本申請主張2014年10月16日申請的韓國專利申請第10-2014-0140038號及2015年09月23日申請的韓國專利申請第10-2015-0134926號作為優(yōu)先權，上述說明書均為本申請的參考文獻。

本發(fā)明涉及利用對蜜蜂花(melissaofficinalis)精油或巴戟提取物進行分餾純化處理的化合物及其衍生物的用于螨蟲的天然殺螨劑和/或識別標記。

背景技術：

衛(wèi)生害蟲分布在人類的生活周邊，一直以來被視為最頭痛的問題。尤其，在因感染性疾病的媒介害蟲而引起的人類的疾病上，由于在人類與媒介害蟲之間具有流行病學相關性，因此實際上難以完全去除這些害蟲。因此，在衛(wèi)生害蟲領域中，有效控制這些感染性疾病的媒介害蟲的方法的開發(fā)是被受注目的。

全球性蔓延的過敏性疾病是由生活方式引起的，尤其，在現(xiàn)代化的室內居住環(huán)境中，隨著空氣中被傳播的過敏原的出現(xiàn)頻度的增加，發(fā)病率也隨著增加。以空氣作為媒介的過敏原有螨蟲、動物毛、花粉等，據(jù)了解這些抗原與過敏的發(fā)病具有密切的關系。據(jù)研究報告，若一旦接觸到這些抗原，則鼻炎、哮喘及過敏性皮炎的發(fā)病率會增加。螨蟲作為引發(fā)過敏性疾病的主要媒介抗原，已知的主導品種有粉塵螨(dermatophagoidesfarinae)、屋塵螨(d.pteronyssinus)及腐食酪螨(tyrophagusputrescentiae)。為了去除這些螨蟲，實施了調節(jié)棲息地環(huán)境的物理方法，但由于存在很多在生活適用方面上的限制性的條件，因此難以期待完善的防治。出于這些原因，主要使用利用如苯甲酸芐酯(benzylbenzoate)或二乙基甲苯酰胺(diethyl-m-toluamide，deet)等的化學物質的螨蟲防治方法。由于這種化學防治在處理方面上藥效持續(xù)時間短，因此需要進行定期處理，而且導致因反復的處理而產生的抵抗性個體的出現(xiàn)及環(huán)境中的殘留等。并且，因被防治的螨蟲尸體上殘留有過敏性抗原因子，而實際上難以完全去除。

最近被受關注的謀殺螨作為硬蜱科的長角血蜱(haemophysalislongicorni)，主要發(fā)現(xiàn)在5～8月份的韓國國內的全區(qū)域。據(jù)了解，通常寄生在棲息在野外的動物中，且喜歡濕地。尤其，長角血蜱屬于致死率達到10％左右的發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒(severefeverwiththrombocytopeniasyndromevirus，sftsv)的媒介害蟲，而且被發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒感染的長角血蜱的比率占0.5％。然而至今為止還未開發(fā)出針對發(fā)熱伴血小板減少綜合征的疫苗或抗病毒藥物，因此最好的方法為控制這些媒介害蟲本身，但長角血蜱的宿主(野生鼠、貓、鳥等)存在多樣性，而且具有分布在韓國國內的全區(qū)域的特性，因此難以完全控制。因此，迫切需要有關能夠管理長角血蜱的出現(xiàn)并控制接觸的管理系統(tǒng)，但針對長角血蜱的殺螨作用研究還未完善。

近年來，正進行從已知的化合物中揭示新的活性的研究。這些化合物具有多樣的生理活性，而且安全性已被驗證，因此可以用作對于粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱的用于綜合性的螨蟲的天然殺螨劑來所應用。因此很多研究人關注于已知的化合物上的新功能鑒定。

尤其，塵螨(粉塵螨/屋塵螨)、腐食酪螨及長角血蜱各自具有不同的防治機制，因此對塵螨具有殺螨功能的殺螨劑，并未對腐食酪螨或長角血蜱具有殺螨功能的論文已在多處發(fā)表過。因此，有必要開發(fā)對各類螨蟲具有殺螨功能的天然殺螨劑。

技術實現(xiàn)要素：

技術問題

本發(fā)明的目的在于，提供以過敏性及發(fā)熱伴血小板減少綜合征的抗原來起作用的、對塵螨、長角血蜱等的螨蟲具有殺螨活性的生物材料及衍生化合物的用于螨蟲的天然殺螨劑。并且，本發(fā)明的目的在于，提供通過引導上述螨蟲的顏色變化來示出顯示活性的螨蟲識別標記。

