1.鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法,其特征在于包含以下步驟:
(1)準(zhǔn)備鐵皮石斛材料;
(2)建造全自然光培養(yǎng)室
使用透光材料,并配備遮陽(yáng)系統(tǒng)、降溫設(shè)備和培養(yǎng)架,通過(guò)遮陽(yáng)系統(tǒng)確保培養(yǎng)室內(nèi)頂層培養(yǎng)架的光照強(qiáng)度為3000~5000Lux,光照強(qiáng)度隨著培養(yǎng)架的層數(shù)下移而降低,底層培養(yǎng)架的光照強(qiáng)度為100~1000Lux,降溫設(shè)備可將玻璃培養(yǎng)室的溫度控制在20~30℃,培養(yǎng)架長(zhǎng)度可根據(jù)培養(yǎng)室的大小而定;
(3)制作種子懸浮液
于鐵皮石斛種質(zhì)圃中,選取生長(zhǎng)健壯、萌芽率高、抗逆性、抗病蟲(chóng)害強(qiáng)的健康株系,于開(kāi)花季節(jié)進(jìn)行人工授粉并套袋,選取一定范圍果齡的蒴果為外植體,進(jìn)行消毒、清洗和除水,接著用無(wú)菌手術(shù)刀切開(kāi)蒴果,將蒴果內(nèi)的種子全部洗脫至一裝有無(wú)菌水的瓶中,每個(gè)蒴果的種子對(duì)應(yīng)洗脫至一個(gè)瓶,制成種子懸浮液,對(duì)每個(gè)蒴果種子懸浮液進(jìn)行種子密度的檢測(cè),根據(jù)每瓶懸浮液種子濃度用無(wú)菌水進(jìn)一步稀釋成種子濃度為10-15粒/毫升的接種用的種子懸浮液;
(4)無(wú)菌播種
無(wú)菌條件下用移液槍吸取接種用的種子懸浮液2毫升至裝有150毫升的一次成苗固體培養(yǎng)基的蘭花培養(yǎng)瓶中,每瓶鐵皮石斛的種子數(shù)量20-30粒;
(5)一次成苗培養(yǎng)
原球莖誘導(dǎo)培養(yǎng):將種子懸浮液均勻分布培養(yǎng)基表面上,將此培養(yǎng)瓶放置全自然光培養(yǎng)室中的培養(yǎng)架上,保持其光照強(qiáng)度在100~1000Lux,保持培養(yǎng)室溫度在(26±2)℃,此條件下培養(yǎng)60~90天,種子萌發(fā)形成原球莖,原球莖長(zhǎng)出根和葉片;
小苗培養(yǎng):將小苗移動(dòng)至培養(yǎng)架的合適層,加強(qiáng)其自然光照培養(yǎng),促進(jìn)小苗生長(zhǎng),此時(shí)期培養(yǎng)時(shí)間為90天,培養(yǎng)溫度為(26±2)℃,小苗長(zhǎng)成大苗,苗高3~5cm,3~5片~葉片,3~5條根須,根長(zhǎng)1~3厘米;大苗基部萌發(fā)出1-2個(gè)新苗,形成叢生苗;
大苗培養(yǎng):將大苗移動(dòng)至培養(yǎng)架的頂層,在高自然光光強(qiáng)下進(jìn)行培養(yǎng),既可以促進(jìn)大苗的生長(zhǎng),又可以達(dá)到煉苗的效果,此時(shí)期培養(yǎng)60天,培養(yǎng)溫度為(26±2)℃,此時(shí)鐵皮石斛苗每叢2-5苗,苗高5~8cm,有4-6節(jié),4片以上葉片,3條以上根,莖粗2.0mm以上,達(dá)到出苗的標(biāo)準(zhǔn);
(6)試管苗的移栽
移栽時(shí),從培養(yǎng)瓶中取出生根苗,洗凈附著的培養(yǎng)基后,用千分之一的高錳酸鉀溶液浸泡5min,然后將生根苗晾干至根變白,種植基質(zhì)采用已經(jīng)消毒處理的樹(shù)皮,注意保持適宜濕度和溫度,置于陰涼通風(fēng)處栽培,30天左右成活后的植株能產(chǎn)生新的根系,此時(shí)可移入大棚進(jìn)行正常水、肥、藥管理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法,其特征在于步驟(2)中,頂層往下的第二、三層培養(yǎng)架光照強(qiáng)度為1000~3000Lux。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法,其特征在于步驟(3)中所述一定范圍果齡優(yōu)選為120天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法,其特征在于步驟(3)中所述消毒、清洗和除水具體為在70%酒精中浸泡30秒,再用0.1%升汞溶液消毒15~20分鐘,無(wú)菌水沖洗4~5次,于超凈工作臺(tái)上無(wú)菌條件下用無(wú)菌濾紙吸干蒴果表面的水分。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法,其特征在于步驟(3)中所述種子密度的檢測(cè)是指對(duì)每個(gè)蒴果種子懸浮液進(jìn)行種子密度的檢測(cè),具體過(guò)程為在搖勻情況下用無(wú)菌移液槍吸取20微升于生物顯微鏡下計(jì)算其種子數(shù)量,每瓶種子懸浮液重復(fù)取10次計(jì)算其平均每毫升種子數(shù)。
6.一種權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛優(yōu)質(zhì)種苗自然光培養(yǎng)一次成苗快速繁殖方法中使用的一次成苗培養(yǎng)基,其特征在于包含以下成分:每升含花寶1號(hào)1~2g,花寶2號(hào)1~2g,蛋白胨0.5~2g,土豆泥40~80g,香蕉泥50~100g,蘋(píng)果泥10~20g,活性碳500~1000mg,肌醇80~120mg,甘氨酸1.5~2.5mg,鹽酸硫胺素(VB1)0.05~0.2mg,鹽酸吡哆醇(VB6)0.4~0.8mg,煙酸0.4~0.8mg,6-芐基嘌呤0.05~0.1毫克,萘乙酸(NAA)0.2~2mg,蔗糖15~30g,瓊脂6~7g,pH 5.4-5.6。