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一種精子干燥液以及精子保存的方法與流程

文檔序號:12599809閱讀:632來源:國知局
本發(fā)明涉及生物細(xì)胞保藏領(lǐng)域,具體而言,涉及一種精子干燥液以及精子保存的方法。
背景技術(shù)
:精液的保存是為了延長精子在體外的存活時間并維持其受精能力,使精子可以不受時間與地域的限制,進(jìn)行長時間、遠(yuǎn)距離的運輸。便于開展省際、國際間的交流合作,有利于提高優(yōu)良公畜的利用率和遺傳資源的長期保存,在保種、品種改良、引種和人類生殖醫(yī)學(xué)等方面都具有重要意義。在自然狀態(tài)下,精子離體后壽命只有幾個小時,必須經(jīng)過一定的處理之后才能實現(xiàn)長途運輸。傳統(tǒng)的精子保存方法是將精液冷凍后保存在液氮或干冰中,這種低溫冷凍保存技術(shù)需要液氮或干冰,液氮不僅要特殊的鋼質(zhì)罐,而且還有很大的危險性,這給運輸帶來了很大的不便,干冰則在室溫下容易融化,不利于精子在室溫下的長時間運輸。自從胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù)(ICSI)得以應(yīng)用,許多更簡單的保存精液的方法得以研究,包括冷凍干燥法和蒸發(fā)干燥法。精液干燥后不僅可以在4℃條件下長時間保存,而且可以在室溫條件下運輸和短期保存,同時干燥保存法不需要液氮,貯存空間小,運輸成本低,所以它比常規(guī)低溫冷凍保存更經(jīng)濟(jì),更實用。雖然干燥的精子已失去運動能力和自然受精能力,但是它們有很高的染色體完整率,通過胞漿內(nèi)單精子注射技術(shù),仍然可以與卵子結(jié)合并發(fā)育成胚胎。與冷凍干燥法相比,蒸發(fā)干燥法具有在干燥過程中不需要冷凍干燥所需要的凍干機器,精液采集處理過程方便等優(yōu)勢。然而精子遺傳物質(zhì)的完整性是實現(xiàn)受精和胚胎發(fā)育的前提,現(xiàn)有技術(shù)中,應(yīng)用蒸發(fā)干燥法干燥后精子的完整性和胞漿內(nèi)注射后受精率和胚胎發(fā)育率都要低于冷凍干燥法。技術(shù)實現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的在于提供一種精子干燥液,其具有高效、方便、對細(xì)胞無毒性等優(yōu)點,可以有效保護(hù)精子并降低在干燥過程中對精子造成的物理損傷和化學(xué)損傷,顯著提高精子完整率,使得胞漿內(nèi)注射精子后能有效的激活卵子,提高胚胎的發(fā)育率。本發(fā)明的另一目的在于提供一種精子保存的方法,該方法簡單易操作、廉價且不需要用到制冷設(shè)備,特別適合野外采集、收集野生動物精液。其處理過的精子便于保存和進(jìn)行長時間、遠(yuǎn)距離的運輸。用該方法長期保存后的精子仍能保持較高的完整率和胚胎發(fā)育率。本發(fā)明的實施例是這樣實現(xiàn)的:一種精子干燥液,每升精子干燥液包括:氯化鈉6~7g、氯化鉀0.2~0.3g、氯化鈣0.3~0.6g、氯化鎂0.05~0.1g、碳酸氫鈉2~3g、磷酸鈉0.03~0.05g、葡萄糖1~1.2g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.5~3g、棉籽糖10~50mmol和余量的水。一種精子保存的方法,包括:將稀釋后的精液離心去除精清后與精子干燥液混合,得到精子懸浮液;將精子懸浮液蒸發(fā)干燥后保存。本發(fā)明實施例的有益效果是:本發(fā)明所提供的一種精子干燥液,能夠模擬精子生長狀態(tài)下的環(huán)境狀態(tài),具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量和無機鹽成分等作用,可提供精子在體外生存并維持一定代謝活動的基本需要。在本發(fā)明中,在該精子干燥液中加入了一定量的棉籽糖,棉籽糖不但是主要非電解質(zhì),可緩和精漿的電離程度,而且是精子離體后的主要能源物質(zhì),也是稀釋液中調(diào)節(jié)滲透壓的重要物質(zhì)之一。