解決問題的方案

本發(fā)明涉及用于螨蟲的天然殺螨劑，為了解決上述技術問題，而提供包含由以下化學式1或化學式2表示的化合物作為有效成分的用于螨蟲的天然殺螨劑。

化學式1：

在上述化學式1中，r¹可以為c1～c3的直鏈烷基、c3～c5的支鏈烷基或氫，上述r²可以為c1～c3的直鏈烷基、c3～c5的支鏈烷基或氫，上述a、b及c可以分別為單鍵或雙鍵。

化學式2：

在上述化學式2中，r¹為c1～c3的直鏈烷基、c3～c5的支鏈烷基，上述r²為-oh，上述n及m滿足0＜n+m≤4，n為0～4的整數(shù)，m為0～3的整數(shù)。

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，在上述化學式1中，r¹可以為氫或c1～c2的直鏈烷基，在化學式1中，r²可以為氫或c1～c2的直鏈烷基，在化學式2中，r¹可以為c1～c2的直鏈烷基，上述n可以為0～3的整數(shù)，m可以為0～2的整數(shù)。

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，在上述化學式1中，r¹可以為氫或甲基(ch3)，在化學式1中，r²為氫或甲基(ch3)。

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑可以為選自由以下化學式3表示的3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛、由化學式4表示的辛醛、由化學式5表示的2-辛醛、由化學式6表示的2，4-辛二烯醛及由化學式7表示的3，7-二甲基-6-辛醛組成的組中的一種。

化學式3：

化學式4：

化學式5：

化學式6：

化學式7：

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，其特征在于，由上述化學式1及化學式3至7表示的化合物可以來源于蜜蜂花精油提取物的分餾純化物，由化學式2表示的化合可以物來源于巴戟提取物的分餾純化物。

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，上述用于螨蟲的天然殺螨劑可以對選自由粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨、粗腳粉螨(tyroglyphusputrescentiae)及長角血蜱組成的組中的一種以上的螨蟲具有殺螨作用。并且，尤其其特征在于，可以對長角血蜱具有優(yōu)秀的殺螨作用。

本發(fā)明提供包含選自由以下化學式3、化學式5、化學式6及化學式8表示的化合物中的一種以上作為有效成分，并具有殺螨效果的用于螨蟲的識別標記。

化學式3：

化學式5：

化學式6：

化學式8：

在上述化學式2中，r¹為c1～c5的直鏈烷基，c3～c5的支鏈烷基，n為2～3的整數(shù)。

作為本發(fā)明的優(yōu)選一實施例，其特征在于，上述識別標記對選自由粉塵螨、屋塵螨、粗腳粉螨及腐食酪螨組成的組中的一種以上的螨蟲具有識別效果。

本發(fā)明提供用于螨蟲的天然殺螨劑的制備方法，其特征在于，利用硅膠層析及高效液相色譜對得到濃縮的蜜蜂花精油或巴戟提取物進行分餾純化工序，來制備分餾純化物，上述分餾純化物包含由以下化學式1或化學式2表示的化合物。

并且，本發(fā)明提供包含蜜蜂花精油或巴戟提取物作為有效成分的用于殺螨及標記的組合物。

發(fā)明的效果

根據(jù)本發(fā)明的天然殺螨劑為與以往的化學防治劑不同，是具有天然成分的殺螨劑，并且以來源于蜜蜂花精油或巴戟提取物的成分作為有效成分的天然殺螨劑不僅對塵螨及長角血蜱等的螨蟲具有優(yōu)秀的殺螨活性，而且具有可通過引導螨蟲的顏色變化，來容易進行識別的顯示活性。因此，可通過去除除掉作為主要過敏性抗原的塵螨之后顏色變化的螨蟲尸體，來預防由此引起的二次感染。

附圖說明

圖1為以往的用于螨蟲的殺螨劑(deet)和被蜜蜂花(蜜蜂花)精油殺掉的螨蟲的光學顯微鏡圖片。

圖2為利用以往的塵螨的化學防治劑的二乙基甲苯酰胺(deet)來去除螨蟲(粉塵螨、屋塵螨)之后拍攝的光學顯微鏡圖片。

圖3為利用本發(fā)明的殺螨劑來去除螨蟲(粉塵螨，屋塵螨)之后拍攝的光學顯微鏡圖片。

具體實施方式

本發(fā)明中所使用的術語“c1”、“c2”等指碳原子數(shù)，例如，“c1～c3的烷基”指碳原子數(shù)為1～3的烷基。

由表示的化學式中，當用“r¹為獨立的氫原子、甲基或乙基，a為1～3。”來表示取代基時，在a為3的情況下，指具有多個r¹，即r¹的取代基存在3個，這些多個r¹各個相同，或相互不同，各個r¹可以均為氫原子、甲基或乙基，或各個r¹可以均為不同，即，r¹中的一個可以為氫原子，另一個可以為甲基，又一個可以為乙基。并且，上述內容作為解釋本發(fā)明中表示的取代基的一例，其他形式的類似取代基也應該用相同的方法來解釋。

