本發(fā)明涉及一種水稻無菌苗培養(yǎng)的方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術領域。

背景技術：
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“無菌苗”法是植物組織培養(yǎng)技術的延伸，無菌苗是植物有機營養(yǎng)及根系分泌物研究等試驗的必備生物材料，而水稻無菌苗的有效培養(yǎng)是開展后續(xù)組織培養(yǎng)和轉基因工作的前提和基礎。水稻種子消毒是一項麻煩的工作，這是由于水稻種子中的內(nèi)生菌較多，而且種子外有一層與胚結合緊密的殼包裹著，這就給消毒帶來了麻煩，使消毒液不易滲入種子內(nèi)殺死微生物。在現(xiàn)代研究技術領域中，水稻種子消毒的方法比較少，目前效果比較好的方法只有周穎君等人的先將水稻種子去殼后，再用5％的次氯酸鈉消毒45分鐘，這種方法不但繁瑣，增加工作量，而且會損傷種子的胚，影響發(fā)芽率，所以說目前尋找一種適合水稻種子的消毒方法是比較重要的。

技術實現(xiàn)要素：
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針對上述問題，本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種水稻無菌苗培養(yǎng)的方法。

本發(fā)明的水稻無菌苗培養(yǎng)的具體方法為：1、取一定量的水稻種子，用水選法汰除空秕粒后，用水浸種4-8小時；

2、準備幾個大燒杯或培養(yǎng)皿、幾瓶去離子水以及實驗所需直徑為4-5cm杯底墊有4層濕紗布的培養(yǎng)杯，將其包好后置于120-130℃下滅菌25-35分鐘；

3、待浸種完成后，在超凈工作臺內(nèi)進行如下操作：

3-1、將浸種后的水稻種子置于無菌的燒杯中，向燒杯中倒入適量的70％-75％酒精，使其完全沒過水稻種子，讓酒精浸泡1-2分鐘；

3-2、待酒精消毒完成后，倒去酒精，再向燒杯中加入適量的35％-40％甲醛，使其完全沒過水稻種子，讓甲醛浸泡種子3-5分鐘；

3-3、待甲醛消毒完成后，倒去甲醛，再向燒杯中加入適量的無菌水(去離子水滅菌所得)清洗種子，清洗三次；

3-4、待種子洗凈后，將種子置于鋪墊4層紗布的無菌培養(yǎng)杯中以無菌培養(yǎng)膜封口，再將培養(yǎng)杯置于溫度25℃-32℃的環(huán)境中進行催芽。

本發(fā)明的有益效果：它的方法簡單，易于操作，能解決現(xiàn)在實驗室中的水稻種子的消毒問題，進而為開展后續(xù)組織培養(yǎng)和轉基因工作提供前處理技術，以及為研究水稻有機營養(yǎng)及根系分泌物提供實驗材料。

附圖說明：

為了易于說明，本發(fā)明由下述的具體實施及附圖作以詳細描述。

圖1為本發(fā)明實施例1中培養(yǎng)的水稻的生長狀況觀察結果圖；

圖2為本發(fā)明實施例1中培養(yǎng)的水稻的發(fā)芽率分析結果圖；

圖3為本發(fā)明實施例2中培養(yǎng)的水稻的發(fā)芽率分析結果圖；

圖4為本發(fā)明實施例3中培養(yǎng)的水稻的發(fā)芽率分析結果圖。

具體實施方式：

本具體實施方式采用以下技術方案：1、取一定量的水稻種子，用水選法汰除空秕粒后，用水浸種4-8小時；

2、準備幾個大燒杯或培養(yǎng)皿、幾瓶去離子水以及實驗所需直徑為4-5cm杯底墊有4層濕紗布的培養(yǎng)杯，將其包好后置于120-130℃下滅菌25-35分鐘；

3、待浸種完成后，在超凈工作臺內(nèi)進行如下操作：

3-1、將浸種后的水稻種子置于無菌的燒杯中，向燒杯中倒入適量的70％-75％酒精，使其完全沒過水稻種子，讓酒精浸泡1-2分鐘；

3-2、待酒精消毒完成后，倒去酒精，再向燒杯中加入適量的35％-40％甲醛，使其完全沒過水稻種子，讓甲醛浸泡種子3-5分鐘；

3-3、待甲醛消毒完成后，倒去甲醛，再向燒杯中加入適量的無菌水(去離子水滅菌所得)清洗種子，清洗三次；

3-4、待種子洗凈后，將種子置于鋪墊4層紗布的無菌培養(yǎng)杯中以無菌培養(yǎng)膜封口，再將培養(yǎng)杯置于溫度25℃-32℃的環(huán)境中進行催芽。

