本發(fā)明涉及果樹種植領(lǐng)域，具體涉及一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法。
背景技術(shù)：
：櫻桃采收后，將果皮果肉劃破取出果核，并以清水洗除附著果核外的果肉，即可獲得櫻桃種子。櫻桃種子在收獲后，需要在短時(shí)間呢播種下去，否則種子內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)將會(huì)快速的消耗殆盡，導(dǎo)致種子不萌芽。但是在實(shí)際的種植過程中，由于土地資源有限和受天氣的影響，不可能做到種子收獲后即用來播種。因此，急需一種櫻桃種子的保存方式。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護(hù)劑：冷凍保護(hù)劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基50-60份、氨基甲酸丁酯6-8份、巖芹酸10-15份、正丁砜11-13份、3-乙基-3-戊醇9-11份、氮雜環(huán)醇4-7份、聚丙二醇6-8份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌5-7min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；其中MS培養(yǎng)基購于北京啟維益成科技有限公司。（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡30-40min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對(duì)硝基苯酚10-15份、甲基丙酮酸酯6-9份、肉桂酸銨3-5份、水30-35份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量18-20倍中的冷凍保護(hù)劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放10-12小時(shí)，再放入-30℃的環(huán)境中存放8-10小時(shí)，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用20-25℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護(hù)劑解凍后，取出種子，用溫度為30-35℃的95%的乙醇溶液沖洗種子3-5min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的冷凍保護(hù)劑可以有效的保護(hù)細(xì)胞內(nèi)的營養(yǎng)物質(zhì)和各種酶類物質(zhì)，對(duì)種子本身不具有任何毒害作用，配制完成后，用超聲波處理，可以使冷凍保護(hù)劑在MS液體培養(yǎng)基中均勻的分布，增加其滲透作用，使其能有效的保護(hù)櫻桃種子。冷凍處理時(shí)，預(yù)先將其放入-9℃和-30℃的環(huán)境中，可以使冷凍保護(hù)劑慢慢的滲入種子表皮內(nèi)部，增加種子對(duì)低溫的抵抗能力。解凍時(shí)，用乙醇溶液沖洗種子，可以使種子保持較好的充實(shí)飽滿度。采用本發(fā)明提供的方法，保存種子，可以使種子播種后發(fā)芽率高，種子遺傳穩(wěn)定性好，種子的發(fā)芽速度快，出苗整齊健壯。具體實(shí)施方式下面通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明，但這些舉例性實(shí)施方式的用途和目的僅用來例舉本發(fā)明，并非對(duì)本發(fā)明的實(shí)際保護(hù)范圍構(gòu)成任何形式的任何限定，更非將本發(fā)明的保護(hù)范圍局限于此。實(shí)施例1一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護(hù)劑：冷凍保護(hù)劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基50份、氨基甲酸丁酯6份、巖芹酸10份、正丁砜11份、3-乙基-3-戊醇9份、氮雜環(huán)醇4份、聚丙二醇6份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌5min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡30min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對(duì)硝基苯酚10份、甲基丙酮酸酯6份、肉桂酸銨3份、水30份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量18倍中的冷凍保護(hù)劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放10小時(shí)，再放入-30℃的環(huán)境中存放8小時(shí)，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用20℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護(hù)劑解凍后，取出種子，用溫度為30℃的95%的乙醇溶液沖洗種子3min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。實(shí)施例2一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護(hù)劑：冷凍保護(hù)劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基55份、氨基甲酸丁酯7份、巖芹酸13份、正丁砜12份、3-乙基-3-戊醇10份、氮雜環(huán)醇6份、聚丙二醇7份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌6min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡35min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對(duì)硝基苯酚13份、甲基丙酮酸酯8份、肉桂酸銨4份、水32份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量19倍中的冷凍保護(hù)劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放11小時(shí)，再放入-30℃的環(huán)境中存放9小時(shí)，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用23℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護(hù)劑解凍后，取出種子，用溫度為33℃的95%的乙醇溶液沖洗種子4min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。實(shí)施例3一種櫻桃超低溫種子的保存方法，具體包括以下步驟：（1）配制冷凍保護(hù)劑：冷凍保護(hù)劑由以下重量份的組分制成：MS液體培養(yǎng)基60份、氨基甲酸丁酯8份、巖芹酸15份、正丁砜13份、3-乙基-3-戊醇11份、氮雜環(huán)醇7份、聚丙二醇8份，采用以下方式制成：將氨基甲酸丁酯、巖芹酸、正丁砜、3-乙基-3-戊醇、氮雜環(huán)醇、聚丙二醇放入MS液體培養(yǎng)基中，攪拌7min，用200W超聲波處理10min后放入冰箱中備用；（2）櫻桃種子處理：將收獲的櫻桃種子，放入浸泡液中浸泡40min，其中浸泡液由以下重量份的組分制成：對(duì)硝基苯酚15份、甲基丙酮酸酯9份、肉桂酸銨5份、水35份；（3）冷凍處理：將處理后的種子，放入其重量20倍中的冷凍保護(hù)劑中，然后放入-9℃的環(huán)境中存放12小時(shí)，再放入-30℃的環(huán)境中存放10小時(shí)，最后放入液氮中保存。一種櫻桃種子的解凍方法，包括以下步驟：用25℃的水不停地沖洗凍存管，直至冷凍保護(hù)劑解凍后，取出種子，用溫度為35℃的95%的乙醇溶液沖洗種子5min，然后再用清水沖洗種子，用濾紙吸干種子上的水分，種子解凍完成。試驗(yàn)將收獲的1000粒櫻桃種子，隨機(jī)平均分為5組，分別用實(shí)施例1、2、3的方式處理試驗(yàn)組1、2、3的種子，試驗(yàn)組4的種子收獲曬干后，3天后全部進(jìn)行種植，試驗(yàn)組5的種子，收獲曬干后，放置在不透明的容器中儲(chǔ)藏。每年春季，從試驗(yàn)組1、2、3、5種子中，選取50粒種子進(jìn)行播種試驗(yàn)。各試驗(yàn)組的種子采用完全相同的播種方式，試驗(yàn)結(jié)果如表1所示：表1一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法驗(yàn)證試驗(yàn)項(xiàng)目第一年種子發(fā)芽率（%）第二年種子發(fā)芽率（%）第三年種子發(fā)芽率（%）第四年種子發(fā)芽率（%）試驗(yàn)組1-95.194.993.4試驗(yàn)組2-95.995.294.7試驗(yàn)組3-95.495.094.1試驗(yàn)組495.6---試驗(yàn)組5-10.1種子腐爛種子腐爛從表1中可以看出，本發(fā)明提供的一種櫻桃種子超低溫保存方法及其解凍方法，可以完整的保護(hù)種子的活力，可以長時(shí)間的使種子保持較高的發(fā)芽率。當(dāng)前第1頁1 2 3