本發(fā)明涉及一種海洋藻類的培養(yǎng)方法，具體是一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

藻類是原生生物界一類真核生物，主要為水生，無維管束，能進(jìn)行光合作用。地球上的光合作用90％由藻類進(jìn)行，在地球早期的歷史上藻類在創(chuàng)造富氧環(huán)境中發(fā)揮重要作用。浮游的藻類是海洋食物鏈中非常重要的環(huán)節(jié)，所有高等水生生物的生存最終依靠藻類的存在。礁膜是食用價(jià)值很高的經(jīng)濟(jì)藻類，多生長于入?？凇\海區(qū)等低鹽度海水的巖石或石塊上，其中有性礁膜的生長溫度適應(yīng)范圍較廣，是養(yǎng)殖的主要品種，目前市場上現(xiàn)已有礁膜培育及栽培成功的報(bào)道，但未出現(xiàn)設(shè)施化養(yǎng)殖成功的案例。礁膜的人工養(yǎng)殖的關(guān)鍵技術(shù)在于礁膜孢子采集培育及礁膜的懸浮集塊化培養(yǎng)，目前國內(nèi)尚無完善的礁膜孢子采集培育技術(shù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

步驟一，礁膜前處理：挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜，然后用滅菌海水沖洗2-6次，去除表面的附著物，培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的營養(yǎng)液；

步驟二，孢子放散：待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長狀態(tài)時(shí)，使用無菌刀片將其切斷至5-10mm，用無菌純水沖洗3-8次，然后培養(yǎng)于25℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h，海水鹽度為10-15ppt無菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的營養(yǎng)液；

步驟三，孢子收集：孢子大量迅速釋放后，使用拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過)，吸取孢子，并置于無菌12或24孔的培養(yǎng)板，培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的營養(yǎng)液的無菌人工海水，重復(fù)2-5次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度，然后立即進(jìn)行24-36h的暗處理；

步驟四，集塊化法培養(yǎng)：暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液，然后培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中，無菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的營養(yǎng)液，待藻體長至1mm以上，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，使用目數(shù)為200-300目的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，無菌三角瓶中存有添加0.05％營養(yǎng)液的無菌海水，無菌三角瓶密封通氣培養(yǎng)，每3天更換一次培養(yǎng)液，即可得到成品。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：移液器采用高溫拉絲處理。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：營養(yǎng)液采用ES營養(yǎng)液。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明解決了礁膜渡夏過程中的保存問題；本發(fā)明的培養(yǎng)方法穩(wěn)定性高，可控性強(qiáng)，有效解決了大面積推廣所需種源問題；本發(fā)明的培養(yǎng)方法可緩解種質(zhì)退化問題，相比較傳統(tǒng)養(yǎng)殖，懸浮培養(yǎng)采收容易,可節(jié)省人力物力，使用效果好。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本專利的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。

實(shí)施例1

一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

步驟一，礁膜前處理：挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜，然后用滅菌海水沖洗2次，去除表面的附著物，培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟二，孢子放散：待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長狀態(tài)時(shí)，使用無菌刀片將其切斷至5mm，用無菌純水沖洗4次，然后培養(yǎng)于25℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h，海水鹽度為10ppt無菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟三，孢子收集：孢子大量迅速釋放后，由于孢子的正/負(fù)趨光性，孢子會(huì)集中于一側(cè)，使用高溫拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過)，吸取孢子，并置于無菌12孔的培養(yǎng)板，培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液的無菌人工海水，重復(fù)2次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度，然后立即進(jìn)行24h的暗處理；

步驟四，集塊化法培養(yǎng)：暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液，然后培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中，無菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液，待藻體長至2mm，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，使用目數(shù)為200目的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，無菌三角瓶中存有添加0.05％ES營養(yǎng)液的無菌海水，無菌三角瓶密封通氣培養(yǎng)，每3天更換一次培養(yǎng)液，即可得到成品。