同時,棉籽糖的分子量較大,較之小分子的糖能夠更好地對精子進(jìn)行保護(hù),提高精子的完整性。本發(fā)明所提供的一種精子保存的方法,其采用離心法去除精液中的精清,再與上述精子干燥液混合,最后采用蒸發(fā)干燥法進(jìn)行干燥。整個過程操作簡單,不需要復(fù)雜的冷凍、干燥設(shè)備,其處理后的精子可以進(jìn)行長時間保存,而依然保持較高的完整性,特別適合野外采集、收集野生動物精液。具體實施方式為使本發(fā)明實施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚,下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實施例中未注明具體條件者,按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者,均為可以通過市售購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對本發(fā)明實施例的一種精子干燥液以及精子保存的方法進(jìn)行具體說明。一種精子干燥液,每升精子干燥液包括:氯化鈉6~7g、氯化鉀0.2~0.3g、氯化鈣0.3~0.6g、氯化鎂0.05~0.1g、碳酸氫鈉2~3g、磷酸鈉0.03~0.05g、葡萄糖1~1.2g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.5~3g、棉籽糖10~50mmol和余量的水。該精子干燥液中富含多種無機鹽類成分,具有維持滲透壓、控制酸堿平衡的作用。同時,該精子干燥液還含有葡萄糖、棉籽糖等糖類成分,可以供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量。在無機鹽類成分和糖類成分的共同存在下,該精子干燥液能夠模擬出生物體內(nèi)精子生長狀態(tài)下的環(huán)境狀態(tài),提供精子在體外生存并維持一定代謝活動的基本需要。本發(fā)明中,在該精子干燥液中加入了一定量的棉籽糖。棉籽糖(Raffinose)是自然界中最知名的一種三糖,由半乳糖、果糖和葡萄糖結(jié)合而成。其有較好的溶解性,易溶于水,微溶于乙醇等極性溶劑,不溶于石油醚等非極性溶劑。同時,其具有較好的熱穩(wěn)定性和酸穩(wěn)定性,能夠在一定的高溫和強酸性下不發(fā)生分解。與其他低聚糖不同,棉籽糖晶體粉末含有5分子結(jié)晶水,即使在相對濕度90%的環(huán)境下也不會吸濕結(jié)塊,相比其他低聚糖粉末較強的吸濕性。在保存精子的過程中,棉籽糖不但是主要非電解質(zhì),可緩和精漿的電離程度,而且是精子離體后的主要能源物質(zhì),也是稀釋液中調(diào)節(jié)滲透壓的重要物質(zhì)之一。同時,棉籽糖的分子量較大,較之小分子的糖能夠更有效穩(wěn)定精子質(zhì)膜的蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物,保護(hù)精子質(zhì)膜免受氧化,從而提高精子的完整性。優(yōu)選地,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6.5~7g、氯化鉀0.25~0.3g、氯化鈣0.35~0.5g、氯化鎂0.07~0.1g、碳酸氫鈉2.4~2.8g、磷酸鈉0.04~0.05g、葡萄糖1~1.1g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.6~2.9g、棉籽糖10~50mmol和余量的水。在該優(yōu)選值下的精子干燥液,對精子的保存效果更佳,能有效保持精子的完整性。該精子干燥液的pH值為7.2~7.6,優(yōu)選為7.4。該pH范圍是生物體內(nèi)精子生長狀態(tài)下的pH值,能夠有效增加精子在體外存活的時間,利于保證精子的保存。一種精子保存的方法,包括:將稀釋后的精液離心去除精清后與上述精子干燥液混合,得到精子懸浮液。所用精液最好為新采集的新鮮精液,其精子的活力大概在75~98%,隨著時間的推移,精子活力逐漸下降,并逐漸死亡。