本發(fā)明涉及一種生殖醫(yī)學(xué)醫(yī)療衛(wèi)生技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種胚胎玻璃化冷凍器及使用方法。

背景技術(shù)：

患者在進(jìn)行IVF(ICSI)----體外受精(卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射技術(shù))治療時，在一個超排治療周期中一般會獲得多個質(zhì)量好的胚胎，但在本周期中往往不能一次全部移植或不宜移植，可以將剩余或全部的優(yōu)質(zhì)胚胎進(jìn)行冷凍保存。胚胎冷凍保存可使病人在一個治療周期中獲得多次胚胎移植的機(jī)會，使胚胎的利用率達(dá)到了最大的限度，大大提高了IVF(ICSI)治療的成功率。

胚胎冷凍保存技術(shù)是指采用慢速或快速的降溫方法，將胚胎低溫冷凍，然后超低溫保存在-196℃的液氮中。目前胚胎冷凍保存技術(shù)有慢速程序化冷凍技術(shù)和玻璃化冷凍技術(shù)兩種，玻璃化冷凍技術(shù)比慢速程序化冷凍技術(shù)具有簡單、快速、臨床妊娠率和胚胎著床率高的優(yōu)點，因此目前各大生殖中心基本上采用玻璃化冷凍胚胎進(jìn)行保存。在進(jìn)行玻璃化冷凍的過程中，在最后一步胚胎放入冷凍液后要在60秒內(nèi)置于載桿上并投入液氮，但胚胎會浮在冷凍液上層難以在60秒內(nèi)吸取，尤其是對剛參加工作操作不熟練的實驗室工作人員，如何簡化胚胎玻璃化冷凍操作，避免操作失誤，提高玻璃化冷凍胚胎復(fù)蘇后的存活率(目前的存活率為94％)成為本行業(yè)急需解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的問題是提供一種結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、玻璃化冷凍胚胎復(fù)蘇后存活率高的胚胎玻璃化冷凍器及使用方法。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種胚胎玻璃化冷凍器，包括殼體、拉桿、壓桿、拉桿活塞、壓桿活塞、彈簧、冷凍液吸管及胚胎針；所述殼體內(nèi)腔的上半部被分隔形成了相互獨立的壓縮腔Ⅰ和壓縮腔Ⅱ，殼體內(nèi)腔的下半部為廢液腔，所述壓縮腔Ⅰ和壓縮腔Ⅱ均與廢液腔相連通；

所述殼體頂端設(shè)置有兩個各自連通壓縮腔Ⅰ、壓縮腔Ⅱ的開口；

位于壓縮腔Ⅰ內(nèi)的拉桿活塞與壓縮腔Ⅰ的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動相連，拉桿的底部穿過連通壓縮腔Ⅰ的開口后與拉桿活塞固定相連；在壓縮腔Ⅰ的上下端分別設(shè)置用于限定拉桿活塞滑動位置的拉桿活塞上限限定環(huán)、拉桿活塞下限限定環(huán)；

位于壓縮腔Ⅱ內(nèi)的壓桿活塞與壓縮腔Ⅱ的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動相連，壓桿的底部穿過連通壓縮腔Ⅱ的開口后與壓桿活塞固定相連；在壓縮腔Ⅱ的上下端分別設(shè)置用于限定壓桿活塞滑動位置的壓桿活塞上限限定環(huán)和彈簧固定環(huán)，在壓桿活塞和彈簧固定環(huán)之間設(shè)置彈簧，所述彈簧的兩端分別抵接壓桿活塞和彈簧固定環(huán)；

所述殼體側(cè)壁上設(shè)置有連通廢液腔頂部的冷凍液吸管；所述冷凍液吸管下端設(shè)置有冷凍腔，胚胎針的端部位于冷凍腔內(nèi)。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的改進(jìn)：所述胚胎針包括均中空且上下相連通的胚胎針上段和胚胎針下段，胚胎針上段的頂部伸入冷凍腔內(nèi)；

所述胚胎針上段的頂部為網(wǎng)狀半球形，網(wǎng)孔的孔徑小于胚胎的直徑；

胚胎針下段的下端為開口端。

備注說明：胚胎針上段的頂部為網(wǎng)狀半球形；這樣的結(jié)構(gòu)既可以攔截住胚胎，使胚胎始終位于胚胎針上段的頂部，而不會進(jìn)入冷凍腔和冷凍液吸管；又能確保液體的通過。

