本發(fā)明涉及到三七種植技術(shù)，尤其是一種三七組織培養(yǎng)快繁方法。

背景技術(shù)：

三七為五加科植物，三七：Panak notpginseng（Bvrk）F.H.chen的干 燥根，主產(chǎn)云南、廣西等地，此外，四川、貴州、江西亦產(chǎn)。挖出的根，除去莖葉、泥土，剪下蘆頭，側(cè)根及須根，暴曬至半干，反復(fù)搓揉，以后每日邊曬邊搓，待至全干放入麻袋內(nèi)撞至表面光滑即可，藥性，根略呈紡錘形，類圓錐形或不規(guī)則塊狀，長1~6cm，直徑1~4cm，表面灰黃或灰棕色，有斷續(xù)的縱皺分級支根。中心微顯放射狀紋理。氣微，味苦而后微甜。以個大皮細(xì)、體重質(zhì)堅、表面光滑、斷面色灰綠或黃綠者為佳。主要成材含多種皂苷，總量9.75~14.9%，和人參所含皂苷類似，但主為達(dá)瀉脂烷系皂苷，有人參皂苷和三七皂苷等。功用主治：止血散瘀，消腫止痛，用于吐血、衄血、便血、血痢、產(chǎn)后血暈，瘀血胸痛，跌打腫痛，外傷出血。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種通過不定芽、叢生芽增植、試管苗生根、煉苗移栽等方法，使三七通過叢生芽的離體快繁方法獲得苗壯根粗，生命力強，操作容易，成活率高達(dá)96%，工藝方法簡單易行，技術(shù)可靠，操作容易。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是這樣的，一種三七組織培養(yǎng)快繁方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）誘導(dǎo)不定芽：選取三七帶節(jié)藤莖為外植體,經(jīng)75%酒精消毒4秒種后，用無菌水沖洗8次后置于0.3%的升汞溶液中消毒9分鐘，然后用無菌水沖洗8次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,在24℃條件下全暗培養(yǎng)，直至誘導(dǎo)形成不定芽；

（2）叢生芽增殖培養(yǎng)：將不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后每天光照11小時，光照強度為900lx，培養(yǎng)溫度為24℃的條件下培養(yǎng)，19天轉(zhuǎn)接一次；

（3）試管苗生根：將長至5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在24℃條件下全暗培養(yǎng)6天，然后每天光照11小時，光照強度為1900lx，培養(yǎng)溫度為24℃的條件下培養(yǎng)至生根；

（4）煉苗移栽：將長至5cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開自然光照下煉苗9天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基質(zhì)并定植于大田中。

步驟（1）所述的三七帶藤莖外植體在進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)之前需進(jìn)行預(yù)處理，處理的方法是：將從采集的三七帶藤莖用自來水沖洗干凈泥沙后置于0.08%的高錳酸鉀溶液中浸泡3小時，再用自來水沖洗8次后用膠塑料袋密封后置于6℃冰箱中過夜備用。

步驟（1）所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以GS為基本培養(yǎng)基，附加1.8%蔗糖0.3%瓊脂0.15%活性炭0.55%酸性水解酪蛋白以及2.1mg/L KT2.1mg/L IBA和1.1mg/L 2,4-D，pH值為5.9。

步驟（2）所述的增殖培養(yǎng)基為：以MS為基本培養(yǎng)基，附加0.32mg/L 6-BA1.8mg/L NAA 8.0mg/L核黃素0.8mg/L D-泛酸鈣8.0mg/L抗壞血酸8.0mg/L L-半胱氨酸和4.0%蔗糖8.0%瓊脂0.3%活性炭，pH值為5.9。

步驟（3）所述的生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，附加1.0mg/L IBA1.2mg/L GGR2.8mg/L L-半胱氨酸和2.8%蔗糖0.8%瓊脂0.2%活性炭，pH值為5.9。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比的突出效果是：運用組織培養(yǎng)模式獲得粗壯、成活率高達(dá)96%以上的三七樹苗，具有簡易可行，容易操作，經(jīng)濟，成本低，工藝方法先進(jìn)，可以規(guī)模化生產(chǎn)。

具體實施方式

以下實施例是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對本發(fā)明的限制。

實施例1

1、外植體預(yù)處理：將從采集的三七帶藤莖用自來水沖洗干凈泥沙后置于0.02%的高錳酸鉀溶液中浸泡6小時，再用自來水沖洗6次后用膠塑料袋密封后置于2℃冰箱中過夜備用。

2、培養(yǎng)過程：

（1）誘導(dǎo)不定芽：三七帶節(jié)藤莖經(jīng)75%酒精消毒6秒種后，用無菌水沖洗5次后經(jīng)0.3%的升汞溶液中消毒20分鐘，然后用無菌水沖洗6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,在26℃條件下全暗培養(yǎng)，培養(yǎng)48天后形成不定芽。所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：GS+1.8mg/LKT+0.2mg/LIBA和0.3mg/L 2,4-D +3.6%蔗糖+0.25%瓊脂+0.06%活性炭+0.2%酸性水解酪蛋白，pH值為5.6;