新采集的精液需要用稀釋液進(jìn)行稀釋,其中,稀釋液按重量份數(shù)計,包括:葡萄糖5~10份,檸檬酸鈉0.5~1份,水80~100份。在本發(fā)明中,將精液與稀釋液按質(zhì)量比1:0.8~1.2進(jìn)行混合,該比例為發(fā)明人結(jié)合自身經(jīng)驗與創(chuàng)造性勞動得到的優(yōu)選值,在該比例范圍內(nèi)對精液進(jìn)行稀釋,可以使稀釋后的精液中精子的濃度在1×106~1.2×106個/mL的范圍內(nèi),從而獲得最佳的稀釋效果。對精液進(jìn)行稀釋可以降低精子的新陳代謝速率,同時,稀釋液中的糖分也可以為精子提供營養(yǎng)。除了提供營養(yǎng)之外,糖分還能夠在親水組織中替代水分子,而這一特性就可以對細(xì)胞在經(jīng)歷快速的溫度變化過程中起到保護(hù)細(xì)胞膜的作用。糖分還可以通過增加稀釋液的黏性來改變稀釋液的有效性,這樣能夠防止冰晶的形成且易于形成玻璃體化。并且,糖分還可以阻止由極度脫水所伴隨的體積、滲透壓變化而引起的膜破壞。進(jìn)一步地,離體后的精液通過離心的方法去除精清。精清成分非常適合精子生存,對精子起營養(yǎng)和支持作用,但有研究認(rèn)為精清中同時存在著許多尚未被人類所了解清楚的蛋白質(zhì)成分,在多種動物的精清中已發(fā)現(xiàn)許多抗生育因子,如去能因子、人類抗生育因子、兔頂體穩(wěn)定因子、牛精漿素和山羊卵黃凝結(jié)酶等,這些因素通過抑制精子的獲能、頂體反應(yīng)的發(fā)生、誘導(dǎo)頂體酶的提前釋放等機制影響精子活力。多數(shù)研究認(rèn)為精液保存需要進(jìn)行去精清處理,主要是精清中的磷脂酶或類磷脂酶等物質(zhì)對精子的品質(zhì)十分不利。去除精清的方式有很多,其中,離心是最簡單、最直接的去除精清的方法,其需要的設(shè)備簡單,操作方便,去除效果佳。優(yōu)選地,將稀釋后的所述精液在分離因數(shù)為600~800g的條件下離心2~5min。在該條件下離心可以在保證不對精子造成過度損傷的情況下達(dá)到最好的分離效果。離心時間過長或轉(zhuǎn)速過高,都會使精子因相互積壓而造成損傷,從而影響精子活力。去除精清后的精液需要與精子干燥液進(jìn)行混合,并形成精子懸浮液。精子干燥液中所包含的鹽分和糖分可以模擬精子在體內(nèi)的生存環(huán)境,維持精子生存環(huán)境的滲透壓和pH值,可以有效提高精子的完整性。同時,精子干燥液中所包含的糖分,與稀釋液中的糖分類似,同樣可以起到提供能量和保護(hù)精子細(xì)胞膜的作用。其中,精子懸浮液中精子的濃度為1×106~2×106個/mL。該范圍值是發(fā)明基于自身經(jīng)驗結(jié)合創(chuàng)造性勞動得到的優(yōu)選值,在該范圍內(nèi)的精子懸浮液,后續(xù)干燥過程中,干燥效果佳,且鹽分和糖分含量合適,能最大限度的保證精子的完整性。本發(fā)明提供的一種精子保存的方法,還包括:將精子懸浮液蒸發(fā)干燥后保存。優(yōu)選地,精子懸浮液的蒸發(fā)干燥條件選擇在室溫下自然蒸發(fā)干燥20~40min。自然蒸發(fā)的過程操作簡單,無需任何復(fù)雜設(shè)備,成本低、效率高,具有即時性且不受地域條件的限制,特別適合野外采集、收集野生動物精液情況。進(jìn)一步地,可以先將精子懸浮液分散成體積為10~30μL懸浮液滴,再進(jìn)行自然蒸發(fā)干燥。分散后的精子懸浮液與空氣的接觸面積增大,可以增加干燥效果。懸浮液滴的體積大小是發(fā)明人結(jié)合自身經(jīng)驗與創(chuàng)造性勞動得到優(yōu)選值,在體積范圍內(nèi)懸浮液滴的干燥速度快,干燥效果好,且干燥后的精子密度適中,適合精子的長期保存。實際操作中,可以采用移液槍從精子懸浮液中抽取10~30μL,并滴到載玻片上形成懸浮液滴,然后讓懸浮液滴自然蒸發(fā)干燥,再將載玻片放到載玻片盒內(nèi)進(jìn)行統(tǒng)一保存即可。用該保存精子的方法,在室溫下,可以進(jìn)行一個月的短期保存,而保證精子有較高的完整度。在4℃的條件下,可以達(dá)到半年至一年的保存時間,而將溫度降至-80℃或液氮中,更是可以實現(xiàn)精子的長期保存。