本發(fā)明屬于溫度決定型性別決定動(dòng)物的性別分化和性別調(diào)控領(lǐng)域，特別是涉及一種可獲得高孵化率的全雌中華鱉的孵化方法。
背景技術(shù)：
中華鱉(Trionyx sinensis)隸屬爬行綱(Reptilia)、龜鱉目(Testudinata)、鱉科(Trionychidae)、鱉屬(Pelodiscus)，是我國(guó)名貴的食用水產(chǎn)動(dòng)物，其營(yíng)養(yǎng)豐富可以入藥，在國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)上十分暢銷(xiāo)。中華鱉屬于溫度性別決定型動(dòng)物，它的性別取決于孵化過(guò)程中某一特定時(shí)期(溫度敏感期)的孵化溫度，在此期間高溫孵化會(huì)產(chǎn)生較多雄性鱉苗，反之產(chǎn)生較多雌性鱉苗。由于雄性中華鱉生長(zhǎng)速度快，食用價(jià)值高，雄性鱉苗很受肉鱉養(yǎng)殖企業(yè)的歡迎；而對(duì)于種苗生產(chǎn)企業(yè)而言，由于中華鱉種鱉在繁殖期間雌雄比越大，產(chǎn)卵量越大，雌鱉的數(shù)量決定了該企業(yè)種苗的產(chǎn)量，因此，中華鱉的定性育種技術(shù)備受關(guān)注。
國(guó)內(nèi)外關(guān)于中華鱉的發(fā)明專利已有一些報(bào)道，主要涉及提高中華鱉產(chǎn)卵量及長(zhǎng)卵質(zhì)量的養(yǎng)殖方法(中國(guó)專利CN 103918605)，純種繁育方法(中國(guó)專利CN 103843722A)和性別控制方法(中國(guó)專利CN 102988986A、CN 102487883A)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種可獲得高孵化率的全雌中華鱉的孵化方法。
本發(fā)明所需解決的技術(shù)問(wèn)題是：
(1)精準(zhǔn)定性育種；
(2)設(shè)置最佳孵化條件，在適宜溫度下進(jìn)行孵化，獲得全雌性鱉苗的情況下，孵化率高于98％。
本發(fā)明包括以下步驟：
1)在中華鱉的繁殖季節(jié)，在孵化箱底部鋪第一層孵化基質(zhì)，受精卵動(dòng)物極向上平放在第一層孵化基質(zhì)上，再覆蓋第二層孵化基質(zhì)；
2)將孵化箱置于孵化室的置物架上，保持孵化溫度至龜苗出殼。
在步驟1)中，所述孵化箱可采用塑料孵化箱，最好為敞開(kāi)式長(zhǎng)方形塑料孵化箱；所述第一層孵化基質(zhì)的組成按質(zhì)量百分比可為蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第一層孵化基質(zhì)的厚度可為3～5cm，優(yōu)選3.5cm，孵化介質(zhì)含水量控制在5％～7％，介質(zhì)含水量在孵化初期為5％，孵化中期為6％，孵化后期為7％；所述第二層孵化基質(zhì)的組成按質(zhì)量百分比可為蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二層孵化基質(zhì)的厚度可為1.5～2.5cm，優(yōu)選2cm；所述受精卵的間距可為1～1.5cm；所述第一層孵化基質(zhì)和第二層孵化基質(zhì)在使用前，最好在陽(yáng)光下充分暴曬2～3天或用紫外線消毒。
在步驟2)中，所述孵化室內(nèi)的溫度和濕度最好按以下方法控制：從開(kāi)始孵化到胚胎發(fā)育結(jié)束，孵化室內(nèi)的溫度控制在29℃，相對(duì)濕度孵化初期(14期以前)控制在65％；孵化介質(zhì)的含水量6％，從胚胎發(fā)育14到21期，孵化箱中的相對(duì)濕度逐漸提高并保持在80％～85％，此時(shí)孵化介質(zhì)的含水量調(diào)整到7％，孵化到21期以后，孵化室內(nèi)濕度提高到90％直到孵化結(jié)束，孵化介質(zhì)含水量提高到8％。從14期開(kāi)始采用17β-雌二醇(E2)處理受精卵，獲得全雌性鱉苗。
本發(fā)明根據(jù)發(fā)育時(shí)段的不同，對(duì)室內(nèi)濕度和孵化介質(zhì)的濕度進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整，這樣可以大大降低霉蛋發(fā)生率，使得中華鱉的孵化率顯著提高，本發(fā)明可以有效提高雌性鱉苗的比例(由40％提高到100％)，同時(shí)保持孵化率98％以上。
本發(fā)明在適溫下孵化38～45天左右可以孵出體質(zhì)健壯、雌性特征明顯的雌中華鱉苗，孵化率達(dá)到98％以上。
本發(fā)明首次提出在中華鱉孵化過(guò)程中，在其適宜孵化溫度(29℃)條件下進(jìn)行孵化，在其性別分化過(guò)程中采用一次誘導(dǎo)法獲得全雌中華鱉稚鱉，孵化率高于98％的孵化方法。
運(yùn)用本發(fā)明進(jìn)行中華鱉定性育種的主要優(yōu)點(diǎn)在于：
(1)精準(zhǔn)定性育種；