以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。

實施例1：

稱取5克水稻種子，將其置于一燒杯中，在燒杯中注滿水，然后將水稻秕粒撈出來，再讓水浸泡4小時。同時在121℃下將5套培養(yǎng)皿、3瓶300ml去離子水滅菌30min。在實驗前40分鐘再將實驗所需用具，如：鑷子、酒精燈、無菌的土豆培養(yǎng)基平板等置于超凈工作臺內(nèi)打開紫外燈滅菌30分鐘，待滅菌完成后，在超凈工作臺內(nèi)將浸種后的水稻種子轉移到滅過菌的培養(yǎng)皿中，再向培養(yǎng)皿中加入濃度為75％的酒精使其沒過水稻種子，浸泡1分鐘后倒去酒精，再向盛有種子的培養(yǎng)皿中加入適量濃度濃度為40％的甲醛使其沒過種子，浸泡5分鐘后倒去甲醛，再用無菌水清洗三次。然后用無菌的鑷子夾取15顆種子分別置于三個無菌的土豆培養(yǎng)基平板中，每個平板5顆，在28℃的環(huán)境中培養(yǎng)7天，觀察結果(見圖1；圖2)。此實施例中水稻的發(fā)芽率為93.33％。

實施例2：

稱取10克水稻種子，將其置于一燒杯中，在燒杯中注滿水，然后將水稻空殼秕粒撈出來，再讓水浸泡4小時。同時在121℃下將1個規(guī)格為500ml燒杯、5瓶300ml去離子水滅菌30min。在實驗前40分鐘再將實驗所需用具，如：鑷子、酒精燈、無菌且內(nèi)有濕潤紗布的聚乙烯耐高溫培養(yǎng)杯等置于超凈工作臺內(nèi)打開紫外燈滅菌30分鐘，待滅菌完成后，在超凈工作臺內(nèi)將浸種后的水稻種子轉移到滅過菌的燒杯中，再向燒杯中加入濃度為70％的酒精使其沒過水稻種子，浸泡2分鐘后倒去酒精，再向盛有種子的燒杯中加入適量濃度為40％的甲醛使其沒過種子，浸泡5分鐘后倒去甲醛，再用無菌水清洗三次。然后用無菌的鑷子夾取90顆種子分別置于三個無菌且內(nèi)有濕潤紗布的聚乙烯耐高溫培養(yǎng)杯，每個培養(yǎng)杯30顆，在30℃的環(huán)境中培養(yǎng)7天，觀察結果(見圖3)，此實施例中水稻的發(fā)芽率為91.11％。

實施例3：

稱取10克水稻種子，將其置于一燒杯中，在燒杯中注滿水，然后將水稻空殼撈出來，再讓水浸泡8小時。同時在121℃下將1個規(guī)格為500ml燒杯、5瓶300ml去離子水滅菌30min。在實驗前40分鐘再將實驗所需用具，如：鑷子、酒精燈、無菌且內(nèi)有濕潤紗布的聚乙烯耐高溫培養(yǎng)杯等置于超凈工作臺內(nèi)打開紫外燈滅菌30分鐘，待滅菌完成后，在超凈工作臺內(nèi)將浸種后的水稻種子轉移到滅過菌的燒杯中，再向燒杯中加入濃度為75％的酒精使其沒過水稻種子，浸泡1分鐘后倒去酒精，再向盛有種子的燒杯中加入適量濃度為38％的甲醛使其沒過種子，浸泡5分鐘后倒去甲醛，再用無菌水清洗三次。然后用無菌的鑷子夾取150顆種子分別置于三個無菌且內(nèi)有濕潤紗布的聚乙烯耐高溫培養(yǎng)杯，每個培養(yǎng)杯50顆，在29℃的環(huán)境中培養(yǎng)9天，觀察結果(見圖4)，此實施例中水稻的發(fā)芽率為94％。