本發(fā)明涉及病原菌抗藥性檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法。

背景技術(shù)：

隨著全球水資源危機(jī)以及土壤鹽化問題的加劇,鹽脅迫已經(jīng)成為影響植物生長(zhǎng)、導(dǎo)致糧食和經(jīng)濟(jì)作物減產(chǎn)的主要限制因素。水稻作為全世界人民最重要的口糧之一，培育耐鹽堿水稻新品種是發(fā)展鹽堿地農(nóng)業(yè)的關(guān)鍵。而耐鹽水稻新品種的選育其中最重要的就是水稻耐鹽原始親本的篩選。

目前對(duì)于水稻耐鹽品種的篩選與鑒定主要集中在地上部的形態(tài)指標(biāo)和生理指標(biāo)，如株高、分蘗數(shù)、黃葉數(shù)、葉綠素含量、超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量，然而，生理指標(biāo)易受生長(zhǎng)環(huán)境變化及檢測(cè)方法影響，因而存在著許多不確定因素。形態(tài)指標(biāo)具有直觀、易調(diào)查的優(yōu)點(diǎn)，其中最為直觀簡(jiǎn)便的就是葉片黃化程度。此外，根系是農(nóng)作物吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要器官，是植物地上部分賴以生存的基礎(chǔ)，也是對(duì)鹽害反應(yīng)最敏感的部位，因此水稻根系的研究對(duì)于水稻耐鹽性具有重要的意義，但是由于水稻根系生長(zhǎng)在土壤中，我們很難獲得完整的根系，所以對(duì)根系的研究有很大的限制。

如何采用簡(jiǎn)單快速的處理方法，可以同時(shí)對(duì)以上兩個(gè)地上部和地下部的形態(tài)指標(biāo)進(jìn)行觀察監(jiān)測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)水稻耐鹽品種的快速鑒定篩選值得探討。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷，本發(fā)明提出了一種省時(shí)省力、操作簡(jiǎn)單便捷、使用器材常見，成本低廉，效果顯著的水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法。

技術(shù)方案：為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法，包括以下步驟：

(1)鑒定工具的準(zhǔn)備：準(zhǔn)備帶有多個(gè)均勻播種孔的播種板，所述播種孔下部設(shè)有滲水孔；準(zhǔn)備與播種板尺寸相配合的發(fā)芽盒，所述發(fā)芽盒上口方足以懸放1至多個(gè)播種板；

(2)待鑒定水稻種子的播種：挑選健康飽滿的待鑒定水稻種子，將種子胚向下豎放入播種孔中進(jìn)行播種，一孔一粒，每個(gè)待鑒定水稻品種播種30粒以上，三個(gè)重復(fù)，并分設(shè)對(duì)照組和處理組；

(3)待鑒定水稻種子的培養(yǎng)：將播種板置于發(fā)芽盒上，在發(fā)芽盒中注滿蒸餾水，水滲入播種孔中淹沒種子，置于30℃光照培養(yǎng)箱中浸泡催芽，采用模擬水稻正常生長(zhǎng)的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強(qiáng)度為2000lx；

(4)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽苗數(shù)，苗長(zhǎng)一葉一心后，處理組在發(fā)芽盒中注滿3‰-6‰質(zhì)量濃度的氯化鈉溶液，對(duì)照組不添加氯化鈉溶液，同時(shí)處理組和對(duì)照組從一葉一心期起都每三天加入總體積的千分之一體積的無(wú)土水培營(yíng)養(yǎng)液至處理結(jié)束；

(5)步驟(4)處理開始后將光照培養(yǎng)箱內(nèi)溫度調(diào)節(jié)至25℃，繼續(xù)采用模擬水稻正常生長(zhǎng)的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強(qiáng)度為2000lx；

(6)在上述條件中處理10天，10天后停止脅迫處理試驗(yàn)，每個(gè)重復(fù)挑選10株長(zhǎng)勢(shì)相近的單株，調(diào)查統(tǒng)計(jì)待鑒定水稻品種的黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比和待鑒定水稻品種的處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)，以黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為指標(biāo)評(píng)價(jià)待試品種苗期的耐鹽性，其中黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比為0-30％為強(qiáng)耐鹽型、31％-60％為中度耐鹽型、61％-100％為鹽敏感型；處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為0.8-1為強(qiáng)耐鹽型、0.51-0.79為中度耐鹽型、0-0.5為鹽敏感型。