胚胎針上段和胚胎針下段的內(nèi)腔橫截面大于胚胎的直徑，從而胚胎在胚胎針內(nèi)的移動。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：所述胚胎針上段與胚胎針下段的夾角為145～155°(較佳為150°)。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：

拉桿頂端設(shè)置有拉板，拉板的尺寸大于連通壓縮腔Ⅰ的開口的尺寸，拉板位于壓縮腔Ⅰ的上方；

壓桿頂端設(shè)置有壓板，壓板的尺寸大于連通壓縮腔Ⅱ的開口的尺寸，壓板位于壓縮腔Ⅱ的上方。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：壓縮腔Ⅰ的容積大于壓縮腔Ⅱ的容積。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：壓縮腔Ⅰ的橫截面大于壓縮腔Ⅱ的橫截面。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：所述殼體的外表面設(shè)置有平衡液刻度線。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的進(jìn)一步改進(jìn)：冷凍腔(15)為球狀空腔。

本發(fā)明還同時提供了上述胚胎玻璃化冷凍器的使用方法，包括以下步驟：

1)、先向下按動拉板，使拉桿在壓縮腔Ⅰ中向下移動，直至拉桿活塞與拉桿活塞下限限定環(huán)相接觸為止；然后向下按動壓板，壓桿在壓縮腔Ⅱ中向下移動，壓桿活塞壓縮彈簧，直至彈簧被壓縮至極限為止；殼體內(nèi)的空氣被壓縮后通過冷凍液吸管、再經(jīng)胚胎針排出殼體外；

先將胚胎針下段開口端置入含有胚胎的培養(yǎng)液中，之后松開壓板，壓桿在彈簧彈力的作用下復(fù)原，使殼體內(nèi)的壓力小于環(huán)境壓力，產(chǎn)生的吸力吸取含有胚胎的培養(yǎng)液；含有胚胎的培養(yǎng)液依次經(jīng)過胚胎針下段、胚胎針上段進(jìn)入位于冷凍腔內(nèi)的胚胎針上段的頂部；胚胎被截留在胚胎針上段的頂部；培養(yǎng)液先通過胚胎針上段頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔內(nèi)，再沿著冷凍液吸管流入廢液腔內(nèi)；

2)、將胚胎針下段開口端置入平衡液中，向上拉動拉板，使拉桿在壓縮腔Ⅰ中向上移動，在殼體內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段開口端吸取平衡液，平衡液依次經(jīng)過胚胎針下段、胚胎針上段、胚胎針上段頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔從而實現(xiàn)培養(yǎng)液的被置換；當(dāng)于拉桿的作用下拉桿活塞被拉升至底端與平衡液刻度線平行時，保持6～10分鐘(例如為8分鐘)然后進(jìn)行下述步驟3)；

備注說明：該步驟2)的作用是將胚胎針、冷凍腔和冷凍液吸管中的培養(yǎng)液全部替換成平衡液；被替換的培養(yǎng)液以及多余的平衡液會從冷凍腔經(jīng)過冷凍液吸管流入廢液腔中；

3)、將胚胎針下段開口端置入冷凍液中，往上繼續(xù)拉動拉板，直至拉桿活塞與拉桿活塞上限限定環(huán)相接觸為止，在殼體內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段開口端吸取冷凍液；冷凍液依次經(jīng)過胚胎針下段、胚胎針上段、胚胎針上段頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔從而實現(xiàn)平衡液的被置換；保持30±3秒然后進(jìn)行下述的步驟4)

備注說明：該步驟3)的作用是將胚胎針、冷凍腔和冷凍液吸管中的平衡液迅速的全部替換冷凍液；被替換的平衡液以及多余的冷凍液會從冷凍腔經(jīng)過冷凍液吸管流入廢液腔中；

4)、向下按動壓板，壓桿在壓縮腔Ⅱ中向下移動，在殼體內(nèi)外空氣壓差的作用下，殼體內(nèi)的氣體將位于胚胎針上段頂部內(nèi)的胚胎從胚胎針中排出至載桿的胚胎載片上，之后將載桿迅速投入液氮中(迅速投入液氮中，此為常規(guī)技術(shù))。

