專利名稱：中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑的制作方法
中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑技術(shù)領(lǐng)域 本發(fā)明涉及一種中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是在臨床大量 使用抗生素后，由最常見的沙門氏菌屬引起食源性食物中毒的患者快速診斷試劑，沙門氏菌 屬的培養(yǎng)檢查是診斷食源性食物中毒的重要方法。尤其對急性胃腸炎的老人，兒童和體弱者 如不及時進(jìn)行急救處理也可導(dǎo)致死亡，標(biāo)本需經(jīng)培養(yǎng)后才能做出正確診斷；對已治療的患者 需經(jīng)培養(yǎng)才能證實是否痊愈。該快檢試劑能夠檢測大量臨床使用抗生素后的沙門氏菌屬陽性 結(jié)果，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療的作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重要意義。傳統(tǒng)常規(guī)檢 測診斷方法是先將樣本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)分離，選擇標(biāo)準(zhǔn)典型菌株再進(jìn)行血清學(xué)鑒定檢測。整個 檢測確診過程耗時長、治療的患者臨床又使用了抗生素，操作繁瑣，試劑質(zhì)量無法保證，嚴(yán) 重影響了致病菌確認(rèn)工作、對快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人帶來極大的困難。本發(fā)明打破傳統(tǒng)常 規(guī)分步檢測手段，特別是針對臨床大量使用抗生素或大量使用消毒液的樣本，在快速鑒別診 斷食源性食物中毒沙門氏菌屬的應(yīng)用上具有明顯的優(yōu)勢。從而減少由于檢測手段落后而造成 對人體健康的危害，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價值，對指 導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。
背景技術(shù)：
本發(fā)明的目的在于提供一種引起中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，引 起食物中毒沙門氏菌屬，常見的有鼠傷寒沙門氏菌、豬霍亂沙門氏菌、腸炎沙門氏菌、付傷寒 甲、乙型沙門氏菌、都柏林沙門氏菌。傳統(tǒng)常規(guī)檢測診斷方法是要經(jīng)過標(biāo)本采集、分離鑒定、 小白鼠喂飼實驗、雙份血清凝集實驗、沉淀實驗等鑒定實驗才能確診。傳統(tǒng)生化鑒定試驗周 期長，操作繁瑣，試劑質(zhì)量無法保證，尤其是大量臨床用抗生素后的沙門氏菌屬檢測十分難 檢，由于標(biāo)本中含大量殘余抗生素，在恢復(fù)培養(yǎng)沙門氏菌屬時繼續(xù)受到殘余抗生素的作用。 因此，不采用去除殘余的抗生素措施的實驗，應(yīng)認(rèn)為是在設(shè)計上的嚴(yán)重失誤，依據(jù)這樣的實 驗得出的結(jié)果是不可靠的。也嚴(yán)重影響了致病菌確認(rèn)工作、選擇性分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基上挑選 可疑菌落需要經(jīng)驗，存在漏檢的可能，而沙門氏菌屬的腸毒素穩(wěn)定性很高，加工后的食物雖 然有時檢不出，但仍有可能存在腸毒素，而腸毒素的常規(guī)檢驗方法需要做動物實驗，難度大， 周期長。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的沙門氏菌屬多價及單價血清及中和劑，增菌時 能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，中和劑可將標(biāo)本中含大量殘余抗生素或消毒劑中和，并 生成對沙門氏菌屬生長無影響的中和產(chǎn)物。使鑒定的準(zhǔn)確率均在99%以上，檢測致病菌時耗 時少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強使檢測確診過程縮短至2-6小時。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的要點在于選擇合適的培養(yǎng)基組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、 混合、冷卻、分裝、高溫滅菌、無菌制備血清等工藝而成一種引起中和食源性食物中毒沙門 氏菌屬快檢試劑。本發(fā)明選擇的快檢試劑配方如下(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5; 磷酸氫二鈉4.0-5.0;磷酸二氫鈉5. 0-6.0;復(fù)合生長因子10. 0-20.0;亞硒酸氫鈉3.5-4. 5;膽鹽0.5-1.5;硫代硫酸鈉20. 0-30. 0;卵磷脂O. 5-1.0;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清 10-20ml;蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1?？鞕z試劑呈無色或淡黃色透明液體，無任何沉淀物。將質(zhì)控菌做生長的靈敏度試驗，傷 寒沙門菌達(dá)10-3 (稀釋度)，鼠傷寒、副傷寒沙門菌達(dá)10-7;食物源性中毒樣品在接種培養(yǎng) 2-6小時，液面交界有處有白色沉淀凝集，鏡下有凝集包團，為陽性，即可確診。膽鹽、硫 代硫酸鈉、卵磷脂為中和劑，可將標(biāo)本中含大量殘余抗生素或消毒劑中和，并生成對沙門氏 菌屬生長無影響的中和產(chǎn)物。亞硒酸鹽有生殖毒性，使用時應(yīng)特別注意。亞硒酸鹽對革蘭氏 陽性菌有較強的抑制作用，而對沙門菌則無明顯的抑制性，在磷酸鹽緩沖作用下，這種差異 更顯著。也可用亞硒酸鈉，但不及亞硒酸氫鈉效果好。大腸埃希菌等細(xì)菌能使乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸， 它中和因亞硒酸鹽被細(xì)菌還原而產(chǎn)生的堿。磷酸鹽為緩沖劑，保持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定，有利腸道 致病菌的生長繁殖。兩者的用量比例可根據(jù)蛋白胨的酸堿度及緩沖容量調(diào)整，總量為10g/L。. 