在一些實(shí)施方式中，步驟(1)中所述播種板選用廢舊PCR96孔板，底部削掉一截保證種子不掉出且能滲水。

更進(jìn)一步的，發(fā)芽盒選用與廢舊PCR96孔板相配合的尺寸為11.6cmx11.6cmx5cm。

在一些實(shí)施方式中，步驟(2)中每個(gè)待鑒定水稻品種播種48粒。

有益效果：本發(fā)明提供的一種水稻苗期耐鹽性的快速鑒定方法，利用實(shí)驗(yàn)室常見器材，全過程在光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行，模擬水稻的最適宜生長(zhǎng)條件，采用對(duì)水稻種子的水培以及鹽脅迫處理，同時(shí)觀察地上部分和地下部分的形態(tài)指標(biāo)，通過黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為指標(biāo)評(píng)價(jià)待試品種苗期的耐鹽性，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)水稻苗期耐鹽性能的快速鑒定，省時(shí)省力，操作簡(jiǎn)單便捷，使用器材常見且可廢物利用，成本低廉，鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性高，可靠性強(qiáng)，實(shí)用價(jià)值顯著，且培養(yǎng)體系有利于根系生長(zhǎng)，便于根系的調(diào)查。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明：

實(shí)施例1：

A)試驗(yàn)材料：采用耐鹽品種P1(寧資12bt3)和鹽敏感品種P2(武運(yùn)粳27號(hào))為例進(jìn)行說(shuō)明。

B)實(shí)施方法：

(1)鑒定工具的準(zhǔn)備：廢舊96孔PCR板6塊，吸水紙6張，尺寸為11.6cmx11.6cmx5cm的發(fā)芽盒6個(gè)，其中PCR板底部削掉一截保證種子不掉出且能滲水；

(2)待鑒定水稻種子的播種：挑選健康飽滿的待鑒定水稻種子，將種子胚向下豎放入PCR板孔中進(jìn)行播種，一孔一粒，每個(gè)待鑒定水稻品種播種48粒，種子按6*8排列，三個(gè)重復(fù)，并分設(shè)對(duì)照組和處理組；

(3)待鑒定水稻種子的培養(yǎng)：將播種過的PCR板置于發(fā)芽盒上，在發(fā)芽盒中注滿蒸餾水，水滲入PCR孔內(nèi)淹沒種子，置于30℃光照培養(yǎng)箱中浸泡催芽，采用模擬水稻正常生長(zhǎng)的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強(qiáng)度為2000lx；

(4)統(tǒng)計(jì)發(fā)芽苗數(shù)，苗長(zhǎng)一葉一心后，處理組在發(fā)芽盒中注滿5‰質(zhì)量濃度的氯化鈉溶液，對(duì)照組不添加氯化鈉溶液，處理組和對(duì)照組都每三天加入1mL無(wú)土水培營(yíng)養(yǎng)液，購(gòu)買自上海微譜化工技術(shù)服務(wù)有限公司；

(5)將光照培養(yǎng)箱內(nèi)溫度調(diào)節(jié)至25℃，繼續(xù)采用模擬水稻正常生長(zhǎng)的12h光照處理、12h黑暗處理再循環(huán)的間歇光照處理模式，其中光照處理的光照強(qiáng)度為2000lx；

(6)在上述條件中處理10天，10天后停止脅迫處理試驗(yàn)，每個(gè)重復(fù)挑選10株長(zhǎng)勢(shì)相近的單株，調(diào)查統(tǒng)計(jì)待鑒定水稻品種的黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比和待鑒定水稻品種的處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)。

C)評(píng)價(jià)方法：以黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比和處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為指標(biāo)評(píng)價(jià)待試品種苗期的耐鹽性，其中黃葉數(shù)占總?cè)~片數(shù)的百分比為0-30％為強(qiáng)耐鹽型、31％-60％為中度耐鹽型、61％-100％為鹽敏感型；處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為0.8-1為強(qiáng)耐鹽型、0.51-0.79為中度耐鹽型、0-0.5為鹽敏感型。

D)試驗(yàn)結(jié)果：

從表1的數(shù)據(jù)結(jié)合評(píng)價(jià)方法可以看出，處理組中P1為耐鹽性較強(qiáng)的材料，其黃葉數(shù)占植株總?cè)~片數(shù)的20.25％，處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為0.73。而P2材料為鹽敏感型，其黃葉數(shù)占植株總?cè)~片數(shù)的79.08％，處理根數(shù)/對(duì)照根數(shù)為0.47。此結(jié)果說(shuō)明，水稻植株在受到鹽脅迫后，黃葉數(shù)會(huì)增多，根系數(shù)目有所下降，耐鹽性強(qiáng)的水稻品種所表現(xiàn)的鹽害程度較輕。

表1 P1和P2材料處理間表型差異

應(yīng)當(dāng)指出，以上具體實(shí)施方式僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。