作為本發(fā)明中所使用的術語的用于螨蟲的天然殺螨劑，指為了殺滅螨蟲類而所使用的藥劑。作為主要的用于螨蟲的殺螨劑還有焦磷酸四乙酯、八甲磷、內吸磷及甲基內吸磷等的有機磷殺蟲劑、dn藥劑、乙醋殺螨醇、二氯苯三氯乙醇、氟代乙酰胺及硒酸鈣等。

以下，對本發(fā)明進行更詳細的說明。

本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑，其特征在于，可以包含由以下化學式1或化學式2表示的化合物。

化學式1：

在上述化學式1中，r¹為c1～c3的直鏈烷基、c3～c5的支鏈烷基或氫，上述r²為c1～c3的直鏈烷基、c3～c5的支鏈烷基或氫，上述a、b及c分別為單鍵或雙鍵。

作為本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑的成分，具體地，上述r¹可以為氫或c1～c2的直鏈烷基，r²可以為氫或c1～c2的直鏈烷基，更優(yōu)選地，r¹可以為氫或甲基(ch3)，r²可以為氫或甲基(ch3)。

更具體地，本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑的成分可以為選自由以下的化學式3表示的3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛、由化學式4表示的辛醛、由化學式5表示的2-辛醛、由化學式6表示的2，4-辛二烯醛及由化學式7表示的3，7-二甲基-6-辛醛組成的組中的一種。

化學式3：3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛(3，7-dimethyl-2，6-octadienal)

化學式4：辛醛(octanal)

化學式5：2-辛醛(2-octenal)

化學式6：2，4-辛二烯醛(2，4-octadienal)

醛(3，7-dimethyl-6-octenal)

化學式2：

在上述化學式2中，r¹為c1～c5的直鏈烷基或c3～c5的支鏈烷基，優(yōu)選為c1～c2的直鏈烷基，更優(yōu)選為甲基。并且，上述r²為-oh。并且，上述n及m滿足0＜n+m≤4，優(yōu)選地，滿足2≤n+m≤3，并且，此時，上述n為0～4的整數(shù)，優(yōu)選為0～3的整數(shù)。并且，上述m為0～3的整數(shù)，優(yōu)選為0～2的整數(shù)。

本發(fā)明的螨蟲殺螨劑成分中的上述有效成分具體的，可以包含選自由上述化學式1表示的化合物中的一種以上，優(yōu)選地，可以包含選自由中的一種以上，更優(yōu)選地，可以包含選自由中的一種以上。

本發(fā)明的由上述化學式1、5及6表示的化合物可以來源于蜜蜂花精油提取物的分餾純化物，由化學式8表示的化合物可以來源于巴戟提取物的分餾純化物。

本發(fā)明中所提供的用于螨蟲的天然殺螨劑，其特征在于，可以使用于所有的螨蟲類，但優(yōu)選地，對選自由粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨、粗腳粉螨及長角血蜱組成的組中的一種以上的螨蟲具有殺螨作用，其中，尤其對長角血蜱具有優(yōu)秀的殺螨作用。

在本發(fā)明的一實施例中，利用熏蒸法測定了蜜蜂花精油的殺螨作用，結果確認出：多種螨蟲類中屋塵螨和長角血蜱的殺螨作用最顯著(參照表2)，在利用接觸法的蜜蜂花精油的殺螨作用中確認出：對長角血蜱的殺螨作用最顯著(參照表3)。

可將本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑作為選自水劑、乳劑、涂布劑、煙熏劑、熏劑、顆粒劑及固體劑中的一種劑型來使用，優(yōu)選地，可作為選自水劑、涂布劑及熏劑中的一種劑型來使用。

并且，本發(fā)明不僅可以用作上述描述的用于螨蟲的天然殺螨劑來使用，而且可以用作螨蟲的識別標記來使用，在識別標記的情況下，可以包含由以下化學式3、化學式5、化學式6及化學式8表示的化合物作為有效成分。

