1.一種莼菜叢生芽的誘導(dǎo)方法,其特征在于,包括以下步驟:
A、外植體選擇與預(yù)處理:選擇顏色鮮綠,淤泥覆蓋少的可萌發(fā)腋芽的莼菜莖段作為外植體,用堿性洗滌劑浸泡10min,除去表面淤泥,再用自來水沖洗1小時,用蒸餾水反復(fù)沖洗4-5次,用無菌水再反復(fù)清洗4-5次,置于無菌操作臺;
B、外植體滅菌:在無菌操作臺上首先用75%乙醇浸泡30秒,用無菌水沖洗4-5次,再進行表面消毒,無菌水沖洗4-5次,在無菌濾紙上將水吸干,待用;
C、芽誘導(dǎo):選擇1.0 mg/L 6-BA(6-芐氨基嘌呤)和0.15 mg/L NAA(萘乙酸)的MS固體培養(yǎng)基,蔗糖質(zhì)量濃度為3%,活性炭質(zhì)量濃度為0.4%,pH調(diào)至5.8-6.0,固體培養(yǎng)基裝于組培瓶中;固體培養(yǎng)基經(jīng)過120℃滅菌處理20min,冷卻后,接入滅菌后的1-1.5cm的莼菜外植體,加入無菌水超過固體培養(yǎng)基面3-4cm,置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng),待幼芽長至2.0-3.0cm進行增殖培養(yǎng);
D、芽增殖培養(yǎng):選擇蔗糖質(zhì)量濃度3%,活性炭質(zhì)量濃度為0.4%的MS固體培養(yǎng)基,添加0.5-2.0 mg/L 6-BA、2-4 mg/L 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、0.1-0.5 mg/L NAA的激素;培養(yǎng)基分裝、培養(yǎng)基滅菌方式與芽誘導(dǎo)相同,加入無菌水超過固體培養(yǎng)基面3-4cm,接入長2.0-3.0cm的幼芽于光照培養(yǎng)箱中,進行增殖培養(yǎng);
所述的步驟C、D均采用無菌環(huán)境,光照60-70μE/(m2·s),光照周期為12h/d,室內(nèi)溫度25±2℃。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,優(yōu)選的,步驟B中,所述的表面消毒采用0.1%氯化汞(加入幾滴吐溫80)進行表面消毒10min。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,優(yōu)選的,步驟C中,培養(yǎng)基添加的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)6-BA的濃度為1.0mg/L,NAA 的濃度為0.15mg/L。