進(jìn)一步地,保存過程最好進(jìn)行避光處理。若條件允許的情況下,進(jìn)行真空保存,得到的保存效果更佳。以下結(jié)合實施例對本發(fā)明的特征和性能作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。值得注意的是,為了實驗數(shù)據(jù)的可比性,如無特殊說明,以下實施例中所使用的精液來源于吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院,18~22個月齡性成熟的杜洛克公豬,但不能以此認(rèn)為本發(fā)明的精子保存的方法僅限于此。在本發(fā)明的其它較佳實施例中,該精子保存的方法對其它生物的精子同樣能起到很好的保存效果。實施例1本實施例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6.82g、氯化鉀0.28g、無水氯化鈣0.35g、六水氯化鎂0.09g、碳酸氫鈉2.51g、磷酸鈉0.048g、葡萄糖1.08g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.76g、棉籽糖10mmol和余量的水。本實施例還提供一種精子保存的方法,包括:S1.將采集到的新鮮精液用稀釋液進(jìn)行稀釋,直至精液中精子的密度為1×106個/mL。S2.將上述稀釋后的精液用離心機離心除去精清,離心機的離心因數(shù)為700g,離心時間3min。S3.將離心后的精液與上述精子干燥液混合,得到精子懸浮液,精子懸浮液中精子的密度為1~2×106個/mL。S4.將精子懸浮液用移液槍每20μL一小滴滴到載玻片形成懸浮液滴,并于室溫下自然蒸發(fā)干燥30min。S5.將載玻片放到載玻片盒中進(jìn)行保存。實施例2本實施例提供一種精子干燥液,其與實施例1中所提供的一種精子干燥液的成分基本相同,其區(qū)別在于,每升精子干燥液中包含棉籽糖的量為20mmol。本實施例還提供一種精子保存的方法,其與實施例1中所提供的一種精子保存的方法相同,具體細(xì)節(jié)可參照實施例1。實施例3本實施例提供一種精子干燥液,其與實施例1中所提供的一種精子干燥液的成分基本相同,其區(qū)別在于,每升精子干燥液中包含棉籽糖的量為50mmol。本實施例還提供一種精子保存的方法,其與實施例1中所提供的一種精子保存的方法相同,具體細(xì)節(jié)可參照實施例1。實施例4本實施例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6g、氯化鉀0.25g、無水氯化鈣0.5g、六水氯化鎂0.1g、碳酸氫鈉2g、磷酸鈉0.05g、葡萄糖1g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.5g、棉籽糖20mmol和余量的水。本實施例還提供一種精子保存的方法,包括:S1.將采集到的新鮮精液用稀釋液進(jìn)行稀釋,直至精液中精子的密度為1.2×106個/mL。S2.將上述稀釋后的精液用離心機離心除去精清,離心機的離心因數(shù)為600g,離心時間5min。S3.將離心后的精液與上述精子干燥液混合,得到精子懸浮液,精子懸浮液中精子的密度為1~2×106個/mL。S4.將精子懸浮液用移液槍每30μL一小滴滴到載玻片形成懸浮液滴,并于室溫下自然蒸發(fā)干燥40min。S5.將載玻片放到載玻片盒中進(jìn)行保存。實施例5本實施例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6.5g、氯化鉀0.3g、無水氯化鈣0.6g、六水氯化鎂0.05g、碳酸氫鈉2.4g、磷酸鈉0.03g、葡萄糖1.2g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸3g、棉籽糖20mmol和余量的水。本實施例還提供一種精子保存的方法,包括:S1.將采集到的新鮮精液用稀釋液進(jìn)行稀釋,直至精液中精子的密度為1.2×106個/mL。S2.將上述稀釋后的精液用離心機離心除去精清,離心機的離心因數(shù)為800g,離心時間2min。S3.將離心后的精液與上述精子干燥液混合,得到精子懸浮液,精子懸浮液中精子的密度為1~2×106個/mL。