本發(fā)明屬于微生物技術領域，涉及一株野生雞腿菇菌株及其栽培方法。

背景技術：

雞腿菇，學名毛頭鬼傘(coprinascomatus)，屬真菌門、擔子菌亞門、層菌綱、傘菌目、鬼傘科、鬼傘屬，是新近推出的珍稀食用菌之一，被世界衛(wèi)生組織(who)及聯(lián)合國糧農組織(fao)確定為集“天然、營養(yǎng)、保健”三種功能于一體的珍稀食用菌。鮮雞腿菇味道鮮美，營養(yǎng)豐富，每100g干菇中含粗蛋白質25.4g，脂肪3.3g，總糖58.9g(其中無氮碳水化合物51.1g)，纖維素7.3g，灰分12.5g。雞腿菇含有20種氨基酸(包括8種人體必需的氨基酸)，菌蓋中的氨基酸以天門冬氨基酸、天門冬酰胺、谷氨酸為主，菌柄中的氨基酸以谷氨酰胺、甘氨酸、蘇氨酸、鳥氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和賴氨酸等為主。具有增強機體免疫、降血糖、降血壓和改善心律、抑制腫瘤的作用。

雞腿菇是一種分布廣泛易于栽培的草腐土生菌類，即可用熟料栽培、也可用發(fā)酵料栽培。目前雞腿菇產品主要采用罐藏、腌制和干制來延長供應期，鮮銷較少，主要原因是貯運過程中易出現(xiàn)開傘、褐變、自溶等現(xiàn)象，失去商品價值。一般雞腿菇菌株保鮮時間為3～7天，限制了雞腿菇產業(yè)發(fā)展。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一株野生菌株雞腿菇及其栽培方法，該菌株抗雜能力強、菌柄粗壯、產量高、顏色潔白、鱗片少、不易開傘，而且保鮮期長，適時采收1～3℃可保鮮10天左右。

本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一株野生菌株雞腿菇(copyindscomatus(muii.fr)gray)，菌號為雞腿菇2008，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2015年7月6日，保藏編號為cgmccno.11004。

一種上述野生菌株雞腿菇的栽培方法，采用稻草二次發(fā)酵法，棚內層架式栽培。

本發(fā)明的雞腿菇2008在cpda培養(yǎng)基上25℃暗光培養(yǎng)，氣生菌絲強、呈絨毛狀，長勢強，邊緣整齊，爬壁能力強，菌絲長速快，平均日長速在0.69cm/d。

本發(fā)明的雞腿菇2008菇體較大，菌柄粗大，菌蓋不易開傘，子實體顏色潔白，鱗片少呈淺褐色。

本發(fā)明的雞腿菇2008經拮抗試驗、dna指紋(issr)圖譜分析與相比對的15個試驗菌株有差異，而且菌株菌柄粗壯，保鮮期長，適時采收1～3℃可保鮮10天左右。

保藏信息：

分類命名：毛頭鬼傘copyindscomatus；

保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號；

保藏日期：2015年7月6日；

保藏編號：cgmccno.11004。

附圖說明

圖1為雞腿菇2008菌絲生長情況。

圖2為雞腿菇2008出菇子實體形態(tài)。

圖3為雞腿菇2008與其他雞腿菇菌株拮抗試驗結果，a-雞腿菇2008與供試菌株4號(雞腿5l0460)、5號(雞腿5l0761)有拮抗現(xiàn)象；b-雞腿菇2008與供試菌株1號(雞腿1號)、8號(雞腿30)有拮抗現(xiàn)象；c-雞腿菇2008與供試菌株3號(雞腿5l0459)、5號(雞腿5l0761)有拮抗現(xiàn)象；d-雞腿菇2008與供試菌株2號(山東雞腿)、9號(雞腿201)有拮抗現(xiàn)象；e-雞腿菇2008與供試菌株7號(北京雞腿)、11號(雞腿2160)有拮抗現(xiàn)象；f-雞腿菇2008與供試菌株12號(雞腿cc180)、13號(co003)有拮抗現(xiàn)象；g-雞腿菇2008與供試菌株14號(co006)、15號(co009)有拮抗現(xiàn)象；h-雞腿菇2008與供試菌株16號(co0013)、17號(福建雞腿菇)有拮抗現(xiàn)象。

