專利名稱：引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是最常見的在外環(huán)境 中生活力較強，在水、牛乳及肉類食品中能生存幾個月，最適溫度下繁殖迅速的鼠傷寒沙門 氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒甲、乙沙門氏菌的快檢試劑。沙門氏菌食物 中毒多由動物性食品，特別是肉類引起(如病死牲畜肉、熟肉制品)，也可由家禽、蛋類、 奶類食品引起。以急性胃腸炎為主，主要癥狀有嘔吐，腹瀉，腹痛，糞便為黃綠色水樣便。 發(fā)熱3 8'C—4 crc。重病人出現(xiàn)寒戰(zhàn)，驚厥，抽搐和昏迷。老人，兒童和體弱者如不及時
進行急救處理也可導(dǎo)致死亡。傳統(tǒng)常規(guī)檢測診斷方法為細(xì)菌培養(yǎng)分離，選擇標(biāo)準(zhǔn)典型菌株再
進行血清學(xué)鑒定檢測。整個檢測確診過程耗時長、 一般需要72-120小時，靈敏度不高，對快 速準(zhǔn)確診斷，搶救病人帶來極大的不便，本發(fā)明打破傳統(tǒng)常規(guī)分步檢測手段，在快速鑒別診 斷食物中毒致病菌沙門氏菌屬的應(yīng)用上具有明顯的優(yōu)勢。從而減少由于檢測手段落后而造成 對人體健康的危害，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價值，對指 導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，引起食物中毒 沙門氏菌屬，常見的有鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒甲、乙型沙 門氏菌、都柏林沙門氏菌。全年都可發(fā)生，多由動物性食品如肉類引起，也可由魚、蛋、奶 及家禽引起。其致病原因是用病死畜、禽的肉制成的食品；病死畜、禽的糞便污染了食物； 帶菌者在食品加工過程中污染了食品。傳統(tǒng)常規(guī)檢測診斷方法是要經(jīng)過標(biāo)本采集、分離鑒定、 小白鼠喂飼實驗、雙份血清凝集實驗、沉淀實驗等鑒定實驗才能確診。傳統(tǒng)生化鑒定試驗周 期長，操作繁瑣，試劑質(zhì)量無法保證，嚴(yán)重影響了致病菌確認(rèn)丁作、選擇性分離培養(yǎng)的培養(yǎng) 基上挑選可疑菌落需要經(jīng)驗，存在漏檢的可能，而沙門氏菌屬的腸毒素穩(wěn)定性很高，加工后 的食物雖然有時檢不出，但仍有可能存在腸毒素，而腸毒素的常規(guī)檢驗方法需要做動物實驗， 難度大，周期長。整個檢測確診過程耗時長約4-15天。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的 沙門氏菌屬多價及單價血清，使檢測確診過程縮短至2-6小時，增菌時能夠利用特異血清的 血清凝集反應(yīng)，鑒定的準(zhǔn)確率均在97%以上。檢測致病菌時耗時少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的培養(yǎng)基組分，并進行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、 混合、冷卻、分裝、高溫滅菌、無菌制備血清等工藝而成一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢 試劑。
本發(fā)明選擇的快檢試劑配方如下(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5; 磷酸氫二鈉4.0-5.0;磷酸二氫鈉5. 0-6. 0;復(fù)合生長因子10. 0-20.0;亞硒酸氫鈉3.5-4. 5;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清10-20ml:蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1
快檢試劑呈無色或淡黃色透明液體，無任何沉淀物。將質(zhì)控菌做生長的靈敏度試驗，傷 寒沙門菌達(dá)10-3 (稀釋度)，鼠傷寒、副傷寒沙門齒達(dá)10-7;食物源性中毒樣品在接種培養(yǎng) 2-6小時時，液面交界有處有白色沉淀凝集，鏡下有凝集包團，為陽性，即可確診。亞硒酸 鹽有生殖毒性，使用時應(yīng)特別注意。亞硒酸鹽對革蘭氏陽性菌有較強的抑制作用，而對沙門菌則無明顯的抑制性，在磷酸鹽緩沖作用下，這種差異更顯著。也可用亞硒酸鈉，但不及亞 硒酸氫鈉效果好。大腸埃希菌等細(xì)菌能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸，它中和因亞硒酸鹽被細(xì)菌還原而產(chǎn) 生的堿。磷酸鹽為緩沖劑，保持培養(yǎng)基PH穩(wěn)定，有利腸道致病菌的生長繁殖。兩者的用量比 例可根據(jù)蛋白胨的酸堿度及緩沖容量調(diào)整，總量為10g/L。.此培養(yǎng)基中的蛋白胨品種很重要， 因此無論國產(chǎn)或國外蛋白胨在使用前必須先作細(xì)菌學(xué)檢測。用于分離傷寒沙門菌及乙型副傷 寒沙門菌效果更好。配好的培養(yǎng)基超過9(TC數(shù)分鐘既有紅色沉淀物形成，應(yīng)貯于2 8。C度冰 箱，保存2周。如時間超過二周或貯于室溫，特別是夏季，易出現(xiàn)棕色或紅色沉淀，增菌效 果減退。糞便標(biāo)本接種量約占培養(yǎng)基體積的1A0，或?qū)⒑屑S便的棉拭子插入培養(yǎng)基中，尿 液標(biāo)本可等量加入雙倍濃度增菌液中。增菌時間應(yīng)根據(jù)標(biāo)本污染情況而定，污染嚴(yán)重的在2h 以內(nèi)，反之可適當(dāng)延長增菌時間，但不得超過12h，即行轉(zhuǎn)種于選擇性分離培養(yǎng)基，因延長 增菌時間可使大腸菌群迅速生長繁殖，影響沙門菌凝集包團檢出。
