技術(shù)特征：

1.一種改善細(xì)胞庫的解凍復(fù)蘇的方法，所述方法包括在冷凍培養(yǎng)基中冷凍用于建庫的哺乳動物細(xì)胞，其中所述冷凍培養(yǎng)基包含緩沖溶液和低溫防護(hù)劑，并且其中所述冷凍培養(yǎng)基在冷凍之前具有約6.7至約8.5的pH。

2.一種冷凍用于儲存的哺乳動物細(xì)胞的方法，所述方法包括在冷凍培養(yǎng)基中冷凍哺乳動物細(xì)胞，其中所述冷凍培養(yǎng)基包含緩沖溶液和低溫防護(hù)劑，并且其中所述冷凍培養(yǎng)基在冷凍之前具有約6.7至約8.5的pH。

3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中冷凍培養(yǎng)基在冷凍之前具有約6.7至約8.3、約7.2至約7.8或約7.5的pH。

4.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述冷凍培養(yǎng)基的pH已調(diào)節(jié)至約6.7至約8.5的pH。

5.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述冷凍培養(yǎng)基的pH已調(diào)節(jié)至約6.7至約8.3或約7.2至約7.8的pH。

6.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述冷凍培養(yǎng)基的pH已調(diào)節(jié)至約7.5的pH。

7.如權(quán)利要求4-6中任一項所述的方法，其中在pH調(diào)節(jié)之前和/或之后將細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合。

8.如權(quán)利要求4-7中任一項所述的方法，其中所述調(diào)節(jié)的pH是目標(biāo)pH或測量pH。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述目標(biāo)pH為約6.7至約8.3。

10.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述測量pH為約6.7至約8.3。

11.如權(quán)利要求4-10中任一項所述的方法，所述方法還包括在調(diào)節(jié)冷凍培養(yǎng)基的pH之前測量包含細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基的初始pH的步驟。

12.如權(quán)利要求4-11中任一項所述的方法，所述方法還包括測量冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH的步驟。

13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中如果冷凍培養(yǎng)基的測量pH低于目標(biāo)pH，重復(fù)調(diào)節(jié)步驟和測量步驟，直到冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH為約6.7至約8.3。

14.如權(quán)利要求4-13中任一項所述的方法，其中通過加入堿調(diào)節(jié)pH。

15.如權(quán)利要求14所述的方法，其中所述堿選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、HEPES鈉鹽、氫氧化鈉和氫氧化鉀。

16.如權(quán)利要求14或15所述的方法，其中根據(jù)下式V_堿＝C_堿*V_p(pH_t-pH_i)通過向冷凍培養(yǎng)基中加入堿調(diào)節(jié)冷凍培養(yǎng)基的pH，其中C_堿是堿特異性系數(shù)，V_堿是加入到冷凍培養(yǎng)基中的堿的體積，V_p是冷凍培養(yǎng)基的體積，pH_t是目標(biāo)pH，pH_i是初始pH。

17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中根據(jù)下式V_Na2CO3＝0.0085V_p(pH_t-pH_i)通過向冷凍培養(yǎng)基中加入碳酸鈉調(diào)節(jié)冷凍培養(yǎng)基的pH，其中V_Na2CO3是加入到冷凍培養(yǎng)基中的1M碳酸鈉的體積，V_p是冷凍培養(yǎng)基的體積，pH_t是目標(biāo)pH，pH_i是初始pH。

18.如權(quán)利要求16或17所述的方法，其中目標(biāo)pH為6.7至8.3、7.2至7.8或7.5。

19.如權(quán)利要求1-18中任一項所述的方法，其中在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前，哺乳動物細(xì)胞在具有pH為約6.2至約6.6的培養(yǎng)基中。

20.如權(quán)利要求1-19中任一項所述的方法，其中低溫防護(hù)劑是DMSO、甘油、丙二醇、乙二醇或糖。

21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中低溫防護(hù)劑是DMSO或甘油，并且在冷凍之前冷凍培養(yǎng)基中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約12.5％，以體積計。

22.如權(quán)利要求21所述的方法，其中在冷凍細(xì)胞之前，冷凍培養(yǎng)基中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約10％，以體積計。

23.如權(quán)利要求1-22中任一項所述的方法，其中含有哺乳動物細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基在冷凍之前具有約8％至約28％收集細(xì)胞體積(PCV)的細(xì)胞密度。

24.如權(quán)利要求1-23中任一項所述的方法，所述方法還包括在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前、在細(xì)胞收獲和濃縮過程中冷卻細(xì)胞培養(yǎng)液的步驟。