圖4為引物6((ag)8yt)擴增雞腿菇dna指紋圖譜，從左至右第1泳道：dnamarkerdl2000；第2泳道：雞腿1號；第3泳道：山東雞腿；第4泳道：雞腿5l0459；第5泳道：雞腿5l0460；第6泳道：雞腿5l0761；第7泳道：雞腿2008；第8泳道：北京雞腿；第9泳道：雞腿30；第10泳道：雞腿201；第11泳道：雞腿2160；第12泳道：雞腿cc180；第13泳道：co003；第14泳道：co006；第15泳道：co009；第16泳道：co0013；第17泳道：福建雞腿菇。

圖5為引物9(hvh(tg)7)擴增雞腿菇dna指紋圖譜，從左至右第1泳道：dnamarkerdl2000；第2泳道：雞腿1號；第3泳道：山東雞腿；第4泳道：雞腿5l0459；第5泳道：雞腿5l0460；第6泳道：雞腿5l0761；第7泳道：雞腿2008；第8泳道：北京雞腿；第9泳道；雞腿30；第10泳道：雞腿201；第11泳道：雞腿2160；第12泳道：雞腿cc180；第13泳道：co003；第14泳道：co006；第15泳道：co009；第16泳道：co0013；第17泳道：福建雞腿菇。

具體實施方式

下面結合附圖對本發(fā)明的技術方案作進一步的說明，但并不局限于此，凡是對本發(fā)明技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的精神和范圍，均應涵蓋在本發(fā)明的保護范圍中。

具體實施方式一：本實施方式提供了一株野生菌株雞腿菇2008，該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期為2015年7月6日，保藏編號為cgmccno.11004。

由圖1可知，雞腿菇2008在cpda培養(yǎng)基上25℃暗光培養(yǎng)，氣生菌絲強、呈絨毛狀，長勢強，邊緣整齊，爬壁能力強，菌絲長速快，平均日長速在0.69cm/d。

由圖2可知，雞腿菇2008菇體較大，菌柄粗大，菌蓋不易開傘，子實體顏色潔白，鱗片少呈淺褐色。

拮抗試驗：

拮抗試驗是鑒定菌株間遺傳差異的傳統(tǒng)方法，菌絲之間的拮抗反應是不同菌株間遺傳特性的重要表現(xiàn)。供試菌株之間在平板交界處正面是否有隆起、背面是否產生褐色拮抗線是判定菌株間是否具有拮抗反應的標準，產生褐色拮抗線的兩菌株為不同的菌株，無拮抗線菌株有可能是同一菌株。

本實施方式的拮抗試驗操作如下：將野生雞腿菇2008與其它15個供試菌株(表1)分別取2×2mm²活化純培養(yǎng)物成對接入cpda平板培養(yǎng)基中(相距2cm)，重復3次。25℃培養(yǎng)15天觀察拮抗現(xiàn)象。通過對供試各菌株拮抗反應分析(圖3)，確定野生雞腿菇2008與其他供試15個菌株間都有隆起的褐色拮抗線，拮抗現(xiàn)象顯著。確認野生雞腿菇2008的獨特性，與供試的其他15個菌株非是同一個菌株。

表1對峙試驗和issr對比試驗使用的雞腿菇菌株

dna指紋圖譜(issr)分析：

本實施方式所用issr引物由上海生工合成，引物編號及其序列見表2。

表2issr引物編號及其序列

菌絲體制備及dna提?。喝pda液體培養(yǎng)基80ml裝入250ml三角瓶，121℃滅菌30min，冷卻后接入菌株適齡菌絲，25℃靜止培養(yǎng)2～3d，再130r/min搖床培養(yǎng)3～5d，菌球圓潤，無色素產生即可。使用tiangen新型植物基因組dna提取試劑盒提取dna。

issr擴增反應總體積25μl：其中包括1×buffer，0.1mmol/lmgcl2，0.1mmol/ldntps，15ngissr引物，15～25ng模板dna，0.5utaqdna聚合酶。以無菌雙蒸水代替模板dna作陰性對照。

反應程序為：94℃預變性5min，然后94℃變性45s，53℃復性40s，72℃延伸70s，進行35個循壞，最后72℃延伸7min。pcr產物用1.2％瓊脂糖凝膠電泳，gel-dye染色，凝膠成像掃描記錄結果。

共使用19個issr引物，對野生雞腿菇2008和其它15個供試雞腿菇菌株進行擴增，有11個引物可擴增出差異性譜帶，對issr擴增dna指紋圖譜進行人工比對分析，有條帶記為1，無條帶記為0，構建初始0、1數(shù)據(jù)矩陣，使用ntsys聚類分析軟件進行聚類分析，16個菌株間相似系數(shù)在82～100％，取相似系數(shù)90％可將供試的16個雞腿菇菌株分為以下3個類群：