化學式3：

化學式5：

化學式6：

化學式8：

在上述化學式2中，r¹為c1～c5的直鏈烷基或c3～c5的支鏈烷基，優(yōu)選為c1～c2的直鏈烷基，更優(yōu)選為甲基。并且，上述n為2～3的整數(shù)，優(yōu)選為2的整數(shù)。

更具體地，本發(fā)明的識別標記的成分可以為選自由以下化學式3中表示的3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛、化學式5中表示的2-辛醛及化學式6中表示的2，4-辛二烯醛組成的組中的一種。并且，在化學式8中，上述化學式8可以為

在本發(fā)明的用于螨蟲的識別標記中，與上述識別標記相接觸的螨蟲被去除的同時，出現(xiàn)顏色變化現(xiàn)象，變?yōu)楹谏罨疑螯S色。在用化合物來處理螨蟲時的顏色變化效果示出在本發(fā)明的表5及圖1至3中。

本發(fā)明的由上述化學式3、化學式5及化學式6表示的化合物可以來源于蜜蜂花精油提取物的分餾純化物，由上述化學式8表示的化合物可以為對巴戟提取物進行分餾純化的純化物。

本發(fā)明的識別標記對螨蟲類均具有識別效果，優(yōu)選地，對選自由粉塵螨、屋塵螨、粗腳粉螨及腐食酪螨組成的組中的一種的螨蟲具有識別效果。

另一方面，在長角血蜱的情況下，與其他螨蟲相比尺寸顯著大，顏色為黑色，因此不經過標記也易于被發(fā)現(xiàn)，而且可容易地識別。

并且，本發(fā)明提供包含蜜蜂花精油或巴戟提取物作為有效成分的用于殺螨及標記的組合物。

在本發(fā)明的一實施例中，對對照組的deet進行處理的組中螨蟲不顯色，但，對實驗組的蜜蜂花精油進行處理時，螨蟲呈黃色，由此確認出：本發(fā)明的化合物能夠起到更易于識別螨蟲的標記的作用(參照圖1至圖3)。

在制備這些本發(fā)明的用于螨蟲的天然殺螨劑和/或識別標記的方法中，對蜜蜂花精油或巴戟提取物進行分餾純化可以制備出由殺螨成分的上述化學式1和/或化學式2表示的化合物。更具體地，其特征在于，通過如下的步驟來制備用于螨蟲的天然殺螨劑，上述步驟包括：第一步驟，利用作為提取溶劑的己烷來從蜜蜂花精油或巴戟粉末以及水的混合物中制備蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物；第二步驟，對上述提取物進行干燥及過濾，并分離出提取溶劑和精油物質，之后通過減壓濃縮來制備得到濃縮的提取物；第三步驟，通過利用硅膠層析來對得到濃縮的提取物進行分餾純化處理，來獲得8個分餾層；第四步驟，通過利用硅膠層析來對上述8個分餾層中對螨蟲具有殺螨活性的分餾層成分進行分餾純化處理，來再度獲得5個分餾層；第五步驟，利用高效液相色譜從再度獲得的上述5個分餾層中對螨蟲具有殺螨活性的分餾層成分中再度獲得3個分餾層；以及第六步驟，通過對再度獲得的上述3個分餾層中對螨蟲具有殺螨活性的分餾層成分進行測定，來獲得蜜蜂花精油提取物或巴戟提取物的分餾純化物。

上述第一步驟的巴戟粉可以通過利用蒸餾水充分清洗巴戟之后，經過干燥并研磨來制備。并且，在上述第一步驟中，可以通過利用水蒸氣蒸餾法在75℃～85℃溫度下，進行5～7小時的提取工序，優(yōu)選地，在78℃～83℃溫度下，進行5小時30分鐘～6小時30分鐘的提取工序，來制備出巴戟提取物。

并且，上述第一步驟中的蜜蜂花精油可以通過利用蒸餾來提取蜜蜂花的整株草，并利用其次的提取條件連續(xù)提取來制備(提取溫度為75℃、提取時間為5小時、提取溶劑為己烷(hexane)、提取容量為200ml)。

上述第二步驟的減壓濃縮可以在30℃～40℃溫度下，優(yōu)選地，在32℃～38℃溫度下進行，此時，若因減壓濃縮溫度小于30℃而處于太低的狀態(tài)，則可以產生無法進行減壓濃縮過程的問題，若超過40℃，則可以產生引起提取物內的有效成分的退化的問題。