S4.將精子懸浮液用移液槍每10μL一小滴滴到載玻片形成懸浮液滴,并于室溫下自然蒸發(fā)干燥20min。S5.將載玻片放到載玻片盒中進(jìn)行保存。實施例6本實施例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉7g、氯化鉀0.2g、無水氯化鈣0.3g、六水氯化鎂0.1g、碳酸氫鈉3g、磷酸鈉0.05g、葡萄糖1g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.9g、棉籽糖20mmol和余量的水。本實施例還提供一種精子保存的方法,包括:S1.將采集到的新鮮精液用稀釋液進(jìn)行稀釋,直至精液中精子的密度為1×106個/mL。S2.將上述稀釋后的精液用離心機離心除去精清,離心機的離心因數(shù)為700g,離心時間3min。S3.將離心后的精液與上述精子干燥液混合,得到精子懸浮液,精子懸浮液中精子的密度為1~2×106個/mL。S4.將精子懸浮液用移液槍每20μL一小滴滴到載玻片形成懸浮液滴,并于室溫下自然蒸發(fā)干燥30min。S5.將載玻片放到載玻片盒中進(jìn)行保存。實施例7本實施例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6.5g、氯化鉀0.25g、無水氯化鈣0.35g、六水氯化鎂0.07g、碳酸氫鈉2.8g、磷酸鈉0.04g、葡萄糖1.1g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.6g、棉籽糖20mmol和余量的水。本實施例還提供一種精子保存的方法,其與實施例6中所提供的一種精子保存的方法相同,具體細(xì)節(jié)可參考實施例6。對比例本對比例提供一種精子干燥液,每升上述精子干燥液包括:氯化鈉6.82g、氯化鉀0.28g、無水氯化鈣0.35g、六水氯化鎂0.09g、碳酸氫鈉2.51g、磷酸鈉0.048g、葡萄糖1.08g、4-羥乙基哌嗪乙磺酸2.76g和余量的水。本對比例還提供一種精子保存的方法,其與實施例1中所提供的一種精子保存的方法相同,具體細(xì)節(jié)可參照實施例1。試驗例1取實施例1~3和對比例所提供的精子干燥液,并按照實施例1所提供的一種精子保存的方法對精液進(jìn)行處理得到干燥精液樣本,將上述干燥精液樣本于室溫下保存1個月,并對其做如下測試。1.采用TUNEL法(DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法)對各干燥精液樣本進(jìn)行測試,用流式細(xì)胞計數(shù)儀來檢測出凋亡精子的量,供試精子的量為10000個。計算測試結(jié)果為陽性的細(xì)胞,也即DNA斷裂的細(xì)胞所占的百分比,計算結(jié)果如表1所示。2.采用ICSI(卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù))將各干燥精液樣本與卵細(xì)胞結(jié)合,并將得到的胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng),在培養(yǎng)至48h時觀察卵裂率,卵裂率=卵裂胚胎數(shù)/供試卵數(shù)×100%,在培養(yǎng)至168h時觀察囊胚率,囊胚率=囊胚數(shù)/供試卵數(shù)×100%。每一個干燥精液樣本重復(fù)試驗8次,計算結(jié)果如表2所示。表1TUNEL測試陽性細(xì)胞比率陽性細(xì)胞比率/%實施例174實施例240實施例369對比例78新鮮精液8表2卵裂率以及囊胚發(fā)育率由表1可以看出,在1個月的室溫保存后,精子干燥液中添加有棉籽糖的情況(實施例1~3),較之精子干燥液中未添加有棉籽糖的情況(對比例),干燥精子樣本中DNA斷裂的細(xì)胞所占比例均有降低,細(xì)胞的完整性更高;其中,當(dāng)棉籽糖的含量為20mmol/L的時候,效果最為顯著,DNA斷裂的細(xì)胞所占比例僅為40%。同時,實施例1~3的干燥精子樣本較之對比例的干燥精子樣本,在與卵細(xì)胞結(jié)合后,卵裂率和囊胚發(fā)育率均有提高,這種提升效果,同樣是在棉籽糖的含量為20mmol/L的時候達(dá)到最佳。