第一類群：1號、4號、5號、7號、8號、9號、11號、13號、15號、17號菌株；

第二類群：2號、3號、12號、14號、16號菌株；

第三類群：6號菌株。

同時，6號引物和9號引物可擴增到雞腿菇2008的特異性dna譜帶a和b，而其它供試菌株未擴增到特異性dna譜帶a和b，說明野生雞腿菇2008(6號菌株)與其他雞腿菇之間親緣關系較遠，非同一菌株，結果見圖4～5。

具體實施方式二：本實施方式提供了一種雞腿菇2008的栽培方法，該方法使用雞腿菇2008，采用稻草二次發(fā)酵法，棚內層架式栽培，采收5潮，生物轉化率達150％以上。具體要求如下：

1)栽培季節(jié)

雞腿菇2008是中低溫型品種，出菇溫度范圍在18～22℃，自然氣候以春、秋季栽培較為適宜，工廠化生產可以周年栽培。

2)原種生產

母種只用于移植擴繁原種，一支母種擴繁原種6～8瓶(袋)；采用谷粒，以500～750ml玻璃菌種瓶。原種培養(yǎng)基為：麥粒100kg、碳酸鈣1kg。制作過程：將小麥粒用水浸泡12小時后，煮至麥粒熟而不開花，濾去水分，濾液可制母種培養(yǎng)基或栽培時拌料用。攤在通風處晾30～40分鐘，使麥粒表皮不濕為宜，加碳酸鈣拌勻后裝瓶，高壓滅菌1.5小時。接種后，25℃下恒溫培養(yǎng)，長滿備用。

3)發(fā)酵料栽培法

發(fā)酵料配方：稻草240kg(干重)，干牛糞160kg(干重)，餅肥10kg，尿素2kg，硫酸銨3.5kg，石灰10kg，石膏5kg。配方中碳酸比為30～33：1。

采用二次發(fā)酵法，發(fā)酵第6d料心溫度達75℃時進行第一次翻堆，以后每隔3d、3d、2d當料心溫度達70℃時翻堆；二次發(fā)酵5d，料溫維持在60℃左右，從建堆到發(fā)酵完畢一般需要24d。發(fā)酵好的料呈咖啡色，有醬香味而無酸臭味，含水量在65％左右(指縫有水泌出)，ph6.5左右。室內層架式床栽，當發(fā)酵料溫降到30℃以下時，應及時趁熱播種，鋪料、播種、鋪料、播種(3層料，3層種)，料總厚度15-20cm，用種量約15％，適當壓實，蓋薄膜。

4)發(fā)菌管理

培養(yǎng)溫度20～25℃，培養(yǎng)濕度70％左右，暗光培養(yǎng)，培養(yǎng)后期加大通風，約20天左右菌絲長滿。

5)覆土管理

覆土時機是菌絲長滿。選擇黏性的菜園土，拌入2％的石灰，0.2％的磷酸二氫鉀，用石灰水調濕度，比常規(guī)濕度偏大些，使土能搓圓捏扁，裝入一個帶蓋大桶，用木棍戳洞到底，倒入少許殺蟲劑，然后點燃一袋氣霧消毒劑，放入洞內，密封3天后使用。覆土厚度約3cm厚，覆土后保持土壤濕潤，光線暗、空氣新，氣溫20～26℃，氣濕80％。

6)出菇管理

出菇溫度保持在18～22℃，提高空氣濕度85～90％，創(chuàng)造溫差，加強光照及通氣條件。覆土后15～20天現(xiàn)蕾。一般9～10天進入采菇期。勿向菇體直接噴水(易變色)，防噴水不當致菇體變黃，最好用較細的水管澆注于菇叢縫隙中。噴水后要注意通風，勿形成悶濕環(huán)境。適宜的噴水通風應根據(jù)天氣及菇的生長情況而靈活掌握。

7)雞腿菇的采收

雞腿菇采收必須在菌蓋含苞未放、菌環(huán)未松動、5～6成熟時采收，采收時用手握住菌柄輕輕旋轉就可以采下來。然后用竹片刮凈菇腳泥土和菇蓋鱗片，處理后，雞腿菇置于1～3℃保鮮或直接進行深加工處理。