25.如權(quán)利要求24所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約20℃的溫度。

26.如權(quán)利要求24所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約10℃的溫度。

27.一種冷凍用于儲存的哺乳動物細(xì)胞的方法，所述方法包括(a)將含有哺乳動物細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至約6.7至約8.5的pH，其中所述冷凍培養(yǎng)基包含緩沖溶液和低溫防護(hù)劑；和(b)冷凍哺乳動物細(xì)胞。

28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中將pH調(diào)節(jié)至約6.7至約8.3或約7.2至約7.8的pH。

29.如權(quán)利要求27所述的方法，其中將pH調(diào)節(jié)至約7.5的pH。

30.如權(quán)利要求27-29中任一項所述的方法，其中調(diào)節(jié)的pH是目標(biāo)pH或測量pH。

31.如權(quán)利要求30所述的方法，其中所述目標(biāo)pH為約6.7至約8.3。

32.如權(quán)利要求30所述的方法，其中測量pH為約6.7至約8.3。

33.如權(quán)利要求27所述的方法，所述方法在調(diào)節(jié)所述冷凍培養(yǎng)基的pH之前還包括測量包含細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基的初始pH的步驟。

34.如權(quán)利要求27-33中任一項所述的方法，所述方法還包括測量冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH的步驟。

35.如權(quán)利要求34所述的方法，其中如果冷凍培養(yǎng)基的測量pH低于目標(biāo)pH，則重復(fù)調(diào)節(jié)步驟和測量步驟直到冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH為約6.7至約8.5。

36.如權(quán)利要求27-35中任一項所述的方法，其中通過加入堿調(diào)節(jié)pH。

37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述堿選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、HEPES鈉鹽、氫氧化鈉和氫氧化鉀。

38.如權(quán)利要求36或37所述的方法，其中根據(jù)下式V_堿＝C_堿*V_p(pH_t-pH_i)通過向冷凍培養(yǎng)基中加入堿調(diào)節(jié)冷凍培養(yǎng)基的pH，其中C_堿是堿特異性系數(shù)，V_堿是加入到冷凍培養(yǎng)基中的堿的體積，V_p是冷凍培養(yǎng)基的體積，pH_t是目標(biāo)pH，pH_i是初始pH。

39.如權(quán)利要求36或37所述的方法，其中根據(jù)下式V_Na2CO3＝0.0085V_p(pH_t-pH_i)通過向冷凍培養(yǎng)基中加入碳酸鈉調(diào)節(jié)冷凍培養(yǎng)基的pH，其中V_Na2CO3是加入到冷凍培養(yǎng)基中的1M碳酸鈉的體積，V_p是冷凍培養(yǎng)基的體積，pH_t是目標(biāo)pH，pH_i是初始pH。

40.如權(quán)利要求38或39所述的方法，其中目標(biāo)pH為6.7至8.3、7.2至7.8或7.5。

41.如權(quán)利要求27-40中任一項所述的方法，其中在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前，哺乳動物細(xì)胞在具有pH為約6.2至約6.6的培養(yǎng)基中。

42.如權(quán)利要求27-41中任一項所述的方法，其中所述低溫防護(hù)劑是DMSO、甘油、丙二醇、乙二醇或糖。

43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述低溫防護(hù)劑是DMSO或甘油，并且在冷凍之前含有哺乳動物細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約12.5％，以體積計。

44.如權(quán)利要求所述43的方法，其中在冷凍細(xì)胞之前含有哺乳動物細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約10％，以體積計。

45.如權(quán)利要求27-44中任一項所述的方法，其中含有哺乳動物細(xì)胞的冷凍培養(yǎng)基在冷凍之前具有8％至28％收集細(xì)胞體積(PCV)的細(xì)胞密度。

46.如權(quán)利要求27-45中任一項所述的方法，所述方法還包括在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前、在細(xì)胞收獲和濃縮過程中冷卻細(xì)胞培養(yǎng)液的步驟。

47.如權(quán)利要求46所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約20℃的溫度。

48.如權(quán)利要求46所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約10℃的溫度。

49.一種冷凍用于儲存的哺乳動物細(xì)胞的方法，包括(a)將冷凍培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)至約6.7至約8.5的pH，其中所述冷凍培養(yǎng)基包含緩沖溶液和低溫防護(hù)劑；(b)將哺乳動物細(xì)胞與所述冷凍培養(yǎng)基組合以形成細(xì)胞池；和(c)冷凍所述細(xì)胞池中的哺乳動物細(xì)胞。

50.如權(quán)利要求49所述的方法，其中將pH調(diào)節(jié)至約6.7至約8.3或約7.2至約7.8的pH。

51.如權(quán)利要求49所述的方法，其中將pH調(diào)節(jié)至約7.5的pH。

52.如權(quán)利要求49-51中任一項所述的方法，其中調(diào)節(jié)的pH是目標(biāo)pH或測量pH。

53.如權(quán)利要求52所述的方法，其中目標(biāo)pH為約6.7至約8.3。

54.如權(quán)利要求52所述的方法，其中測量pH為約6.7至約8.3。

55.如權(quán)利要求49-54中任一項所述的方法，所述方法還包括測量冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH的步驟。

