本發(fā)明涉及中藥材人工種植技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種苦參的良種培育方法。
背景技術(shù)：
苦參，又叫苦骨、牛參、川參，為豆科植物苦參（sophora flavescens ait.）的干燥根。具有清熱、燥濕、殺蟲(chóng)、利尿之功效，治療熱毒血痢、腸風(fēng)下血、黃疽尿閉、赤白帶下、陰腫陰癢、小兒肺炎、疳積、急性扁桃體炎、痔滿(mǎn)、脫肛、濕疹、濕瘡、皮膚瘙癢、疥癬麻風(fēng)、陰瘡濕癢、瘰疬、燙傷等。由于人們對(duì)該類(lèi)藥物的需求不斷增長(zhǎng)，而野生資源又不足，因此，采取人工種植的方法培育加工苦參是一種有效途徑。
人工栽培苦參有利用種子進(jìn)行有性繁殖方式和利用植物細(xì)胞的全能性無(wú)性繁殖方式，無(wú)性繁殖方式能保存優(yōu)質(zhì)品種和縮短栽培時(shí)間，但是由于缺乏品種的提純復(fù)壯，病毒累積嚴(yán)重，使得苦參的病蟲(chóng)害發(fā)生率上升，產(chǎn)量下降。所以需要對(duì)苦參進(jìn)行無(wú)害化處理，培育出良種苦參進(jìn)行栽培。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明提供一種苦參的良種培育方法，它可以解決苦參由于長(zhǎng)期無(wú)性繁殖引起的病毒累積嚴(yán)重的問(wèn)題。
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：這種苦參的良種培育方法，包括如下步驟：
A、植株篩選：在苦參成熟時(shí)或者萌芽時(shí)，選擇無(wú)病蟲(chóng)害的植株；
B、預(yù)處理和消毒：取步驟A所得植株的根尖或者子芽1～2cm，用清水清洗干凈，再用70%的酒精漂洗30s，然后用0.1%的HgCl2溶液滅菌3min，無(wú)菌水洗3遍及以上；
C、將步驟B所得的子芽置于顯微鏡下，用酒精浸泡后，再用灼燒冷卻的鑷子和剪刀剝離子芽外部葉片，切取帶有1～2個(gè)葉原基的莖尖；或者將步驟B所得的根尖置于顯微鏡下，用酒精浸泡后，再用灼燒冷卻的鑷子和剪刀將根尖分生區(qū)細(xì)胞切成3～7個(gè)根尖小段，再用無(wú)菌水清洗3遍及以上；
D、培育：將步驟C所得莖尖放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L+萘乙酸1.0mg/L，等到生長(zhǎng)出不定芽后，繼續(xù)在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)35～40天，至生長(zhǎng)出3～4 cm叢生芽，將所述叢生芽剪成2片葉，長(zhǎng)約1.5 cm的小段接入增殖培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基是MS全培養(yǎng)基，20天為一個(gè)轉(zhuǎn)接周期，當(dāng)增殖至適當(dāng)?shù)臄?shù)量后，將幼苗分25～30株為一批，分批接入生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基是1/2MS+萘乙酸1.0mg/L+多效唑 10mg/L，培養(yǎng)至有白色根系長(zhǎng)出；
或者將步驟C所得根尖小段放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)15～25天，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L +萘乙酸1.0mg/L，得到預(yù)生根，將所述預(yù)生根的根尖1～2cm切成3～7個(gè)根尖小段接入所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15～25天，重復(fù)上述步驟至得到適當(dāng)數(shù)量的預(yù)生根后，將所述預(yù)生根25～30個(gè)為一批，分批接入增殖培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L+萘乙酸1.5mg/L，培養(yǎng)至長(zhǎng)出3～4 cm叢生芽；
E、將步驟D所得長(zhǎng)葉長(zhǎng)根的幼苗放入陽(yáng)光下3～5天，取出幼苗，將其移栽至育苗床，行距5～6cm、株距5～6cm，開(kāi)深3～4cm，每處栽種一株幼苗，保持育苗床濕潤(rùn)；所述育苗床是由甘蔗葉作為基質(zhì)，混合有蔗糖廠濾泥和/或者魚(yú)塘淤泥、磷酸氫二鉀、花生麩、腐殖質(zhì)發(fā)酵而得；當(dāng)幼苗長(zhǎng)出6～7片復(fù)葉，60%植株出現(xiàn)五出復(fù)葉時(shí)，將其移栽至大田，即可。
上述技術(shù)方案中，更具體的技術(shù)方案還可以是：所述培育階段的培養(yǎng)條件為溫度23～28℃，光照強(qiáng)度1500～1800LUX。
進(jìn)一步的：所述育苗床的各成分比重為甘蔗葉60～75重量份、蔗糖廠濾泥和/或者魚(yú)塘淤泥20～25重量份、磷酸氫二鉀5～10重量份、腐殖質(zhì)5～10重量份、花生麩1～2重量份。
由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果：
