1.一種嘉寶果組織培養(yǎng)體系建立的方法,其特征在于包括以下步驟:
步驟1,外植體消毒:取健壯嘉寶果當(dāng)年生的莖尖,刷洗干凈后,用洗衣粉溶液浸泡12min后用毛刷刷洗外植體表面將其表面的塵土和部分菌體去除,然后用自來(lái)水沖洗5h后超凈工作臺(tái)中,先用75%乙醇消毒32s后用無(wú)菌水洗8次,再用0.1%升汞溶液消毒28min,用無(wú)菌水沖洗8次再用無(wú)菌濾紙擦干表面的水珠后備用;
步驟2,啟動(dòng)培養(yǎng):將經(jīng)步驟(1)處理后的莖尖接種到啟動(dòng)培養(yǎng)基進(jìn)行芽誘導(dǎo),接種后先在30℃條件下全暗培養(yǎng)9天后統(tǒng)計(jì)污染率和存活率,然后每天光照15小時(shí),光照強(qiáng)度為3200lx條件下培養(yǎng)32天,統(tǒng)計(jì)組培苗的萌動(dòng)率及生長(zhǎng)情況;
步驟3,增殖培養(yǎng):將步驟(2)培養(yǎng)得到的生長(zhǎng)正常、有明顯莖、葉結(jié)構(gòu)的叢生芽切下并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng),接種后先在29℃條件下全暗培養(yǎng)5天,然后每天光照15小時(shí),光照強(qiáng)度為3000lx,培養(yǎng)溫度為29℃的條件下培養(yǎng)32天后觀察生長(zhǎng)情況和芽增殖情況,多次反復(fù)切割芽體進(jìn)行繼代培養(yǎng),以得到更多的叢生芽;
步驟4,壯苗培養(yǎng):將經(jīng)步驟(3)增殖培養(yǎng)的叢生苗切成適當(dāng)大小,接種到壯苗培養(yǎng)基上進(jìn)行壯苗培養(yǎng),以利于生根,接種后先在29℃條件下全暗培養(yǎng)5天,然后每天光照15小時(shí),光照強(qiáng)度為3200lx,培養(yǎng)溫度為29℃的條件下培養(yǎng)至組培苗生長(zhǎng)到4cm以上;
步驟5,生根培養(yǎng):將步驟(2)、(3)或(4)過(guò)程獲得的高度4.0cm以上的組培苗接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng),接種后先在29℃條件下全暗培養(yǎng)5天,然后每天光照16小時(shí),光照強(qiáng)度為3200lx,培養(yǎng)溫度為29℃的條件下培養(yǎng)1個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根情況;
步驟6,煉苗移栽:將步驟(5)獲得的高約9cm的生長(zhǎng)良好且健壯的生根試管苗去瓶蓋自然光照下煉苗9天后,將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出,洗掉根部培養(yǎng)基,栽入由營(yíng)養(yǎng)土:珍珠巖=4:1混合成的基質(zhì),光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),每天以1/4MS大量元素營(yíng)養(yǎng)液給幼苗澆水,保持濕度 ,待幼苗成活后再移栽大田。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嘉寶果組織培養(yǎng)體系建立的方法,其特征在于步驟(2)所述的啟動(dòng)培養(yǎng)基為:MS+2mg/L6-BA+0.7mg/L NAA+32g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH為5.9。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嘉寶果組織培養(yǎng)體系建立的方法,其特征在于步驟(3)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+1.2mg/LNAA+7mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂,pH為5.9。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嘉寶果組織培養(yǎng)體系建立的方法,其特征在于步驟(4)所述的壯苗培養(yǎng)基為:MS+0.8mg/L 6-BA+1.2mg/L GA3+32g/L蔗糖+7.5g/L瓊脂,pH為5.9。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種嘉寶果組織培養(yǎng)體系建立的方法,其特征在于步驟(5)所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+6.5mg/L IBA+32g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH為5.9。