說明本發(fā)明所提供的一種精子干燥液對精子細(xì)胞有較為明顯的保護(hù)作用,且在棉籽糖的含量為20mmol/L的時候,能得到最優(yōu)的保護(hù)效果。試驗例2取實施例2所提供的精子干燥液,并按照實施例1所提供的一種精子保存的方法對精液進(jìn)行處理得到干燥精液樣本,將上述干燥精液樣本分別于室溫、4℃、-20℃以及-80攝氏度下保存,且分別在1個月、3個月、1年和2年的時間對個干燥精液樣本取樣,并對其做如下測試。1.采用TUNEL法(DNA斷裂的原位末端標(biāo)記法)對干燥精液樣本進(jìn)行測試,用流式細(xì)胞計數(shù)儀來檢測出凋亡精子的量,供試精子的量為10000個。計算測試結(jié)果為陽性的細(xì)胞,也即DNA斷裂的細(xì)胞所占的百分比,計算結(jié)果如表3所示。2.采用ICSI(卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù))將干燥精液樣本與卵細(xì)胞結(jié)合,并將得到的胚胎進(jìn)行體外培養(yǎng),在培養(yǎng)至48h時觀察卵裂率,卵裂率=卵裂胚胎數(shù)/供試卵數(shù)×100%,在培養(yǎng)至168h時觀察囊胚率,囊胚率=囊胚數(shù)/供試卵數(shù)×100%。每一個干燥精液樣本重復(fù)試驗8次,計算結(jié)果如表4所示。表3TUNEL測試陽性細(xì)胞比率表4卵裂率以及囊胚發(fā)育率由表3可以看出,實施例2所提供的干燥精子樣本室溫下可以進(jìn)行短期保存,在1個月甚至3個月的時間內(nèi),仍能保持較高的完整性。而當(dāng)溫度降低到4℃時,該干燥精子樣本可以在保存1年時,仍保持較高的完整性。而當(dāng)溫度繼續(xù)降低到-20℃甚至是-80℃時,更是能進(jìn)行長期保存。同時,由表4可以看出,實施例2所提供的干燥精子樣本室溫下短期保存,仍能與卵細(xì)胞結(jié)合,并維持較高的卵裂率和囊胚發(fā)育率。當(dāng)溫度降低到4℃時,該干燥精子樣本在保存1年后,仍能達(dá)到75%以上的卵裂率和30%以上的囊胚發(fā)育率。而當(dāng)溫度繼續(xù)降低到-20℃甚至是-80℃時,更是可以實現(xiàn)長期保存后仍保持良好的活性。綜上所述,本發(fā)明所提供的一種精子干燥液,能夠模擬精子生長狀態(tài)下的環(huán)境狀態(tài),具有維持滲透壓、控制酸堿平衡、供給細(xì)胞生存代謝所必需的能量和無機鹽成分等作用,可提供精子在體外生存并維持一定代謝活動的基本需要。在本發(fā)明中,在該精子干燥液中加入了一定量的棉籽糖,棉籽糖不但是主要非電解質(zhì),可緩和精漿的電離程度,而且是精子離體后的主要能源物質(zhì),也是稀釋液中調(diào)節(jié)滲透壓的重要物質(zhì)之一。同時,棉籽糖的分子量較大,較之小分子的糖能夠更好地對精子進(jìn)行保護(hù),提高精子的完整性。本發(fā)明所提供的一種精子保存的方法,其采用離心法去除精液中的精清,再與上述精子干燥液混合,最后采用蒸發(fā)干燥法進(jìn)行干燥。整個過程操作簡單,不需要復(fù)雜的冷凍、干燥設(shè)備,其處理后的精子可以進(jìn)行長時間保存,而依然保持較高的完整性,特別適合野外采集、收集野生動物精液。以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已,并不用于限制本發(fā)明,對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說,本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi),所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等,均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3 
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