薄片，即為杏鮑菇枝條型固定化菌種；

5、將枝條型固定化菌種接種至滅菌的預(yù)留孔洞的培養(yǎng)料菌包。菌包對折徑規(guī)格為18cm×33cm，裝料量為900g，配方為60%棉籽殼、20%木屑、18%麩皮、2%石膏，調(diào)含水量為65%，孔洞直徑為1.5cm，從培養(yǎng)料表面至近料底。

6、菌包放置菇房暗培養(yǎng)，自動控溫保持在25℃，相對濕度70%，co2濃度0.1%以下；

7、菌包菌絲吃料完全后(14d)，繼續(xù)培養(yǎng)7d后開袋，提供光照1000lux，溫度控制在12℃，濕度95%，co2濃度0.1%以下,誘導(dǎo)原基形成和子實體生長；

8、菌包料面形成大量幼菇時，采取疏蕾措施，保留大的幼菇2-3朵；

8、子實體菇蓋長至近平展時采收，采收一潮菇，稱重,計算生物轉(zhuǎn)化率。

與利用木屑種栽培相比，固定化菌種菌種制備時間僅為9d（活化后的母種接種到搖瓶液體培養(yǎng)需5d，均質(zhì)后搖瓶培養(yǎng)固化時間需4d），木屑種通常需30d(活化母種接種于裝有600克培養(yǎng)料的菌包，吃料完全約需30d),菌種制備時間縮短21d；本發(fā)明的枝條型固定化菌種接種方便，接種效率高；本發(fā)明枝條型固定化菌種走菌時間為14d，木屑種為38d，走菌時間縮短24d，顯著提高生產(chǎn)效率；本發(fā)明枝條型固定化菌種生物轉(zhuǎn)化率為54%,木屑種為46%，有很大提高。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。