并且，可以通過利用己烷及乙酸乙酯混合有機溶劑來進行基于上述第三步驟及第四步驟的硅膠層析的分餾純化處理。

并且，可以利用有機溶劑的甲醇來進行基于上述第五步驟的高效液相色譜的分餾純化處理。

以下，對本發(fā)明進行詳細說明。

為了提高本發(fā)明的理解度，而揭示具體的實施例。但以下實施例僅作為更容易地理解本發(fā)明而所提供，本發(fā)明的范圍并不局限于此。

實施例1

1-1.蜜蜂花精油提取

本發(fā)明中所使用的蜜蜂花整株草是利用蒸餾水來清洗并干燥之后，經過研磨過程之后的產物。將被研磨的蜜蜂花整株草(100g)和1200ml的蒸餾水，注入于3000ml的圓底燒瓶之后，利用水蒸氣蒸餾法(steamdistillationextraction，sde)連續(xù)進行了提取。本發(fā)明中所使用的提取條件如下(提取溫度為75℃、提取時間為5小時、提取溶劑為己烷(hexane)、提取容量為200ml)。上述的蜜蜂花提取物是利用無水硫酸鎂、濾紙及減壓濃縮機來去除蜜蜂花精油和雜質之后，經過減壓濃縮保存在冰箱。

1-2.巴戟提取物的準備

將巴戟(morindaofficinalis)用1000ml的蒸餾水清洗3次之后，在陰涼且通風的條件下，干燥48小時以上并研磨。在被研磨的150g的試料中，注入1500ml的蒸餾水之后，利用水蒸氣蒸餾法在80℃溫度下提取了6小時，此時，作為提取溶劑使用了300ml的己烷。上述的提取物是利用無水硫酸鎂進行干燥之后，利用濾紙分離提取溶劑和精油物質之后，在35℃溫度下，經過減壓濃縮之后，密封并保管在冰箱。

實施例2

2-1.蜜蜂花精油的gc-ms分析

為了確認包含在上述實施例1中所提取的蜜蜂花精油中的揮發(fā)性組合物，而將10mg的蜜蜂花精油溶解在1ml的己烷中，并離心分離之后，過濾上清液之后利用gc/ms進行了分析。gc/ms的分析條件如下。在柱為vf-5ms(30mm×0.25mm×0.25mm)、載氣(carriergas)為氦(1ml/min)、注入(injection)溫度為250℃、烘箱溫度為50～250℃、上升溫度為3℃、注入容量為1μl、注入模式為20:1的分餾比(splitratio)的條件下進行了成分分析，利用質量選擇檢測器(massselectivedetector，msd)，在質量范圍(massrange)為28-550、掃描(scan)條件下進行了成分分析，其結果在表1中示出。

表1

蜜蜂花精油的gc-ms分析結果

從表1中，確認了包含在蜜蜂花精油的各種化合物，其中3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛的含量最高，達到43.37％。由此，對包含蜜蜂花精油和在蜜蜂花精油中含量最高的3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛在內的、與其具有類似的結構的化合物(辛醛、2-辛醛、2，4-辛二烯醛、3，7-二甲基-6-辛醛)的殺螨活性進行了評價。

2-2.巴戟提取物的分餾純化及結構鑒定

對包含在從上述實施例1中提取的巴戟提取物的殺螨活性化合物進行了分餾純化。

(1)利用色譜法的分餾純化

為了對螨蟲的巴戟的有效成分進行分餾純化，而實施了硅膠層析和高效液相色譜。首先，在硅膠層析中，作為洗脫溶劑階段性的比率來使用了己烷和乙酸乙酯的混合有機溶劑，每分鐘分離提取5ml，獲得了8個分餾層(mo1～mo8)。對這些8個分餾層，測定出對各個塵螨和長角血蜱的殺螨活性的結果，在mo3分餾層中示出了優(yōu)秀的殺螨活性，從mo3分餾層中，利用將己烷和乙酸乙酯以8:2的比率來混合的洗脫溶劑來實施了硅膠層析，其結果獲得5個分餾層(mo31～mo35)，之后通過生物測定，從mo32分餾層確認出：對螨蟲具有優(yōu)秀的殺螨活性。

其次，為了從利用上述硅膠層析得到分離的mo32分餾層中純化單一物質的殺螨性組合物，而實施了高效液相色譜。每分鐘流出3.5ml的甲醇有機溶劑，在264nm的波長下，利用紫外線(uv)檢測機檢測出3個分餾層(mo321～mo323)。在各個分餾層中，實施了對于塵螨及長角血蜱的殺螨活性測定，其結果確認出對mo322分餾層具有優(yōu)秀的殺螨力。

