1.一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法,其特征在于,具體步驟如下:
步驟一,礁膜前處理:挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜,然后用滅菌海水沖洗2-6次,去除表面的附著物,培養(yǎng)于20℃,光強(qiáng)為100μmol/m2s,光照周期為12h/12h的無(wú)菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的營(yíng)養(yǎng)液;
步驟二,孢子放散:待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),使用無(wú)菌刀片將其切斷至5-10mm,用無(wú)菌純水沖洗3-8次,然后培養(yǎng)于25℃,光強(qiáng)為100μmol/m2s,光照周期為12h/12h,海水鹽度為10-15ppt無(wú)菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的營(yíng)養(yǎng)液;
步驟三,孢子收集:孢子大量迅速釋放后,使用拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過(guò)),吸取孢子,并置于無(wú)菌12或24孔的培養(yǎng)板,培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的營(yíng)養(yǎng)液的無(wú)菌人工海水,重復(fù)2-5次上述步驟,直至達(dá)到期望的孢子濃度,然后立即進(jìn)行24-36h的暗處理;
步驟四,集塊化法培養(yǎng):暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液,然后培養(yǎng)于20℃,光強(qiáng)為100μmol/m2s,光照周期為12h/12h的無(wú)菌海水中,無(wú)菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05%的營(yíng)養(yǎng)液,待藻體長(zhǎng)至1mm以上,用無(wú)菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗,使用目數(shù)為200-300目的篩網(wǎng)過(guò)濾,將藻苗轉(zhuǎn)至無(wú)菌三角瓶中,無(wú)菌三角瓶中存有添加0.05%營(yíng)養(yǎng)液的無(wú)菌海水,無(wú)菌三角瓶密封通氣培養(yǎng),每3天更換一次培養(yǎng)液,即可得到成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法,其特征在于,所述移液器采用高溫拉絲處理。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法,其特征在于,所述營(yíng)養(yǎng)液采用ES營(yíng)養(yǎng)液。