此培養(yǎng)基中的蛋白胨品種很重要，因此無論國產(chǎn)或國外蛋白胨在使用前必須先作細(xì)菌學(xué)檢測。 用于分離傷寒沙門菌及乙型副傷寒沙門菌效果更好。配好的培養(yǎng)基超過9(TC數(shù)分鐘既有紅色 沉淀物形成，應(yīng)貯于2 8'C度冰箱，保存2周。如時間超過二周或貯于室溫，特別是夏季， 易出現(xiàn)棕色或紅色沉淀，增菌效果減退。糞便標(biāo)本接種量約占培養(yǎng)基體積的1/10，或?qū)⒑?糞便的棉拭子插入培養(yǎng)基中，尿液標(biāo)本可等量加入雙倍濃度增菌液中。增菌時間應(yīng)根據(jù)標(biāo)本 污染情況而定，污染嚴(yán)重的在2h以內(nèi)，反之可適當(dāng)延長增菌時間，但不得超過12h，即行轉(zhuǎn) 種于選擇性分離培養(yǎng)基，因延長增菌時間可使大腸菌群迅速生長繁殖，影響沙門菌凝集包團 檢出。本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是1) 、先將亞硒酸氫鈉加入IOO mL無菌蒸餾水中，充分振蕩溶解；2) 、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉、卵磷脂、復(fù)合生長因子混合于900 mL蒸餾水加熱溶解，調(diào)pH7. 1， 121°C 15min高壓滅菌；3) 、冷卻后以無菌操作將兩液合并，加無菌沙門氏菌屬多價及單價血清混勻，分裝于滅菌容器內(nèi)備用。本發(fā)明具有以下優(yōu)點(1)快檢試劑營養(yǎng)豐富、配制簡單、選擇性強；(2)臨床應(yīng)用效 果滿意，解決了床邊接種的困難，污染小、大大提高檢測陽性率；(3)檢測方法簡單、時間 短、選擇性強、檢出率高；(4)接種樣本2-6小時后，即能得到液體篩選增菌凝集包團，便 于觀察菌落生長情況，穩(wěn)定性好；(5)能夠中和標(biāo)本中含大量殘余抗生素，對己治療的患者 需經(jīng)培養(yǎng)才能證實是否痊愈，具有指導(dǎo)臨床診斷和治療作用，為防止濫用抗菌藥物也具有重 要意義。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明 按照下表所列數(shù)據(jù)(克/每升蒸餾水)及其所述步驟進(jìn)行配置 配方一蛋白胨5.0-10.0;乳糖3.5-4.5;磷酸氫二鈉4.0-5.0;磷酸二氫鈉5. 0-6. 0;復(fù)合生 長因子10.0-20.0;亞硒酸氫鈉3.5-4.5;膽鹽0.5-1.5;硫代硫酸鈉20. 0-30. 0;卵磷脂0. 5-1.0;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清10-20ml;蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1。配方二蛋白胨6.0-8.0;乳糖3.8-4.2;磷酸氫二鈉4.2-4.7;磷酸二氫鈉5. 2-5. 6;復(fù)合生 長因子12.0-18.0;亞硒酸氫鈉3.7-4.3;膽鹽0.6-1. 2;硫代硫酸鈉24. 0-28. 0;卵磷脂O. 6-0.8;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清12-18ml;蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1。配方三蛋白胨7.0-9.0;乳糖3.7-4.1;磷酸氫二鈉4.3-4.8;磷酸二氫鈉5. 3-5. 9;復(fù)合生 長因子14. 0-17. 0;亞硒酸氫鈉3. 6-4. 4;膽鹽0. 6-1. 1;硫代硫酸鈉23. 0-27. 0;卵磷脂0. 7-0.9;無菌沙門氏菌屬多價及單價血清14-19ml;蒸餾水加至1000 mL，調(diào)pH7. 1。
權(quán)利要求
1、本發(fā)明涉及一種中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是在臨床大量使用抗生素后，由最常見的沙門氏菌屬引起食源性食物中毒的患者快速診斷試劑及其制備方法，其特征在于具有如下配方(克/每升蒸餾水)蛋白胨5.0-10.0；乳糖3.5-4.5；磷酸氫二鈉4.0-5.0；磷酸二氫鈉5.0-6.0；復(fù)合生長因子10.0-20.0；亞硒酸氫鈉3.5-4.5；膽鹽0.5-1.5；硫代硫酸鈉20.0-30.0；卵磷脂0.5-1.0；無菌沙門氏菌屬多價及單價血清10-20ml；蒸餾水加至1000mL，調(diào)pH7.1。
2、 一種權(quán)利要求l所述中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑的制備方法，其特征在于具 有如下的步驟1) 、先將亞硒酸氫鈉加入IOO mL無菌蒸餾水中，充分振蕩溶解；2) 、將蛋白胨、乳糖、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉、卵磷脂、復(fù)合生長因子混合于900 mL蒸餾水加熱溶解，調(diào)pH7. 1， 121°C 15min高壓滅菌；3) 、冷卻后以無菌操作將兩液合并，加無菌沙門氏菌屬多價及單價血清混勻，分裝于滅菌容器內(nèi)備用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種中和食源性食物中毒沙門氏菌屬快檢試劑，特別是在臨床大量使用抗生素后，由最常見的沙門氏菌屬引起食源性食物中毒的患者快速診斷試劑及其制備方法。該快檢試劑具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價值，對指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的沙門氏菌屬多價及單價血清及中和劑，增菌時能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，中和劑可將標(biāo)本中含大量殘余抗生素或消毒劑中和，并生成對沙門氏菌屬生長無影響的中和產(chǎn)物。使鑒定的準(zhǔn)確率均在99％以上，檢測致病菌時耗時少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強使檢測確診過程縮短至2-6小時。
文檔編號C12Q1/10GK101565738SQ20081009345
公開日2009年10月28日 申請日期2008年4月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月21日
發(fā)明者于維森 申請人:于維森