1.胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:包括殼體(1)、拉桿(2)、壓桿(3)、拉桿活塞(4)、壓桿活塞(5)、彈簧(6)、冷凍液吸管(14)及胚胎針(10);所述殼體(1)內(nèi)腔的上半部被分隔形成了相互獨(dú)立的壓縮腔Ⅰ(91)和壓縮腔Ⅱ(92),殼體(1)內(nèi)腔的下半部為廢液腔(93),所述壓縮腔Ⅰ(91)和壓縮腔Ⅱ(92)均與廢液腔(93)相連通;
所述殼體(1)頂端設(shè)置有兩個(gè)各自連通壓縮腔Ⅰ(91)、壓縮腔Ⅱ(92)的開(kāi)口;
位于壓縮腔Ⅰ(91)內(nèi)的拉桿活塞(4)與壓縮腔Ⅰ(91)的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動(dòng)相連,拉桿(2)的底部穿過(guò)連通壓縮腔Ⅰ(91)的開(kāi)口后與拉桿活塞(4)固定相連;在壓縮腔Ⅰ(91)的上下端分別設(shè)置用于限定拉桿活塞(4)滑動(dòng)位置的拉桿活塞上限限定環(huán)(7)、拉桿活塞下限限定環(huán)(11);
位于壓縮腔Ⅱ(92)內(nèi)的壓桿活塞(5)與壓縮腔Ⅱ(92)的內(nèi)側(cè)壁密封的滑動(dòng)相連,壓桿(3)的底部穿過(guò)連通壓縮腔Ⅱ(92)的開(kāi)口后與壓桿活塞(5)固定相連;在壓縮腔Ⅱ(92)的上下端分別設(shè)置用于限定壓桿活塞(5)滑動(dòng)位置的壓桿活塞上限限定環(huán)(8)和彈簧固定環(huán)(12),在壓桿活塞(5)和彈簧固定環(huán)(12)之間設(shè)置彈簧(6),
所述殼體(1)側(cè)壁上設(shè)置有連通廢液腔(93)頂部的冷凍液吸管(14);所述冷凍液吸管(14)下端設(shè)置有冷凍腔(15),胚胎針(10)的端部位于冷凍腔(15)內(nèi)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述胚胎針(10)包括均中空且上下相連通的胚胎針上段(101)和胚胎針下段(102),胚胎針上段(101)的頂部伸入冷凍腔(15)內(nèi);
所述胚胎針上段(101)的頂部為網(wǎng)狀半球形,網(wǎng)孔的孔徑小于胚胎的直徑;
胚胎針下段(102)的下端為開(kāi)口端。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:
所述胚胎針上段(101)與胚胎針下段(102)的夾角為145~155°。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述拉桿(2)頂端設(shè)置有拉板(21),拉板(21)的尺寸大于連通壓縮腔Ⅰ(91)的開(kāi)口的尺寸,所述拉板(21)位于壓縮腔Ⅰ(91)的上方;
壓桿(3)頂端設(shè)置有壓板(31),壓板(31)的尺寸大于連通壓縮腔Ⅱ(92)的開(kāi)口的尺寸,所述壓板(31)位于壓縮腔Ⅱ(92)的上方。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述壓縮腔Ⅰ(91)的容積大于壓縮腔Ⅱ(92)的容積。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述壓縮腔Ⅰ(91)的橫截面大于壓縮腔Ⅱ(92)的橫截面。
7.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述殼體(1)的外表面設(shè)置有平衡液刻度線(16)。
8.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的胚胎玻璃化冷凍器,其特征在于:所述冷凍腔(15)為球狀空腔。
9.胚胎玻璃化冷凍器的使用方法,其特征在于包括以下步驟:
1)、先向下按動(dòng)拉板(21),使拉桿(2)在壓縮腔Ⅰ(91)中向下移動(dòng),直至拉桿活塞(4)與拉桿活塞下限限定環(huán)(11)相接觸為止;然后向下按動(dòng)壓板(31),壓桿(3)在壓縮腔Ⅱ(92)中向下移動(dòng),壓桿活塞(5)壓縮彈簧(6),直至彈簧(6)被壓縮至極限為止;殼體(1)內(nèi)的空氣被壓縮后通過(guò)冷凍液吸管(14)、再經(jīng)胚胎針(10)排出殼體(1)外;
先將胚胎針下段(102)開(kāi)口端置入含有胚胎的培養(yǎng)液中,之后松開(kāi)壓板(31),壓桿(3)在彈簧(6)彈力的作用下復(fù)原,使殼體(1)內(nèi)的壓力小于環(huán)境壓力,產(chǎn)生的吸力吸取含有胚胎的培養(yǎng)液;含有胚胎的培養(yǎng)液依次經(jīng)過(guò)胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)進(jìn)入位于冷凍腔(15)內(nèi)的胚胎針上段(101)的頂部;胚胎被截留在胚胎針上段(101)的頂部;培養(yǎng)液先通過(guò)胚胎針上段(101)頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔(15)內(nèi),再沿著冷凍液吸管(14)流入廢液腔(93)內(nèi);
2)、將胚胎針下段(102)開(kāi)口端置入平衡液中,向上拉動(dòng)拉板(21),使拉桿(2)在壓縮腔Ⅰ(91)中向上移動(dòng),在殼體(1)內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段(102)開(kāi)口端吸取平衡液,平衡液依次經(jīng)過(guò)胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)、胚胎針上段(101)頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔(15)從而實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)液的被置換;當(dāng)于拉桿(2)的作用下拉桿活塞(4)被拉升至底端與平衡液刻度線(16)平行時(shí),保持6~10分鐘然后進(jìn)行下述步驟3);
3)、將胚胎針下段(102)開(kāi)口端置入冷凍液中,往上繼續(xù)拉動(dòng)拉板(21),直至拉桿活塞(4)與拉桿活塞上限限定環(huán)(7)相接觸為止,在殼體(1)內(nèi)外空氣壓差的作用下胚胎針下段(102)開(kāi)口端吸取冷凍液;冷凍液依次經(jīng)過(guò)胚胎針下段(102)、胚胎針上段(101)、胚胎針上段(101)頂部的網(wǎng)孔進(jìn)入冷凍腔(15)從而實(shí)現(xiàn)平衡液的被置換;保持30±3秒然后進(jìn)行下述的步驟4)
4)、向下按動(dòng)壓板(31),壓桿(3)在壓縮腔Ⅱ(92)中向下移動(dòng),在殼體(1)內(nèi)外空氣壓差的作用下,殼體(1)內(nèi)的氣體將位于胚胎針上段(101)頂部?jī)?nèi)的胚胎從胚胎針(10)中排出至載桿的胚胎載片上。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的胚胎玻璃化冷凍器的使用方法,其特征在于:
當(dāng)在拉桿(2)的作用下拉桿活塞(4)被拉升至底端與平衡液刻度線(16)平行時(shí),從胚胎針下段(102)開(kāi)口端吸入的平衡液為200μL;
當(dāng)拉桿活塞(4)被繼續(xù)拉升至與拉桿活塞上限限定環(huán)(7)相接觸時(shí),從胚胎針下段(102)開(kāi)口端吸入的冷凍液為200μL。