作為本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器的使用方法的改進(jìn)：

當(dāng)在拉桿的作用下拉桿活塞被拉升至底端與平衡液刻度線平行時，從胚胎針下段開口端吸入的平衡液為200μL；

當(dāng)拉桿活塞被繼續(xù)拉升至與拉桿活塞上限限定環(huán)相接觸時，從胚胎針下段開口端吸入的冷凍液為200μL。

本發(fā)明具有如下技術(shù)優(yōu)勢：

1、本發(fā)明在冷凍胚胎過程中只需在顯微鏡下吸放胚胎各1次，無需像現(xiàn)有技術(shù)需要在顯微鏡下吸放胚胎3次，簡化了操作；

2、分別設(shè)置了大容積的壓縮腔Ⅰ和小容積的壓縮腔Ⅱ，大容積的壓縮腔Ⅰ用于較大體積的平衡液和冷凍液的吸取，是通過抽拉拉桿實現(xiàn)的；小容積的壓縮腔Ⅱ可以提供較為靈敏的吸放力用于體積極小的胚胎(即，含有胚胎的培養(yǎng)液)吸放，是通過壓縮彈簧實現(xiàn)的；

3、冷凍液吸管下端設(shè)置有球狀的冷凍腔，該形狀的冷凍腔中可以容納足夠多的平衡液或冷凍液，可以將胚胎細(xì)胞胞質(zhì)中的水替換成平衡液中的低溫保護(hù)劑；胚胎針伸入冷凍腔的一端為網(wǎng)狀半球形，其允許液體通過又可以將胚胎攔截在胚胎針內(nèi)的處于網(wǎng)狀半球形一端，使胚胎一直在胚胎針中，不會流入冷凍液吸管內(nèi)。

4、胚胎針分為胚胎針下段與胚胎針上段，胚胎針下段與胚胎針上段呈一定角度(即，夾角為145～155°，較佳為150°)，在將胚胎置于載桿上的胚胎載片時，胚胎針下段可與顯微鏡載物臺平行，可以清楚觀察到胚胎在其中的位置。

綜上所述，本發(fā)明大大簡化了胚胎玻璃化冷凍的過程，使用時將需要玻璃化冷凍保存的胚胎(即，含胚胎的培養(yǎng)液)吸入胚胎針，再依次吸取平衡液和冷凍液，最后將胚胎置于載桿上并迅速投入液氮中，這個優(yōu)化后的冷凍過程無需像傳統(tǒng)冷凍過程需要重復(fù)吸放胚胎，特別是解決了胚胎放入冷凍液后會上浮難以在60秒內(nèi)吸取的難題。采用本發(fā)明后存活率能達(dá)到98％。

附圖說明

下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的具體實施方式作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

圖1為本發(fā)明中胚胎玻璃化冷凍器的整體結(jié)構(gòu)示意圖；

圖2為圖1的剖面示意圖。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此。

實施例1、一種胚胎玻璃化冷凍器，如圖1～2所示，包括殼體1、拉桿2、壓桿3、拉桿活塞4、壓桿活塞5、彈簧6、拉桿活塞上限限定環(huán)7、拉桿活塞下限限定環(huán)11、壓桿活塞上限限定環(huán)8、彈簧固定環(huán)12、冷凍液吸管14及胚胎針10。

殼體1為圓柱形空腔(帶有頂和底)，殼體1內(nèi)腔的上半部設(shè)置有兩個直徑一大一小的平行的圓柱形空腔，大的圓柱形空腔為壓縮腔Ⅰ91，小的圓柱形空腔為壓縮腔Ⅱ92，壓縮腔Ⅰ91的容積大于壓縮腔Ⅱ92的容積，且，壓縮腔Ⅰ91的橫截面大于壓縮腔Ⅱ92的橫截面。

壓縮腔Ⅰ91和壓縮腔Ⅱ92被相互隔離，互不相通。殼體1內(nèi)腔的下半部為廢液腔93，所述壓縮腔Ⅰ91和壓縮腔Ⅱ92均與廢液腔93相連通；廢液腔93用于吸收廢棄/多余的胚胎培養(yǎng)液、平衡液或冷凍液。

