本發(fā)明涉及生物離體組織或器官的保存領(lǐng)域，特別涉及一種胎盤保存液的制備方法。
背景技術(shù)：
：間充質(zhì)干細胞是干細胞家族中的重要一員，可以不斷進行自我更新，具有多向分化潛力。目前，間充質(zhì)干細胞主要來源于骨髓、臍血、臍帶組織和胎盤組織等,從胎盤組織中分離得到的間充質(zhì)干細胞，具有來源方便，數(shù)量充足，制備簡單、快捷，細胞增殖能力和分化能力強等優(yōu)點，具有較高的應(yīng)用價值。胎盤從采集到制備，這個過程需要一定時間，然而胎盤在離體環(huán)境下會迅速影響胎盤組織的代謝狀況，其細胞活力會在短時間內(nèi)明顯下降，因此如何保證間充質(zhì)干細胞的活性是問題的關(guān)鍵。通常情況下，在采集完胎盤后，將其置于保存液中進行保存，給細胞提供營養(yǎng)成分，維持活力?，F(xiàn)有保存液主要是在緩沖液的基礎(chǔ)上添加樹種氨基酸、抗生素、人血白蛋白等成分，雖然可以較好的維持細胞活性，然而過程繁瑣，成分復(fù)雜，費時費力，無法在短時間內(nèi)大量配置。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種胎盤保存液的制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的保存液配置繁瑣，過程復(fù)雜，工作量大等問題。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)：一種胎盤保存液的制備方法，包括以下步驟：(1)準備濃度為0.9％的氯化鈉水溶液；(2)向步驟(1)中的溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液；(3)向步驟(2)所得的保存液中加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；(4)將步驟(3)所得的保存液通過20μm—25μm濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液。作為優(yōu)選，步驟(2)中所述的AIM—V無血清培養(yǎng)基含有L—谷酰酰胺，50μg/ml硫酸鏈霉素和10μg/ml硫酸慶大霉素。作為優(yōu)選，所述胎盤保存液中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為30％—40％。作為優(yōu)選，步驟(4)所用的濾膜孔徑為22μm。。本發(fā)明的有益效果是：胎盤保存液直接由濃度為0.9％的氯化鈉水溶液和AIM—V無血清培養(yǎng)基配置而成，可以有效的維持細胞滲透壓和活力，提高細胞抵抗力，對細胞無毒副作用，同時因成分簡單，配置方便快捷，提高使用率。具體實施方式下面對本發(fā)明的具體實施方式作進一步說明。在此需要說明的是，對于這些實施方式的說明用于幫助理解本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限定。此外，下面所描述的本發(fā)明各個實施方式中所涉及的技術(shù)特征只要彼此之間未構(gòu)成沖突就可以相互組合。本發(fā)明的一種胎盤保存液的制備方法，包括以下步驟：(1)準備濃度為0.9％的氯化鈉水溶液；(2)向步驟(1)中的溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液；(3)向步驟(2)所得的保存液中加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；(4)將步驟(3)所得的保存液通過20μm—25μm濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液。其中AIM—V無血清培養(yǎng)基含有L—谷酰酰胺，50μg/ml硫酸鏈霉素和10μg/ml硫酸慶大霉素；所得胎盤保存液中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為30％—40％；步驟(4)所用的濾膜孔徑為22μm。上述所得胎盤保存液直接由濃度為0.9％的氯化鈉水溶液和AIM—V無血清培養(yǎng)基配置而成，可以有效的維持細胞滲透壓和活力，提高細胞抵抗力，對細胞無毒副作用，同時因成分簡單，配置方便快捷，提高使用率。實施例1：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過22μm的濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液，其中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為30％。實施例2：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過22μm的濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液，其中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為40％。對比例1：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過22μm的濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液，其中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為20％。對比例2：向0.9％的氯化鈉水溶液中加入AIM—V無血清培養(yǎng)基，形成保存液，再加入NaHCO3，調(diào)節(jié)PH至7.1—7.4；最后將保存液通過22μm的濾膜進行過濾，最終得胎盤保存液，其中AIM—V無血清培養(yǎng)基的濃度為50％。用上述實施例和對比例配置好的胎盤保存液浸沒胎盤，在4℃避光保存，具體方法為：由醫(yī)護人員把新鮮采集的胎盤放置于胎盤采集盒中，并把4℃胎盤保存液轉(zhuǎn)移至胎盤采集盒中，胎盤保存液應(yīng)浸沒胎盤，封好采集盒蓋子后置于4℃中保存、運輸。細胞活力檢測：以實施例1—2所述的胎盤保存液保存的胎盤為實驗組1—2，以對比例1—2所述的胎盤保存液保存的胎盤為對照組1—2。各實驗組和對照組胎盤分別在24h、48h、96h進行實驗，按照常規(guī)方法分離胎盤間充質(zhì)干細胞，取分離得到的胎盤干細胞，調(diào)整密度為1×106cells/ml，進行活細胞計數(shù)，結(jié)果如表1所示。表1細胞活率24h48h96h實驗組193.85％89.58％82.15％實驗組294.98％90.14％81.24％對照組188.48％72.56％56.38％對照組292.23％85.26％63.24％實驗組1、2分離得到的胎盤間充質(zhì)干細胞整體的細胞活率要高于對照組1、2分離得到的胎盤間充質(zhì)干細胞。對照組1可能是因為培養(yǎng)基含量低，導(dǎo)致細胞營養(yǎng)成分不足；對照組2前24h細胞活率在90％以上，隨著時間推移，細胞活率出現(xiàn)了明顯的下降，可能是由于培養(yǎng)基含量高，細胞代謝偏旺盛，產(chǎn)生代謝廢物，致使溶液PH降低，影響細胞活性。以上對本發(fā)明的實施方式作了詳細說明，但本發(fā)明不限于所描述的實施方式。對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明原理和精神的情況下，對這些實施方式進行多種變化、修改、替換和變型，仍落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3