(2)巴戟有效成分的結構鑒定

為了了解從上述巴戟提取物中被分餾純化的mo322分餾層的化學結構，而利用質譜儀測定了分子量，并根據(jù)¹h-nmr(600mhz)和¹³c-nmr(150mhz)實施了頻譜分析。由此確認出：從巴戟提取物中被分餾純化的有效成分為由以下化學式2-1表示的化合物。

ei-ms(70ev)m/z:m⁺120；

¹h-nmr(cdcl3，600mhz):δ2.48(s，3h)，7.26-7.44(d，j＝7.2hz，1h)，7.45-7.59(t，j＝5.6hz，1h)，7.61-7.75(t，j＝5.6hz，1h)，7.77-7.90(d，j＝5.2hz，1h)，and10.36(s，1h)；

¹³c-nmr(cdcl3，150mhz):δ18.6(ch3)，191.0(ch)，126.2(ch)，131.9(ch)，13.1.9(ch)134.4(c)，134.4(ch)，139.6(c)。

化學式2-1：

實施例3

對螨蟲的蜜蜂花精油提取物的殺螨活性評價

(1)實驗螨蟲

對粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱進行了有關殺螨作用的測定，粉塵螨、屋塵螨及腐食酪螨是從2004年2月4日韓國首爾大學校農生命大學農生物學科安勇俊教授研究室中購買的，在過去10年中，在沒有受到任何殺螨劑的條件下，在26℃的溫度、70％的相對濕度、沒有受到外部環(huán)境的條件下，進行了飼養(yǎng)。長角血蜱是在位于在韓國全羅北道完州郡的水庫周邊上采取的，之后進行了有關殺螨作用的測定。

(2)對實驗螨蟲的殺螨作用測定

在本發(fā)明的殺螨作用測定中，利用熏蒸法和接觸法來對粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱的殺螨作用進行了測定。以初步實驗為基準設定了初始劑量，并稀釋初始劑量(104μg/cm²)的試料，并用濾紙?zhí)幚?0μl之后，在室溫條件下，干燥了20分鐘之后開始使用。作為陰性對照區(qū)僅處理了50μl的丙酮。熏蒸法是在陪替氏培養(yǎng)皿的蓋上附著經過處理的濾紙，接觸法是在陪替氏培養(yǎng)皿的底部附著經過處理的濾紙，之后分別接種25只螨蟲，并在26℃溫度、70％的相對溫度、黑暗條件下的恒溫箱中放置24小時之后，利用光學顯微鏡觀察了螨蟲。當螨蟲受到刺激時沒有動靜的，則被認定已死亡，各個測定反復實施了5次。以下，在表2、表3及表4中用ld50(半數(shù)致死劑量)值來對殺螨活性進行了比較。

表2

利用熏蒸法的蜜蜂花精油、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醇及其衍生物的殺螨作用的測定

上述表2示出利用熏蒸法測定對實施例1的蜜蜂花精油、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛及其衍生物的粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱的殺螨作用的結果。其結果，除了辛醛之外的蜜蜂花精油(2.06μg/cm²、1.42μg/cm²、3.25μg/cm²及1.97μg/cm²)、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛及其衍生物對粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱具有優(yōu)秀的殺螨作用，比對照區(qū)的deet(27.23μg/cm²、25.47μg/cm²、31.47μg/cm²及49.72μg/cm²)的殺螨作用優(yōu)秀。相反，辛醛對腐食酪螨沒有殺螨作用。

表3

利用接觸法的蜜蜂花精油、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醇及其衍生物的殺螨作用的測定

上述表3示出利用接觸法測定實施例1的蜜蜂花精油及3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛及其衍生物的粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱的殺螨作用的結果。其結果，除了辛醛之外的蜜蜂花精油(4.02μg/cm²、3.34μg/cm²、7.34μg/cm²及0.33μg/cm²)及3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛及其衍生物對粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨及長角血蜱具有優(yōu)秀的殺螨作用，比對照區(qū)的deet(20.63μg/cm²、15.13μg/cm²、17.26μg/cm²及43.46μg/cm²)的殺螨作用優(yōu)秀2.35～132.09倍。相反，辛醛對腐食酪螨沒有殺螨作用。