本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是
1) 、先將亞硒酸氫鈉加入100 mL無菌蒸餾水中，充分振蕩溶解；
2) 、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、復(fù)合生長因子混合于900 mL蒸餾水加熱
溶解，調(diào)pH7. 1， 12rC15min高壓滅菌;
3) 、冷卻后以無菌操作將兩液合并，加無菌沙門氏菌屬多價及單價血清混勻，分裝于滅菌容
器內(nèi)備用。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)快檢試劑營養(yǎng)豐富、配制簡單；(2)臨床應(yīng)用效果滿意，解 決了床邊接種的困難，污染??；(3)檢測方法簡單、時間短、選擇性強、檢出率高；(4) 接種樣本2-6小時后，即能得到液體篩選增菌凝集包團，便于觀察菌落生長情況，穩(wěn)定性好; (5)對快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人對指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的詳細(xì)說明
按照下表所列數(shù)據(jù)(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進行配置
配方一
蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5;磷酸氫二鈉4.0-5.0;磷酸二氫鈉5.0-6. 0;復(fù)合生 長因子10. 0-20. 0;亞硒酸氫鈉3.5-4 5;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清10-20ml;蒸餾 水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1
配方二:蛋白胨6.0-8.0;乳糖4.0-4.5;磷酸氫二鈉4.5-5.0;磷酸二氫鈉5. 5-6. 0;復(fù)合生 長因子14.0-20.0;亞硒酸氫鈉4.0-4.5;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清14-20ml;蒸餾 水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1
配方三
蛋白胨6.0-9. 0;乳糖3.5-4.0;磷酸氫二鈉4.0-4.5;磷酸二氫鈉5. 0-5. 5;復(fù)合生 長因子12.0-19.0;亞硒酸氫鈉3.6-4.2;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清11-19ml;蒸餾 水加至1000 mL，調(diào)PH7, 權(quán)利要求
1、本發(fā)明涉及一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是最常見的食物源性的鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒甲、乙沙門氏菌的快檢試劑及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0；乳糖3.5-4.5；磷酸氫二鈉4.0-5.0；磷酸二氫鈉5.0-6.0；復(fù)合生長因子10.0-20.0；亞硒酸氫鈉3.5-4.5；無菌沙門氏菌屬多價及單價血清10-20ml；蒸餾水加至1000mL，調(diào)pH7.1；
2、 一種權(quán)利要求l所述引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑的制備方法，其特征在于具有如下的步驟1) 、先將亞硒酸氫鈉加入IOO mL無菌蒸餾水中，充分振蕩溶解；2) 、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、復(fù)合生長因子混合于900 mL蒸餾水 加熱溶解，調(diào)pH7. 1， 121°Cl5min高壓滅菌;3) 、冷卻后以無菌操作將兩液合并，加無菌沙門氏菌屬多價及單價血清混勻，分裝于滅 菌容器內(nèi)備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種引起食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是食源性鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒甲、乙沙門氏菌的快檢試劑及其制備方法。該快檢試劑具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價值，對指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的沙門氏菌屬多價及單價血清，使檢測確診過程縮短至2-6小時，增菌時能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，鑒定的準(zhǔn)確率均在97％以上。檢測致病菌時耗時少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強。
文檔編號C12Q1/10GK101565737SQ200810093449
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日
發(fā)明者于維森 申請人:于維森