殼體1頂端設(shè)置有兩個各自連通壓縮腔Ⅰ91和壓縮腔Ⅱ92的開口。

位于壓縮腔Ⅰ91內(nèi)的拉桿活塞4與壓縮腔Ⅰ91的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動相連，拉桿2的底部穿過連通壓縮腔Ⅰ91的開口后與拉桿活塞4固定相連；在壓縮腔Ⅰ91的上下端分別設(shè)置用于限定拉桿活塞4滑動位置的拉桿活塞上限限定環(huán)7、拉桿活塞下限限定環(huán)11。拉桿活塞上限限定環(huán)7和拉桿活塞下限限定環(huán)11將拉桿活塞4的位置限定在兩者之間，具有防止拉桿活塞4脫出壓縮腔Ⅰ91的作用。拉桿2頂端設(shè)置有拉板21，拉板21的尺寸大于連通壓縮腔Ⅰ91的開口的尺寸，拉板21位于壓縮腔Ⅰ91的上方。

位于壓縮腔Ⅱ92內(nèi)的壓桿活塞5與壓縮腔Ⅱ92的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動相連，壓桿3的底部穿過連通壓縮腔Ⅱ92的開口后與壓桿活塞5固定相連；在壓縮腔Ⅱ92的上下端分別設(shè)置用于限定壓桿活塞5滑動位置的壓桿活塞上限限定環(huán)8和彈簧固定環(huán)12，在壓桿活塞5和彈簧固定環(huán)12之間設(shè)置彈簧6，所述彈簧6的兩端分別抵接壓桿活塞5和彈簧固定環(huán)12。當(dāng)壓桿活塞5與壓桿活塞上限限定環(huán)8相接觸時，壓桿活塞5恰好與彈簧6接觸，但是沒有對彈簧6產(chǎn)生壓力。彈簧6的同心圓直徑比壓桿活塞5略小，能防止彈簧6與壓縮腔Ⅱ92內(nèi)壁接觸。壓桿活塞上限限定環(huán)8和彈簧固定環(huán)12將壓桿活塞5的位置限定在兩者之間，具有防止壓桿活塞5脫出壓縮腔Ⅱ92的作用。壓桿3頂端設(shè)置有壓板31，壓板31的尺寸大于連通壓縮腔Ⅱ92的開口的尺寸，壓板31位于壓縮腔Ⅱ92的上方。

設(shè)置拉板21和壓板31均能方便使用操作。

殼體1側(cè)壁上設(shè)置有連通廢液腔93頂部的冷凍液吸管14；所述冷凍液吸管14下端設(shè)置有冷凍腔15，所述冷凍腔15為球狀空腔。

胚胎針10包括均中空且上下相連的胚胎針上段101和胚胎針下段102，胚胎針上段101和胚胎針下段102相連通；胚胎針上段101的頂部伸入冷凍腔15內(nèi)，即，胚胎針上段101的頂部位于冷凍腔15內(nèi)。胚胎針10的內(nèi)徑(即，胚胎針上段101的內(nèi)徑和胚胎針下段102的內(nèi)徑)比早期胚胎的直徑略大，從而便于胚胎順利在該胚胎針10中的移動。

所述胚胎針上段101的頂部為網(wǎng)狀半球形，網(wǎng)孔的孔徑小于胚胎的直徑；這樣既可以攔截住胚胎，使胚胎始終位于胚胎針上段101的頂部，而不會進(jìn)入冷凍腔15和冷凍液吸管14；又能確保液體(包括培養(yǎng)液、平衡液、冷凍液)通過該網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔15內(nèi)。胚胎針下段102的下端為開口端，該開口端為圓形開口，便于胚胎的吸取。

所述胚胎針上段101與胚胎針下段102的夾角為145～155°(較佳為150°)。此角度時，在立體顯微鏡下，手持胚胎玻璃化冷凍器，胚胎針下段102可與顯微鏡載物臺平行，在將胚胎置于載桿時，可觀察到胚胎在胚胎針下段102中的位置，可以在胚胎剛剛到達(dá)胚胎針下段102的開口端時，再將胚胎針下段102的開口端置于載桿的胚胎載片上，從而實現(xiàn)將胚胎置于胚胎載片上，這樣可以讓胚胎載片上冷凍液的量最少。

