本發(fā)明涉及鱉的多倍體繁育方法，具體涉及鱉三倍體純系的高效育成方法。

背景技術(shù)：

鱉，以中華鱉為優(yōu)，又稱團魚、甲魚等。隸屬爬行綱、龜鱉目、鱉科，常見的為二倍體，鱉肉味道鮮美，營養(yǎng)豐富，有清熱養(yǎng)陰，平肝熄風(fēng)，軟堅散結(jié)等作用，二倍體生長緩慢，養(yǎng)殖周期達4-5年。因三倍體的不育特征，使鱉在生長速度、抗病性、肉質(zhì)等方面表現(xiàn)出更為顯著的優(yōu)勢?，F(xiàn)有技術(shù)中，要獲得三倍體不育鱉，最快捷有效的方法是通過四倍體鱉與二倍體鱉倍間雜交獲得，那么就需要建立遺傳穩(wěn)定、純度極高的四倍體鱉純系。但在鱉的遺傳育種中，到目前為止，不僅未見四倍體全雄鱉高效育成的報道，更未見用全雄四倍體與二倍體母本回交的先例。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對上述現(xiàn)有技術(shù)存在的空缺，本發(fā)明的目的是提供一種方法穩(wěn)定、育成種群純度高的鱉三倍體純系的高效育成方法。

為達到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

鱉三倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟：

（1）他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備：取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉常規(guī)飼養(yǎng)飼料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為8～10g/500g飼料，待用；

（2）投喂：在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對母鱉進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天三次，早上8：00每100g母鱉投喂15～18g，中午12點每100g母鱉投喂10～15g，下午6：00每100g母鱉投喂5～10g，直至產(chǎn)蛋；

（3）冷休克處理：在一次卵裂時，采用冷休克的方法，把步驟（2）中的受精蛋放入溫度為-1～1℃的冷水箱中，持續(xù)時間為3～5min，取出待用；

（4）雌激素抑制劑溶液的配制：將氯米芬和睪酮一起溶于80%～90%的乙醇中，再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為180～250mg/l，睪酮的濃度為100～150mg/l；

（5）用步驟（4）所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對經(jīng)過步驟（3）處理的受精蛋進行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為8～15ml，保持孵化器的溫度28～32℃、濕度40～80%，進行孵化；從而獲得鱉的雄性四倍體純系；

（6）取步驟（5）的雄性四倍體作為父本，取普通二倍體作為母本，采用回交的方式，獲得100%三倍體。

本發(fā)明的優(yōu)點：1、本發(fā)明中對母本進行添加他莫昔芬飼料投喂，起到抑制DNA分裂和促雄性的雙重作用的同時，將受精蛋第一次卵裂的時間推遲了3～5min，并提高所有受精蛋第一次卵裂的同步程度（可達99%），為操作下一步提供時間保障和奠定染色體加倍基礎(chǔ)；2、采用冷休克處理受精蛋，進一步阻礙了染色體的分離，加強了四倍體的形成機率；3、雌激素抑制劑溶液噴灑，再一次強化與保證其雄性的轉(zhuǎn)化率；4、用純系的雄性四倍體與原有的雌性二倍體回交，有效保證了三倍體的純度。因而通過此方法，可獲得100%的三倍體純系，提高了三倍體的育成率與出苗率，減少了育種與選種的麻煩，更主要是對自然水產(chǎn)品種種質(zhì)和生態(tài)環(huán)境無污染。

具體實施方式

現(xiàn)結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明作進一步描述。

實施例一

鱉三倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟：

（1）他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備：取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉魚常規(guī)飼養(yǎng)飼料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為10g/500g飼料，待用；

（2）投喂：在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對母本進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天三次，早上8：00每100g鱉魚投喂15g喂養(yǎng)料，中午12：00每100g鱉魚投喂15g喂養(yǎng)料，下午6：00每100g鱉魚投喂10g喂養(yǎng)料，直至產(chǎn)蛋；

（3）冷休克處理：在一次卵裂時，采用冷休克的方法，把步驟（2）中的受精蛋放入溫度為-1℃的冷水箱中，持續(xù)時間為5min，取出待用；

（4）雌激素抑制劑溶液的配制：將氯米芬和睪酮一起溶于90%的乙醇中，再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為250mg/l，睪酮的濃度為150mg/l；

（5）用步驟（4）所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對經(jīng)過步驟（3）處理的受精蛋進行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為8ml，保持孵化器的溫度32℃、濕度80%，進行孵化；從而獲得鱉的雄性四倍體純系；

（6）取步驟（5）的雄性四倍體作為父本，取普通二倍體作為母本，采用回交的方式，獲得100%三倍體。

實施例二

鱉三倍體純系的高效育成方法，包括如下步驟：

（1）他莫昔芬喂養(yǎng)料的配備：取純度為95%以上的他莫昔芬粉劑，加入到鱉魚常規(guī)飼養(yǎng)飼料中，制成喂養(yǎng)料，其中他莫昔芬含量為8g/500g飼料，待用；

（2）投喂：在母鱉產(chǎn)蛋前，按常規(guī)飼料投喂方法對母本進行投喂他莫昔芬喂養(yǎng)料，每天三次，早上8：00每100g鱉魚投喂18g，中午12：00每100g鱉魚投喂15g喂養(yǎng)料，下午6：00每100g鱉魚投喂10g；

（3）冷休克處理：在一次卵裂時，采用冷休克的方法，把步驟（2）中的受精蛋放入溫度為0℃的冷水箱中，持續(xù)時間為3min，取出待用；

（4）雌激素抑制劑溶液的配制：將氯米芬和睪酮一起溶于80%的乙醇中，再加蒸餾水配制成雌激素抑制劑溶液，其中雌激素抑制劑溶液中氯米芬的濃度為230mg/l，睪酮的濃度為140mg/l；

（5）用步驟（4）所制備的雌激素抑制劑溶液，放入噴霧器中，對經(jīng)過步驟（3）處理的受精蛋進行均勻噴霧，用量每100只受精蛋為15ml，保持孵化器的濕度60%、溫度28℃，進行孵化；從而獲得鱉的雄性四倍體純系；

（6）取步驟（5）的雄性四倍體作為父本，取普通二倍體作為母本，采用回交的方式，獲得100%三倍體。

上述兩個實施例僅為本發(fā)明的優(yōu)選方案之二，并不能限制本發(fā)明的保護范圍，任意與本發(fā)明等同或相似的技術(shù)手段視為本發(fā)明的保護范圍。以下附上本發(fā)明部分處理方式及結(jié)果統(tǒng)計。

附：鱉三倍體育成結(jié)果統(tǒng)計

注：上述結(jié)果是在冷休克3min，孵化器的濕度60%、溫度28℃的條件下所取得的結(jié)果。