(2)在最佳孵化條件下進(jìn)行孵化，孵化率高于98％。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1：在中華鱉產(chǎn)卵季節(jié)(5～7月)采集中華鱉受精卵40枚進(jìn)行孵化，受精卵的動(dòng)物極向上平放在孵化基質(zhì)上，受精卵間距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚濕度相同的孵化基質(zhì)覆蓋；將孵化箱放置于可控溫、控濕的孵化室內(nèi)，孵化溫度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相對(duì)濕度控制在65％，孵化中期相對(duì)濕度上調(diào)至80％～85％，孵化后期相對(duì)濕度控制在85％～90％。在塑料孵化箱內(nèi)鋪墊4cm的第一層孵化基質(zhì)(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基質(zhì)含水量5％～7％的孵化基質(zhì)；介質(zhì)含水量在孵化初期為5％，孵化中期為6％，孵化后期為7％；所述第二層孵化基質(zhì)的組成按質(zhì)量百分比可為蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二層孵化基質(zhì)的厚度可為1.5～2.5cm，優(yōu)選2cm；所述受精卵的間距可為1～1.5cm；所述第一層孵化基質(zhì)和第二層孵化基質(zhì)在使用前，最好在陽(yáng)光下充分暴曬2～3天或用紫外線消毒。2)將孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室內(nèi)的溫度控制在29℃，相對(duì)濕度控制在65％～90％，保持孵化溫度至鱉苗出殼。在孵化前期、中期和后期控溫箱中濕度的控制同前文中所述。本方法孵化周期為38～45天，孵化率98％，鱉苗雌雄比為4︰6。
實(shí)施例2：在中華鱉產(chǎn)卵季節(jié)(5～7月)采集中華鱉受精卵40枚進(jìn)行孵化，受精卵的動(dòng)物極向上平放在孵化基質(zhì)上，受精卵間距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚濕度相同的孵化基質(zhì)覆蓋；將孵化箱放置于可控溫、控濕的孵化室內(nèi)，孵化溫度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相對(duì)濕度控制在65％，孵化中期相對(duì)濕度上調(diào)至80％～85％，孵化后期相對(duì)濕度控制在85％～90％。在塑料孵化箱內(nèi)鋪墊5cm的第一層孵化基質(zhì)(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基質(zhì)含水量5％～7％的孵化基質(zhì)；介質(zhì)含水量在孵化初期為5％，孵化中期為6％，孵化后期為7％；所述第二層孵化基質(zhì)的組成按質(zhì)量百分比可為蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二層孵化基質(zhì)的厚度可為1.5～2.5cm，優(yōu)選2cm；所述受精卵的間距可為1～1.5cm；所述第一層孵化基質(zhì)和第二層孵化基質(zhì)在使用前，最好在陽(yáng)光下充分暴曬2～3天或用紫外線消毒。2)將孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室內(nèi)的溫度控制在29℃，相對(duì)濕度控制在65％～90％，保持孵化溫度至鱉苗出殼。在孵化前期、中期和后期控溫箱中濕度的控制同前文中所述。
在胚胎發(fā)育達(dá)到14期，采用25μg/μl的17β-雌二醇(E2)處理受精卵，采用本方法孵化周期為38～45天，孵化率98％，獲得雌性鱉苗的比例達(dá)到97％。
實(shí)施例3：在中華鱉產(chǎn)卵季節(jié)(5～7月)采集中華鱉受精卵40枚進(jìn)行孵化，受精卵的動(dòng)物極向上平放在孵化基質(zhì)上，受精卵間距保持在1.2cm左右，其上用大于等于1.5cm厚濕度相同的孵化基質(zhì)覆蓋；將孵化箱放置于可控溫、控濕的孵化室內(nèi)，孵化溫度控制在29±0.1℃。
孵化初期，孵化室的相對(duì)濕度控制在65％，孵化中期相對(duì)濕度上調(diào)至80％～85％，孵化后期相對(duì)濕度控制在85％～90％。在塑料孵化箱內(nèi)鋪墊4cm的第一層孵化基質(zhì)(70％蛭石+10％河砂+20％粘土粒)，基質(zhì)含水量5％～7％的孵化基質(zhì)；介質(zhì)含水量在孵化初期為5％，孵化中期為6％，孵化后期為7％；所述第二層孵化基質(zhì)的組成按質(zhì)量百分比可為蛭石70％，河砂10％，粘土粒20％；所述第二層孵化基質(zhì)的厚度可為1.5～2.5cm，優(yōu)選2cm；所述受精卵的間距可為1～1.5cm；所述第一層孵化基質(zhì)和第二層孵化基質(zhì)在使用前，最好在陽(yáng)光下充分暴曬2～3天或用紫外線消毒。2)將孵化箱置于孵化室的置物架上，孵化室內(nèi)的溫度控制在29℃，相對(duì)濕度控制在65％～90％，保持孵化溫度至鱉苗出殼。在孵化前期、中期和后期控溫箱中濕度的控制同前文中所述。
在胚胎發(fā)育達(dá)到14期，采用50ug/ul的17β-雌二醇(E2)處理受精卵，采用本方法孵化周期為38～45天，孵化率98％，獲得雌性鱉苗的比例達(dá)到100％。