表4

利用熏蒸法及接觸法的、來源于蜜蜂花精油的化合物的長角血蜱殺螨作用的測定

上述表4示出利用熏蒸法及接觸法來測定包含在實施例2的蜜蜂花精油的3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛及其衍生物(辛醛，2-辛醛，2，4-辛二烯醛及3，7-二甲基-6-辛醛)的長角血蜱的殺螨作用的結果。在熏蒸法中，2-辛醛(0.25μg/cm²)的殺螨作用最優(yōu)秀，其次，按照3，7-二甲基-6-辛醛(0.49μg/cm²)、2，4-辛二烯醛(0.86μg/cm²)、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛(0.99μg/cm²)、辛醛(6.58μg/cm²)的順序示出了殺螨作用。并且，在接觸法中，2-辛醛(0.12μg/cm²)的殺螨作用也最高，其次，按照3，7-二甲基-6-辛醛(0.25μg/cm²)、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛(0.33μg/cm²)、2，4-辛二烯醛(0.53μg/cm²)、辛醛(1.97μg/cm²)的順序示出了殺螨作用。

實施例4

對于塵螨的蜜蜂花精油提取物的標記活性評價

基于實施例3的接觸法來測定出基于上述實施例1的方法來準備的蜜蜂花精油的殺螨活性之后，利用光學顯微鏡(×500)觀察了粉塵螨、屋塵螨及腐食酪螨的變化。

表5

化合物螨蟲的標記活性評價

上述表5示出用蜜蜂花精油經過處理之后，觀察了粉塵螨、塵螨及腐食酪螨的顏色變化的結果。作為對照區(qū)的deet沒有對螨蟲產生顏色變化(圖1)，但蜜蜂花精油通過引導粉塵螨、屋塵螨及腐食酪螨的顏色變化來使之變?yōu)辄S色(圖1)。并且，3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛、2-辛醛及2，4-辛二烯醛將螨蟲的顏色引導至棕色或淡棕色。因此，上述蜜蜂花精油、3，7-二甲基-2，6-辛二烯醛、2-辛醛2，4-辛二烯醛可以用作螨蟲標記來使用。

通過上述實施例及實驗例，可確認出：經過分餾純化的本發(fā)明的蜜蜂花精油提取物的特定成分作為天然殺螨劑的有效成分，可以對螨蟲具有優(yōu)秀的殺螨效果。

實施例5～實施例17

對于螨蟲的巴戟提取物的殺螨活性評價

從西格瑪(sigma)公司或默克(merck)公司購入以下表6中示出的化合物作為用于螨蟲的殺螨劑。

表6

實驗例1：對于塵螨及長角血蜱的殺螨活性評價

(1)殺螨活性測定中所使用的螨蟲

相對于塵螨和長角血蜱實施了殺螨活性測定，并在25±2℃溫度、75±10％的相對濕度、被與飼養(yǎng)室的任何殺螨劑隔離的狀態(tài)下，飼養(yǎng)了塵螨。而且在韓國全州北道全州市所在川邊采集了長角血蜱，在未飼養(yǎng)的條件下采集之后，實施了殺螨活性測定。

(2)對于塵螨及長角血蜱的殺螨活性評價

在本發(fā)明中，利用熏蒸法和直接接觸法對塵螨及長角血蜱實施了殺螨活性測定。在本發(fā)明中，在初步實驗的基礎上，將初始劑量設定為104μg/cm²。稀釋初始劑量的試料并利用濾紙(filterpaper)處理50μl之后，在室溫(25℃)條件下干燥20分鐘之后開始使用。并且，在陰性對照區(qū)中僅處理了10μl的丙酮。

熏蒸法是在陪替氏培養(yǎng)皿(petridish)的蓋上附著經過處理的濾紙，直接接觸法是在陪替氏培養(yǎng)皿底部附著經過處理的濾紙，之后分別接種30只螨蟲，并在25±2℃溫度、70±10％的相對溫度、黑暗條件下的恒溫箱中放置24小時之后，利用光學顯微鏡確認了殺螨與否。

并且，當用細毛筆刺激螨蟲的軀體時沒有動靜的，則被認定已死亡，各個測定反復實施了5次。在表7(熏蒸法)及表8(直接接觸法)中，用ld50(半數(shù)致死劑量)值來對殺螨活性進行了比較。