1、苦參的莖尖和根尖的分生組織中一般是無(wú)毒或僅含極低濃度的病毒粒子，利用細(xì)胞的全能性，通過(guò)莖尖或者根尖分裂分化可產(chǎn)生完整的、無(wú)病毒的植株。本發(fā)明不僅是通過(guò)莖尖培養(yǎng)的方式，還提出了根尖培養(yǎng)的方式，獲得優(yōu)良無(wú)病毒的苦參幼苗，將其進(jìn)行種植，植株生長(zhǎng)健壯，長(zhǎng)勢(shì)一致，病蟲(chóng)害發(fā)生率只有8%左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于普通無(wú)性繁殖35%左右的病蟲(chóng)害發(fā)生率。
2、用本發(fā)明培育的苦參的良種幼苗進(jìn)行栽種，苦參的產(chǎn)量能增加30%左右，并能保持野生苦參的所有優(yōu)良特性及有效中藥成分含量。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述：
實(shí)施例一：
這種苦參的良種培育方法如下：
A、植株篩選：在在9月底至11月上旬苦參成熟時(shí)或者3月份萌芽時(shí)，選擇無(wú)病蟲(chóng)害的植株；
B、預(yù)處理和消毒：取步驟A所得植株的根尖1～2cm，用清水清洗干凈，再用70%的酒精漂洗30s，然后用0.1%的HgCl2溶液滅菌3min，無(wú)菌水洗3遍；
C、將步驟B所得的根尖置于顯微鏡下，用酒精浸泡后，再用灼燒冷卻的鑷子和剪刀將根尖分生區(qū)細(xì)胞切成5個(gè)根尖小段，再用無(wú)菌水清洗3遍；
D、培育：將步驟C所得根尖小段放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)15天，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L +萘乙酸1.0mg/L，得到預(yù)生根，將所述預(yù)生根的根尖1～2cm切成5個(gè)根尖小段接入所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基培養(yǎng)15～25天，重復(fù)上述步驟至得到適當(dāng)數(shù)量的預(yù)生根后，將所述預(yù)生根30個(gè)為一批，分批接入增殖培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L+萘乙酸1.5mg/L，培養(yǎng)至長(zhǎng)出3～4 cm叢生芽；
以上培養(yǎng)條件為溫度23～28℃，光照強(qiáng)度1500～1800LUX；
E、將步驟D所得長(zhǎng)葉長(zhǎng)根的幼苗放入陽(yáng)光下3～5天，取出幼苗，將其移栽至育苗床，行距5～6cm、株距5～6cm，開(kāi)深3～4cm，每處栽種一株幼苗，保持育苗床濕潤(rùn)；所述育苗床是由甘蔗葉作為基質(zhì)，混合有濾泥、磷酸氫二鉀、花生麩、腐殖質(zhì)發(fā)酵而得；其中甘蔗葉60～75重量份、魚(yú)塘淤泥20～25重量份、磷酸氫二鉀5～10重量份、腐殖質(zhì)5～10重量份、花生麩1～2重量份；當(dāng)幼苗長(zhǎng)出6～7片復(fù)葉，60%植株出現(xiàn)五出復(fù)葉時(shí)，將其移栽至大田，即可。
實(shí)施例二：
這種苦參的良種培育方法如下：
A、植株篩選：在在9月底至11月上旬苦參成熟時(shí)或者3月份萌芽時(shí)，選擇無(wú)病蟲(chóng)害的植株；
B、預(yù)處理和消毒：取步驟A所得植株的子芽1～2cm，用清水清洗干凈，再用70%的酒精漂洗30s，然后用0.1%的HgCl2溶液滅菌3min，無(wú)菌水洗3遍；
C、將步驟B所得的子芽置于顯微鏡下，用酒精浸泡后，再用灼燒冷卻的鑷子和剪刀剝離子芽外部葉片，切取帶有1～2個(gè)葉原基的莖尖；
D、培育：將步驟C所得莖尖放入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是MS+6-芐基嘌呤1.5mg/L+萘乙酸1.0mg/L，等到生長(zhǎng)出不定芽后，繼續(xù)在所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)35天，至生長(zhǎng)出3～4 cm叢生芽，將所述叢生芽剪成2片葉，長(zhǎng)約1.5 cm的小段接入增殖培養(yǎng)基，所述增殖培養(yǎng)基是MS全培養(yǎng)基，20天為一個(gè)轉(zhuǎn)接周期，當(dāng)增殖至適當(dāng)?shù)臄?shù)量后，將幼苗分30株為一批，分批接入生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基是1/2MS+萘乙酸1.0mg/L+多效唑 10mg/L，培養(yǎng)至有白色根系長(zhǎng)出；
以上培養(yǎng)條件為溫度23～28℃，光照強(qiáng)度1500～1800LUX；
E、將步驟D所得長(zhǎng)葉長(zhǎng)根的幼苗放入陽(yáng)光下3～5天，取出幼苗，將其移栽至育苗床，行距5～6cm、株距5～6cm，開(kāi)深3～4cm，每處栽種一株幼苗，保持育苗床濕潤(rùn)；所述育苗床是由甘蔗葉作為基質(zhì)，混合有濾泥、磷酸氫二鉀、花生麩、腐殖質(zhì)發(fā)酵而得；其中甘蔗葉60～75重量份、魚(yú)塘淤泥20～25重量份、磷酸氫二鉀5～10重量份、腐殖質(zhì)5～10重量份、花生麩1～2重量份；當(dāng)幼苗長(zhǎng)出6～7片復(fù)葉，60%植株出現(xiàn)五出復(fù)葉時(shí)，將其移栽至大田，即可。