殼體1的外表面設(shè)置有平衡液刻度線16。

本發(fā)明的胚胎玻璃化冷凍器屬于一次性使用器具。

本發(fā)明的實際使用過程：

1)、先向下按動拉板21，使拉桿2在壓縮腔Ⅰ91中向下移動，直至拉桿活塞4與拉桿活塞下限限定環(huán)11相接觸為止；然后向下按動壓板31，壓桿3在壓縮腔Ⅱ92中向下移動，壓桿活塞5壓縮彈簧6，直至彈簧6被壓縮至極限為止；殼體1內(nèi)的空氣被壓縮后通過冷凍液吸管14、再經(jīng)胚胎針10排出殼體1外；

先將胚胎針下段102的開口端置入含有胚胎的培養(yǎng)液中；之后松開壓板31，壓桿3在彈簧6彈力的作用下重新復(fù)原，從而使殼體1內(nèi)的壓力小于環(huán)境壓力；產(chǎn)生的吸力吸取含有胚胎的培養(yǎng)液，含有胚胎的培養(yǎng)液依次經(jīng)過胚胎針下段102、胚胎針上段101，進(jìn)入位于冷凍腔15內(nèi)的胚胎針上段101的頂部；胚胎被截留在胚胎針上段101的頂部；培養(yǎng)液先通過胚胎針上段101頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔15內(nèi)，再沿著冷凍液吸管14流入廢液腔93內(nèi)。此過程需要使用顯微鏡載物臺觀察，因為胚胎肉眼幾乎不可見。

2)、將胚胎針下段102開口端置入平衡液中，向上拉動拉板21，使拉桿2在壓縮腔Ⅰ91中向上移動，在殼體1內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段102開口端吸取平衡液，平衡液依次經(jīng)過胚胎針下段102、胚胎針上段101、胚胎針上段101頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔15從而實現(xiàn)培養(yǎng)液的被置換；當(dāng)于拉桿2的作用下拉桿活塞4被拉升至底端與平衡液刻度線16平行時，保持8分鐘然后進(jìn)行下述步驟3)。

當(dāng)拉桿活塞4被拉升至底端與平衡液刻度線16平行時，從胚胎針下段102開口端吸入的平衡液的體積為200μL。吸入的平衡液的體積過大會浪費平衡液，也會讓后續(xù)需要吸取的冷凍液不足200μL；過低會使吸取的平衡液不足200μL，從而影響胚胎的預(yù)平衡。

備注說明：該步驟2)的作用是將胚胎針10、冷凍腔15和冷凍液吸管14中的培養(yǎng)液全部替換成平衡液；被替換的培養(yǎng)液以及多余的平衡液會從冷凍腔15經(jīng)過冷凍液吸管14流入廢液腔93中。

3)、將胚胎針下段102開口端置入冷凍液中，往上繼續(xù)拉動拉板21，直至拉桿活塞4與拉桿活塞上限限定環(huán)7相接觸為止，在殼體1內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段102開口端吸取冷凍液；冷凍液依次經(jīng)過胚胎針下段102、胚胎針上段101、胚胎針上段101頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔15從而實現(xiàn)平衡液的被置換；保持30秒然后進(jìn)行下述的步驟4)。

此步驟中，從胚胎針下段102開口端吸入的冷凍液的體積為200μL。

備注說明：該步驟3)的作用是將胚胎針10、冷凍腔15和冷凍液吸管14中的平衡液迅速替換冷凍液；被替換的平衡液以及多余的冷凍液會從冷凍腔15經(jīng)過冷凍液吸管14流入廢液腔93中；

4)、向下按動壓板31，壓桿3在壓縮腔Ⅱ92中向下移動，在殼體1內(nèi)外空氣壓差的作用下，殼體1內(nèi)的氣體將位于胚胎針上段101頂部(此胚胎針上段101頂部位于冷凍腔15中)內(nèi)的胚胎從胚胎針10中排出至載桿的胚胎載片上，之后將載桿迅速投入液氮中。此過程需要使用顯微鏡載物臺觀察，因為胚胎肉眼幾乎不可見。