表7

從利用上述表7中的熏蒸法，測定巴戟提取物(比較例1)和實施例5～實施例18的化合物的塵螨及長角血蜱的殺螨活性的結果來看，實施例17(0.21μg/cm²、0.19μg/cm²、0.68μg/cm²)中的殺螨活性最高，接著按照實施例11(0.46μg/cm²、0.44μg/cm²、0.79μg/cm²)、實施例13(0.65μg/cm²、0.68μg/cm²、0.88μg/cm²)、實施例12(0.66μg/cm²、0.59μg/cm²、0.95μg/cm²)，實施例5(0.95μg/cm²、0.87μg/cm²、1.28μg/cm²)、實施例6(0.99μg/cm²、0.93μg/cm²、1.38μg/cm²)、實施例7(1.17μg/cm²、1.15μg/cm²、3.67μg/cm²)、實施例8(1.32μg/cm²、1.27μg/cm²)、巴戟提取物(7.05μg/cm²、6.99μg/cm²、19.70μg/cm²)及實施例14(7.53μg/cm²、6.69μg/cm²)的順序示出了優(yōu)秀的殺螨活性。由此可確認出：在對照區(qū)的deet的情況下，殺螨活性(36.50μg/cm²、34.23μg/cm²、52.03μg/cm²)的ld50值最低。

表8

從利用上述表8中的直接接觸法，測定巴戟提取物和實施例5～實施例18的化合物的塵螨及長角血蜱的殺螨活性的結果來看，實施例18(0.12μg/cm²、0.19μg/cm²、0.46μg/cm²)的殺螨活性最高，接著按照實施例11(0.25μg/cm²、0.24μg/cm²、0.56μg/cm²)、實施例12(0.32μg/cm²、0.32μg/cm²、0.62μg/cm²)、實施例13(0.35μg/cm²、0.36μg/cm²、0.74μg/cm²)、實施例5(0.51μg/cm²、0.47μg/cm²、0.94μg/cm²)、實施例6(0.53μg/cm²、0.50μg/cm²、1.02μg/cm²)、實施例7(0.63μg/cm²、0.61μg/cm²、1.84μg/cm²)、實施例8(0.69μg/cm²、0.71μg/cm²)、實施例14(3.79μg/cm²、3.45μg/cm²)及巴戟提取物(5.57μg/cm²、5.00μg/cm²、15.48μg/cm²)的順序示出了優(yōu)秀的殺螨活性。

并且，在對照區(qū)的deet的情況下，殺螨活性(19.64μg/cm²、14.12μg/cm²、47.77μg/cm²)的ld50值最低。

通過上述表7及表8的實驗結果，可確認出：本發(fā)明的用于螨蟲的殺螨劑不僅可以通過直接接觸法來顯示殺螨效果，而且可以通過熏蒸法來顯示殺螨效果，每個實施例5～9的化合物對螨蟲種類顯示殺螨效果上的有無和殺螨程度上的差異，但優(yōu)選地，在整體上對粉塵螨、屋塵螨及長角血蜱具有優(yōu)秀的殺螨活性。

實驗例2：對于塵螨的標記活性評價

利用上述實驗例1的方法測定來源于上述巴戟提取物和巴戟提取物的分餾純化的實施例5～實施例18的化合物的、殺螨活性之后，利用光學顯微鏡用500倍數(shù)來觀察了作為代表性的塵螨的粉塵螨及屋塵螨的顏色變化，其結果示出在以下表9中。并且，圖2中示出了利用以往的化學防治劑的deet來進行殺螨的螨蟲的光學顯微鏡圖片，圖3中示出了利用實施例11的化合物來進行殺螨的螨蟲的光學顯微鏡圖片。

表9

從觀察上述表9的粉塵螨及屋塵螨的顏色變化的實驗結果來看，對照區(qū)的deet沒有起到變化螨蟲顏色的作用(圖2)，但可以誘導實施例11中的粉塵螨及屋塵螨的顏色變化，來使之變成黑色(圖3)。并且，在實施例5～實施例10及實施例12～實施例18中未存在螨蟲的顏色變化。

通過上述實施例及實驗例，可以確認出：本發(fā)明的巴戟提取物中的經過分餾純化的特定成分為天然殺螨劑的有效成分，具有優(yōu)秀的殺螨效果，并且，可以確認出：上述天然殺螨劑的有效成分中的可以用作能夠在視覺上識別螨蟲的標記來使用。

產業(yè)上的可利用性

來源于本發(fā)明的蜜蜂花精油或巴戟提取物的化合物不是以往的化學防治劑而是天然成分的殺螨劑，不僅對粉塵螨、屋塵螨、腐食酪螨、長角血蜱等的螨蟲具有優(yōu)秀的殺螨活性，而且通過誘導螨蟲的顏色變化，來可以具有在視覺上能夠易于進行識別的標記活性。因此，若利用蜜蜂花精油或5種化合物來對作為主要的室內過敏原的螨蟲進行處理，則因被殺滅的螨蟲的尸體得到顏色變化，而在視覺上能夠易于識別，由此可以去除引發(fā)二次感染的螨蟲尸體，從而產業(yè)上的可利用性高。