56.如權(quán)利要求49所述的方法，其中如果所測量的冷凍培養(yǎng)基的pH低于目標(biāo)pH，則重復(fù)調(diào)節(jié)步驟和測量步驟，直到冷凍培養(yǎng)基的調(diào)節(jié)pH為約6.7至約8.5。

57.如權(quán)利要求49-56中任一項所述的方法，其中通過加入堿調(diào)節(jié)pH。

58.如權(quán)利要求57所述的方法，其中所述堿選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、HEPES鈉鹽、氫氧化鈉和氫氧化鉀。

59.如權(quán)利要求49-58中任一項所述的方法，其中在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前，所述哺乳動物細(xì)胞在具有pH為約6.2至約6.6的培養(yǎng)基中。

60.如權(quán)利要求49-59中任一項所述的方法，其中所述低溫防護(hù)劑是DMSO、甘油、丙二醇、乙二醇或糖。

61.如權(quán)利要求60所述的方法，其中所述低溫防護(hù)劑是DMSO或甘油，并且細(xì)胞池中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約12.5％，以體積計。

62.如權(quán)利要求61所述的方法，其中細(xì)胞池中的DMSO或甘油的濃度為約5％至約10％，以體積計。

63.如權(quán)利要求49-62中任一項所述的方法，其中細(xì)胞池含有約8％至約28％收集細(xì)胞體積(PCV)的細(xì)胞密度的哺乳動物細(xì)胞。

64.如權(quán)利要求49-63中任一項所述的方法，所述方法還包括在哺乳動物細(xì)胞與冷凍培養(yǎng)基組合之前、在細(xì)胞收獲和濃縮過程中冷卻細(xì)胞培養(yǎng)液的步驟。

65.如權(quán)利要求64所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約20℃的溫度。

66.如權(quán)利要求64所述的方法，其中將細(xì)胞培養(yǎng)液冷卻至等于或低于約10℃的溫度。

67.如權(quán)利要求1-66中任一項所述的方法，其中所述哺乳動物細(xì)胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、NS0鼠骨髓瘤細(xì)胞、人細(xì)胞或雜交瘤。

68.如權(quán)利要求1-67中任一項所述的方法，其中所述哺乳動物細(xì)胞包含編碼多肽的核酸。

69.如權(quán)利要求68所述的方法，其中所述多肽是治療性蛋白。

70.如權(quán)利要求69所述的方法，其中所述治療性蛋白質(zhì)選自抗體、抗體片段、酶和受體融合蛋白。

71.一種用于冷凍哺乳動物細(xì)胞的哺乳動物細(xì)胞池，其包含緩沖溶液、低溫防護(hù)劑和包含編碼多肽的核酸的哺乳動物細(xì)胞，其中培養(yǎng)基在冷凍細(xì)胞之前具有約6.7至約8.5的pH。

72.如權(quán)利要求71所述的細(xì)胞池，其中所述哺乳動物細(xì)胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、NS0鼠骨髓瘤細(xì)胞、人細(xì)胞或雜交瘤。

73.如權(quán)利要求71或72所述的細(xì)胞庫，其中所述哺乳動物細(xì)胞包含編碼多肽的核酸。

74.如權(quán)利要求73所述的細(xì)胞池，其中所述多肽是治療性蛋白質(zhì)。

75.如權(quán)利要求74所述的細(xì)胞庫，其中所述治療性蛋白質(zhì)選自抗體、抗體片段、酶和受體融合蛋白。

76.一種包含多個容器的細(xì)胞庫，每個容器含有(a)包含緩沖溶液和低溫防護(hù)劑的冷凍培養(yǎng)基，和(b)包含編碼多肽的核酸的哺乳動物細(xì)胞，其中所述冷凍培養(yǎng)基在冷凍細(xì)胞之前具有約6.7至約8.5的pH。

77.如權(quán)利要求76所述的細(xì)胞庫，其中所述容器是安瓿。

78.如權(quán)利要求76或77所述的細(xì)胞庫，其中所述哺乳動物細(xì)胞是中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、NS0鼠骨髓瘤細(xì)胞、人細(xì)胞或雜交瘤。

79.如權(quán)利要求76-78中任一項所述的細(xì)胞庫，其中所述哺乳動物細(xì)胞包含編碼多肽的核酸。

80.如權(quán)利要求79所述的細(xì)胞庫，其中所述多肽是治療性蛋白質(zhì)。

81.如權(quán)利要求80所述的細(xì)胞庫，其中所述治療性蛋白質(zhì)選自抗體、抗體片段、酶和受體融合蛋白。