（2）叢生芽增殖培養(yǎng)：將不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后每天光照12小時，光照強度為1200lx，培養(yǎng)溫度為26℃的條件下培養(yǎng)，23天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為9。所采用的增殖培養(yǎng)基為：MS+1.8mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA +0.8mg/L核黃素+0.3mg/L D-泛酸鈣+0.8mg/L抗壞血酸+0.8mg/L L-半胱氨酸+2.5%蔗糖+0.25%瓊脂+0.15%活性炭，pH值為5.6；

（3）試管苗生根：將長至1cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在26℃條件下全暗培養(yǎng)5天，然后每天光照12小時，光照強度為3500lx，培養(yǎng)溫度為26℃的條件下培養(yǎng)23天生根，生根率達(dá)96%。所采用的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.25mg/L IBA+0.55mg/L GGR+0.8mg/L L-半胱氨酸+1.8%%蔗糖+0.2%瓊脂+0.15%活性炭，pH值為5.6；

（4）煉苗移栽：將長至1cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開自然光照下煉苗4天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基質(zhì)并定植于大田中，成活率達(dá)96%。

實施例2

1、外植體預(yù)處理：將從野外采集的三七帶藤莖用自來水沖洗干凈泥沙后0.02%的高錳酸鉀溶液中浸泡6小時，再用自來水沖洗5次后膠塑料袋密封后6℃冰箱中過夜備用。

2、培養(yǎng)過程：

（1）誘導(dǎo)不定芽：三七帶節(jié)藤莖經(jīng)75%酒精消毒8秒種后，用無菌水沖洗6次后經(jīng)0.4%的升汞溶液中消毒8分鐘，然后用無菌水沖洗6次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,在23℃條件下全暗培養(yǎng)，培養(yǎng)41天后形成不定芽。所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：GS+1.0mg/L KT+0.15mg/L IBA和0.15mg/L 2,4-D +0.25%蔗糖+0.35%瓊脂+0.15%活性炭+0.45%酸性水解酪蛋白，pH值為5.5;

（2）叢生芽增殖培養(yǎng)：將不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后每天光照13小時，光照強度為1500lx，培養(yǎng)溫度為24℃的條件下培養(yǎng)，28天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為3。所采用的增殖培養(yǎng)基為：MS+0.5mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA +2.5mg/L核黃素+0.25mg/L D-泛酸鈣+3.3mg/L抗壞血酸+4.3mg/L L-半胱氨酸+3.3%蔗糖+0.6%瓊脂+0.065%活性炭，pH值為5.5；

（3）試管苗生根：將長至5cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在24℃條件下全暗培養(yǎng)12天，然后每天光照13小時，光照強度為3000lx，培養(yǎng)溫度為24℃的條件下培養(yǎng)30天生根，生根率達(dá)96%。所采用的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.55mg/L IBA+1.25mg/L GGR+3.0mg/L L-半胱氨酸+3.0%%蔗糖+0.2%瓊脂+0.02%活性炭，pH值為5.5；

（4）煉苗移栽：將長至10cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開自然光照下煉苗9天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基質(zhì)并定植于大田中，成活率達(dá)96%。

實施例3

1、外植體預(yù)處理：將從野外采集的三七帶藤莖用自來水沖洗干凈泥沙后0.08%的高錳酸鉀溶液中浸泡3小時，再用自來水沖洗3次后用膠塑料袋密封后5℃冰箱中過夜備用。

2、培養(yǎng)過程：

（1）誘導(dǎo)不定芽：三七帶節(jié)藤莖經(jīng)75%酒精消毒6秒種后，用無菌水沖洗6次后置于0.15%的升汞溶液中消毒11分鐘，然后用無菌水沖洗8次，經(jīng)無菌濾紙吸干水分后接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,在26℃條件下全暗培養(yǎng)，培養(yǎng)49天后形成不定芽。所采用的誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：GS+1.5mg/L KT+0.75mg/L IBA和0.25mg/L 2,4-D +3.25%蔗糖+0.25%瓊脂+0.02%活性炭+0.25%酸性水解酪蛋白，pH值為5.3;

（2）叢生芽增殖培養(yǎng)：將不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)，接種后置于每天光照11小時，光照強度為1100lx，培養(yǎng)溫度為25℃的條件下培養(yǎng)，24天轉(zhuǎn)接一次，增殖系數(shù)為8。所采用的增殖培養(yǎng)基為：MS+1.35mg/L 6-BA+0.55mg/L NAA +3.5mg/L核黃素+0.35mg/L D-泛酸鈣+0.45mg/L抗壞血酸+2.25mg/L L-半胱氨酸+2.5%蔗糖+0.35%瓊脂+0.15%活性炭，pH值為5.3；

（3）試管苗生根：將長至1cm的叢生芽分切接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根，接種后先在23℃條件下全暗培養(yǎng)11天，然后每天光照11小時，光照強度為3500lx，培養(yǎng)溫度為23℃的條件下培養(yǎng)49天生根，生根率達(dá)96%。所采用的生根培養(yǎng)基為：1/2MS+0.15mg/L IBA+0.65mg/L GGR+1.35mg/L L-半胱氨酸+1.25%%蔗糖+0.35%瓊脂+0.15%活性炭，pH值為5.3；

（4）煉苗移栽：將長至1cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶瓶蓋打開并自然光照下煉苗8天后，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土和河沙（1：1）混合成的基質(zhì)并定植于大田中，成活率達(dá)96%。