本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
根結(jié)線蟲病又稱為“瘤子病”，是發(fā)生在蔬菜上較為嚴(yán)重的病害之一，主要危害黃瓜、苦瓜、番茄、茄子、菜豆、芹菜、菠菜、胡蘿卜等多種常見蔬菜。近年來，隨著我國國民經(jīng)濟(jì)持續(xù)快速發(fā)展，蔬菜產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)的調(diào)整，蔬菜保護(hù)地栽培面積的迅速擴(kuò)大，根結(jié)線蟲病的發(fā)生也日益嚴(yán)重，一般產(chǎn)量損失達(dá)30～50%，嚴(yán)重時(shí)甚至導(dǎo)致絕收。此外，根結(jié)線蟲病還可以與真菌、細(xì)菌、病毒相互作用形成復(fù)合侵染，加重了枯萎病、根腐病等土傳性真菌病害和部分細(xì)菌病害的發(fā)生。目前，由根結(jié)線蟲引起的病害已嚴(yán)重制約著我國保護(hù)地作物的發(fā)展和穩(wěn)產(chǎn)，影響著全國農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)持續(xù)快速健康的發(fā)展。
迄今為止，對(duì)線蟲病害的防治方法主要采用化學(xué)農(nóng)藥防治、農(nóng)業(yè)輪作防治以及利用抗病品種等多種方法來防治和控制黃瓜根結(jié)線蟲病害?；瘜W(xué)防治因?yàn)榫哂懈咝А⑺傩У膬?yōu)勢(shì)，是農(nóng)民目前采用控制蔬菜黃瓜根結(jié)線蟲病的常用防治方法。但是，許多化學(xué)農(nóng)藥如二溴氯丙烷（dbcp）和甲基溴容易誘導(dǎo)非靶標(biāo)生物產(chǎn)生抗性、潛在毒性，具有高毒性，殘留量高，對(duì)食品安全、環(huán)境污染、臭氧層有較大的隱患，同時(shí)和當(dāng)今發(fā)展環(huán)境友好型社會(huì)的宗旨相違背，因此己被陸續(xù)禁用。
農(nóng)業(yè)防治可以通過輪作的方法改良土壤環(huán)境來減少蟲源，靠增施有機(jī)肥料，提高土壤肥力以及靠通過施加堿性肥料，調(diào)節(jié)土壤ph值等防治方法防治植物線蟲病害。但局限于有限的種植面積、溫室建設(shè)的高成本投資，農(nóng)戶受環(huán)境和利益的影響，很難接受土地空閑，或者與經(jīng)濟(jì)價(jià)值和收益不高的作物輪作，因此靠農(nóng)業(yè)防治線蟲病害在我國目前不能很好地實(shí)施?？剐云贩N的栽種曾一度是防治黃瓜根結(jié)線蟲病害比較有效而且廣泛使用的防治措施，目前有許多抗性基因（m-1.2基因）已成功地應(yīng)用于馬鈴薯、大豆和煙草的生產(chǎn)實(shí)踐中抗根結(jié)線蟲。然而抗病性種質(zhì)資源相對(duì)缺乏，目前對(duì)一些經(jīng)濟(jì)作物的抗病育種的研究正在不斷深入的進(jìn)行。由于農(nóng)業(yè)防治的局限性，抗性品種的資源缺乏以及化學(xué)殺線蟲劑帶來的高毒性、高殘留、耐藥性和安全等問題，急需找到一種更好的防治線蟲病害的方法，而生物防治克服了農(nóng)業(yè)防治和化學(xué)殺線蟲劑所帶來的一系列的弊端，是一種安全、有效和無污染的防治方法，是人們追求和提倡的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明目的在于提供一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑，本發(fā)明選用淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的組合，在一定程度上拮抗土傳病原物，提高植物抗病性而降低對(duì)蔬菜的病害，從而可以促進(jìn)蔬菜生長、降低根結(jié)線蟲的危害。
為解決以上問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
設(shè)計(jì)一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑，包括重量比為8～12:1的淡紫紫孢菌菌劑和植物乳桿菌菌劑，所述淡紫紫孢菌菌劑中的孢子濃度不小于109個(gè)孢子/ml，所述植物乳桿菌菌劑中芽孢含量不小于15.0×109cfu/ml。
優(yōu)選的，所述淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株，其保藏編號(hào)為cctccno：m2016683；其是在已分離、篩選得到的原始菌株pl36-1（來源于華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)線蟲實(shí)驗(yàn)室）基礎(chǔ)上，發(fā)明人進(jìn)一步通過紫外誘變而得到的穩(wěn)定突變子，進(jìn)而得到的變異的淡紫紫孢菌菌株pl36-1-1，并于2016年11月25日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（地址：中國湖北省武漢市武漢大學(xué)，郵編430072）。
所述植物乳桿菌為常規(guī)市售菌劑atcc8014標(biāo)準(zhǔn)菌。
優(yōu)選的，所述復(fù)合菌劑為可濕性粉劑，包括以下重量份的原料：淡紫紫孢菌菌8～12份、植物乳桿菌菌劑1份、硅藻土16～30份、明膠3～6份、高嶺土10～15份。
本發(fā)明復(fù)合菌劑是由目標(biāo)微生物(有效菌)經(jīng)過工業(yè)化生產(chǎn)擴(kuò)繁后，利用多孔材料作為吸附劑（硅藻土、明膠、高嶺土）吸附菌體加工制成的活菌制劑。
本發(fā)明復(fù)合菌劑用于拌種或蘸根，具有直接或間接改良土壤、恢復(fù)地力、預(yù)防病害、維持根際微生物區(qū)系平衡、降解有毒害物質(zhì)、增強(qiáng)作物免疫力、提高作物產(chǎn)量和品種等作用，是未來綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展方向。