實(shí)施例2

一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

步驟一，礁膜前處理：挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜，然后用滅菌海水沖洗3次，去除表面的附著物，培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟二，孢子放散：待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長狀態(tài)時(shí)，使用無菌刀片將其切斷至8mm，用無菌純水沖洗6次，然后培養(yǎng)于25℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h，海水鹽度為12ppt無菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟三，孢子收集：孢子大量迅速釋放后，由于孢子的正/負(fù)趨光性，孢子會(huì)集中于一側(cè)，使用高溫拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過)，吸取孢子，并置于無菌24孔的培養(yǎng)板，培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液的無菌人工海水，重復(fù)4次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度，然后立即進(jìn)行28h的暗處理；

步驟四，集塊化法培養(yǎng)：暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液，然后培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中，無菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液，待藻體長至1mm，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，使用目數(shù)為240目的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，無菌三角瓶中存有添加0.05％ES營養(yǎng)液的無菌海水，無菌三角瓶密封通氣培養(yǎng)，每3天更換一次培養(yǎng)液，即可得到成品

實(shí)施例3

一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

步驟一，礁膜前處理：挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜，然后用滅菌海水沖洗2次，去除表面的附著物，培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟二，孢子放散：待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長狀態(tài)時(shí)，使用無菌刀片將其切斷至10mm，用無菌純水沖洗8次，然后培養(yǎng)于25℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h，海水鹽度為15ppt無菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟三，孢子收集：孢子大量迅速釋放后，由于孢子的正/負(fù)趨光性，孢子會(huì)集中于一側(cè)，使用高溫拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過)，吸取孢子，并置于無菌24孔的培養(yǎng)板，培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液的無菌人工海水，重復(fù)5次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度，然后立即進(jìn)行36h的暗處理；

步驟四，集塊化法培養(yǎng)：暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液，然后培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中，無菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液，待藻體長至1.5mm，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，使用目數(shù)為300目的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，無菌三角瓶中存有添加0.05％ES營養(yǎng)液的無菌海水，無菌三角瓶密封通氣培養(yǎng)，每3天更換一次培養(yǎng)液，即可得到成品

實(shí)施例4

一種礁膜孢子集塊化的培養(yǎng)方法，具體步驟如下：

步驟一，礁膜前處理：挑選顏色健康并且藻體完整的礁膜，然后用滅菌海水沖洗2次，去除表面的附著物，培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟二，孢子放散：待培養(yǎng)礁膜幾乎處于同一生長狀態(tài)時(shí)，使用無菌刀片將其切斷至5mm，用無菌純水沖洗6次，然后培養(yǎng)于25℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h，海水鹽度為15ppt無菌人工海水中并且添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液；

步驟三，孢子收集：孢子大量迅速釋放后，由于孢子的正/負(fù)趨光性，孢子會(huì)集中于一側(cè)，使用高溫拉絲后的移液器(針孔允許孢子通過)，吸取孢子，并置于無菌12孔的培養(yǎng)板，培養(yǎng)板中添加含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液的無菌人工海水，重復(fù)3次上述步驟，直至達(dá)到期望的孢子濃度，然后立即進(jìn)行27h的暗處理；

步驟四，集塊化法培養(yǎng)：暗處理后的孢子立即更換新鮮培養(yǎng)液，然后培養(yǎng)于20℃，光強(qiáng)為100μmol/m2s，光照周期為12h/12h的無菌海水中，無菌海水中添加有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05％的ES營養(yǎng)液，待藻體長至1mm以上，用無菌解剖刀輕輕刮取附著的藻苗，使用目數(shù)為300目的篩網(wǎng)過濾，將藻苗轉(zhuǎn)至無菌三角瓶中，無菌三角瓶中存有添加0.05％ES營養(yǎng)液的無菌海水，無菌三角瓶密封通氣培養(yǎng)，每3天更換一次培養(yǎng)液，即可得到成品。

上面對本專利的較佳實(shí)施方式作了詳細(xì)說明，但是本專利并不限于上述實(shí)施方式，在本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所具備的知識(shí)范圍內(nèi)，還可以在不脫離本專利宗旨的前提下做出各種變化。