載桿例如可選用KITAZATO Biopharma公司生產(chǎn)的玻璃化冷凍載桿。載桿作為冷凍胚胎的載體，可以在載桿上標(biāo)記胚胎信息，置入液氮中保存，需要復(fù)蘇胚胎時，可以根據(jù)標(biāo)記的信息從液氮中取出需要的冷凍胚胎進(jìn)行解凍。

本發(fā)明先把胚胎放入較低濃度的玻璃化溶液(平衡液)中，平衡一定時間，使平衡液中的低溫保護(hù)劑滲入胞質(zhì)；然后將胚胎移入較高濃度的玻璃化溶液(冷凍液)中，既可縮短平衡時間又可防止低溫保護(hù)劑的化學(xué)毒性并限制其過度滲透。

采用本發(fā)明，胚胎的存活率能達(dá)到98％。

對比例1、僅僅取消實施例1中的位于壓縮腔Ⅱ92的彈簧6的使用，其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)吸放胚胎時，推拉壓桿3產(chǎn)生的吸放力難以控制，不能很好的吸取和釋放胚胎；還會導(dǎo)致將含胚胎的冷凍液置于載桿的胚胎載片上時液滴過大的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為78％。

對比例2、取消實施例1中整個壓縮腔Ⅱ92，包括相應(yīng)的取消以下所有部件：連通壓縮腔Ⅱ92的開口、壓桿3、壓桿活塞5、彈簧6、壓桿活塞上限限定環(huán)8和彈簧固定環(huán)12。其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)推拉拉桿2產(chǎn)生的吸放力太大，可能導(dǎo)致胚胎損傷或丟失不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為61％。

對比例3-1、將平衡液刻度線16在殼體1上的位置相對于實施例1而言向上移動，即，當(dāng)拉桿活塞4被拉升至底端與平衡液刻度線16平行時，從胚胎針下段102開口端吸入的平衡液的體積由200μL改為300μL。其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)在步驟3)中不能很好排盡平衡液，從而稀釋冷凍液的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為85％。

對比例3-2、將平衡液刻度線16在殼體1上的位置相對于實施例1而言向下移動，即，當(dāng)拉桿活塞4被拉升至底端與平衡液刻度線16平行時，從胚胎針下段102開口端吸入的平衡液的體積由200μL改為100μL。其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)平衡液未填滿冷凍腔15，低溫保護(hù)劑不能完全滲入胚胎細(xì)胞胞質(zhì)，后續(xù)放入液氮中細(xì)胞內(nèi)會形成冰晶，從而造成細(xì)胞損傷的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為80％。

對比例4、將壓縮腔Ⅰ91、壓縮腔Ⅱ92的橫截面改成大小一致，當(dāng)然，壓縮腔Ⅰ91的高度仍然大于壓縮腔Ⅱ92，即，壓縮腔Ⅰ91的容積仍然大于壓縮腔Ⅱ92的容積。其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)吸放含胚胎的培養(yǎng)液時敏感度下降，將胚胎置于載桿的胚胎載片上時會出現(xiàn)液滴的大小難以掌握的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為76％。

對比例5、將實施例1中的“冷凍液吸管14連通廢液腔93的頂部”改成“冷凍液吸管14連通廢液腔93的中間部位”；其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)當(dāng)廢液的液面超過冷凍液吸管14連通廢液腔93的位置時，廢液會稀釋冷凍液吸管14中甚至冷凍腔15的冷凍液的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為82％。

對比例6、僅僅取消實施例1中與冷凍液吸管14連接的冷凍腔15，其余等同于實施例1。

使用該裝置進(jìn)行胚胎玻璃化冷凍實驗時，會導(dǎo)致出現(xiàn)低溫保護(hù)劑不能很好的置換胚胎中的水分，后續(xù)放入液氮中細(xì)胞內(nèi)會形成冰晶，從而造成細(xì)胞損傷的不利情況；因此，使用該裝置最終的胚胎存活率僅為66％。

最后應(yīng)說明的是：以上各實施例僅用于說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對其限制；盡管參照簽署各實施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對前處各實施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離發(fā)明各實施例方案的范圍。