本發(fā)明具有以下積極有益的技術(shù)效果：
（1）本發(fā)明篩選獲得特定比例的淡紫紫孢菌和植物乳桿菌恰好能夠相互促進(jìn)，能有效克服單一菌劑的不足之處，對(duì)進(jìn)一步開發(fā)二元或多元復(fù)合生防菌劑是十分有意義，也為今后的相關(guān)研究提供依據(jù)，本發(fā)明復(fù)合菌劑作為植物土傳病原物的生防制劑具有廣闊的應(yīng)用前景。
（2）淡紫紫孢菌與植物乳桿菌組合能夠協(xié)同作用，大幅促進(jìn)蔬菜的生長、防治并誘導(dǎo)其防御反應(yīng)而降低蔬菜根結(jié)線蟲危害；植物乳桿菌能夠促進(jìn)蔬菜生長和淡紫紫孢菌的侵染，而淡紫紫孢菌又能促進(jìn)植物乳桿菌在發(fā)棵期與成熟期蔬菜根圍的定殖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例來說明本發(fā)明的具體實(shí)施方式，在以下實(shí)施例中所涉及的儀器設(shè)備如無特別說明，均為常規(guī)儀器設(shè)備；所涉及的生化試劑如無特別說明，均為常規(guī)市售產(chǎn)品。
實(shí)施例1：一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑（可濕性粉劑），由以下重量份的原料組成：淡紫紫孢菌菌10份、植物乳桿菌菌劑1份、硅藻土24份、明膠5份、高嶺土12份，所述淡紫紫孢菌菌劑中的孢子濃度不小于109個(gè)孢子/ml，所述植物乳桿菌菌劑中芽孢含量不小于15.0×109cfu／ml。
所述淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株（保藏編號(hào)為cctccno：m2016683）；所述植物乳桿菌為atcc8014標(biāo)準(zhǔn)菌。
實(shí)施例2：一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑（可濕性粉劑），由以下重量份的原料組成：淡紫紫孢菌菌8份、植物乳桿菌菌劑1份、硅藻土16份、明膠3份、高嶺土10份，所述淡紫紫孢菌菌劑中的孢子濃度不小于109個(gè)孢子/ml，所述植物乳桿菌菌劑中芽孢含量不小于15.0×109cfu／ml。
所述淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株（保藏編號(hào)為cctccno：m2016683）；所述植物乳桿菌為常規(guī)市售菌劑atcc8014。
實(shí)施例3：一種淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的復(fù)合菌劑（可濕性粉劑），由以下重量份的原料組成：淡紫紫孢菌菌12份、植物乳桿菌菌劑1份、硅藻土30份、明膠6份、高嶺土15份，所述淡紫紫孢菌菌劑中的孢子濃度不小于109個(gè)孢子/ml，所述植物乳桿菌菌劑中芽孢含量不小于15.0×109cfu／ml。
所述淡紫紫孢菌為pl36-1-1菌株（保藏編號(hào)為cctccno：m2016683）；所述植物乳桿菌為常規(guī)市售菌劑atcc8014。
效果對(duì)比實(shí)驗(yàn)：
（1）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
本實(shí)驗(yàn)設(shè)不接種對(duì)照（ck）、處理1單接種淡紫紫孢菌菌劑（pl36-1-1）cctccno：m2016683、處理2單接種植物乳桿菌菌劑（atcc8014標(biāo)準(zhǔn)菌）、處理3接種實(shí)施例1復(fù)合菌劑共四個(gè)處理，隨機(jī)排列，每個(gè)處理重復(fù)5次。
取長年發(fā)生黃瓜根結(jié)線蟲病害嚴(yán)重的土壤混勻，裝入消毒過的花盆，每盆植入一株黃瓜苗，5天以后接種上述不同處理的菌劑。30盆為一重復(fù)，共600盆。其它常規(guī)管理相同。
（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表1不同處理防治黃瓜根結(jié)線蟲病的結(jié)果
表1數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明中由淡紫紫孢菌和植物乳桿菌組成的復(fù)合菌劑不僅能夠在很大程度上抑制病原物、提高植物抗病性、降低病害和促進(jìn)植物生長。與單接種淡紫紫孢菌或植物乳桿菌相比，采用本發(fā)明淡紫紫孢菌和植物乳桿菌的組合接種，能夠促進(jìn)淡紫紫孢菌的侵染和兩種菌劑在根圍的定殖，復(fù)合菌劑能顯著促進(jìn)蔬菜的生長（如株高，莖粗、地上鮮重、地上干重和產(chǎn)量等）和降低根結(jié)線蟲對(duì)蔬菜的危害。
本發(fā)明篩選評(píng)價(jià)獲得的淡紫紫孢菌和植物乳桿菌組合恰好能夠相互促進(jìn)、協(xié)同作用而更有效地發(fā)揮生理生態(tài)功能，能有效克服單一菌劑的不足之處（淡紫紫孢菌生長較慢，前期侵染速度慢，生防效果不夠穩(wěn)定等；施入土壤中的植物乳桿菌種群數(shù)量快速下降等）。這對(duì)于進(jìn)一步開發(fā)二元或多元復(fù)合生防菌是十分有意義，也為今后的相關(guān)研究提供依據(jù)。顯而易見，本發(fā)明淡紫紫孢菌和植物乳桿菌組合菌劑作為植物土傳病原物的生防制劑具有廣闊的應(yīng)用前景。
以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其進(jìn)行限制；盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，依然可以對(duì)前述實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明所要求保護(hù)的技術(shù)方案的精神和范圍。