本公開(kāi)內(nèi)容涉及帶殼蛋的病原體生物防治。
背景技術(shù)：
：以下列出了被認(rèn)為與本公開(kāi)的主題相關(guān)的作為背景的參考文獻(xiàn)：-innegantois等"mechanismsofeggcontaminationbysalmonellaenteritidis"remsmicrobiol.rev33:718-738(2009)-國(guó)際專利申請(qǐng)公布號(hào)wo08/084485-國(guó)際專利申請(qǐng)公布號(hào)wo10/101679本文對(duì)以上參考文獻(xiàn)的確認(rèn)不應(yīng)被推斷為意指這些參考文獻(xiàn)以任何方式與本公開(kāi)的主題的專利性相關(guān)。背景為了增加消費(fèi)者的健康安全，在家禽業(yè)中對(duì)更有效的消毒技術(shù)存在日益增加的需求。已經(jīng)證實(shí)良好的蛋衛(wèi)生通過(guò)減少外部蛋殼污染的量來(lái)改善日齡雛雞的存活力和質(zhì)量以及食用蛋(consumptionegg)的安全性?？赡苡绊懙百|(zhì)量的細(xì)菌和霉菌大量存在于蛋的周圍環(huán)境，并且特別是在產(chǎn)蛋的土壤中。與蛋殼接觸后，細(xì)菌和霉菌可以通過(guò)蛋殼滲入蛋，并且影響蛋質(zhì)量的多個(gè)方面，包括增加胚死亡率、導(dǎo)致蛋黃感染和增加第一周齡的雛雞死亡率等，以及其他。蛋可以經(jīng)由兩種不同的途徑被污染：通過(guò)卵巢或經(jīng)卵巢的垂直傳播(verticaltransmissionthroughtheovaryortransovarian)或者通過(guò)殼或穿殼的水平傳播(horizontaltransmissionthroughtheshellortrans-shell)。通過(guò)垂直傳播，細(xì)菌在殼形成之前被從感染的生殖組織引入到蛋。這種形式的傳播主要與病原細(xì)菌即沙門氏菌(salmonella)相關(guān)。水平傳播通常由蛋殼上的糞便污染發(fā)生，因?yàn)榈敖?jīng)由糞便排泄也在其處發(fā)生的泄殖腔被釋放。其還包括通過(guò)環(huán)境媒介物諸如養(yǎng)殖戶、寵物和嚙齒動(dòng)物的污染。通過(guò)腸炎沙門氏菌(salmonellaenteritidis)的蛋污染機(jī)制已經(jīng)被綜述[innegantois等remsmicrobiol.rev33:718-738(2009)]。使病原體的水平傳播最小化并且因此增加蛋的生產(chǎn)率的努力包括優(yōu)化蛋孵育(incubation)期間的環(huán)境條件、蛋的抗細(xì)菌注射，用熏蒸劑或其他類型的消毒劑處理以減少殼表面上的微生物的數(shù)目，改善衛(wèi)生條件等。另外，開(kāi)發(fā)了用于處理蛋殼的方法。一些包括抗微生物劑諸如氧化劑的水溶液的應(yīng)用；另一些包括牽涉在蛋殼上形成不滲入到蛋的內(nèi)部的涂覆物(coating)的不使用抗細(xì)菌劑的處理。例如，wo08/084485描述了用于改善孵化場(chǎng)蛋的孵化的組合物及方法，所述方法包括：(a)用包含涂覆劑的涂覆組合物處理蛋殼表面，以在蛋殼的表面上形成涂覆物；和(b)在引起孵化發(fā)生的條件下孵育所述蛋；其中與未如(a)中的定義處理的對(duì)照蛋相比所述孵化蛋的孵化產(chǎn)率被改善。wo10/101679描述了用于增加已受精的禽蛋(avianeggs)的生產(chǎn)率的方法，所述方法包括a)用包含水性溶劑、薄膜形成涂覆劑和一種或更多種表面活性劑的液體涂覆組合物處理蛋的外表面；b)允許所述液體涂覆組合物在所述蛋表面形成涂覆物，和c)在引起孵化發(fā)生的條件下孵育所述蛋，其中與未如(a)至(b)中的定義處理的對(duì)照蛋相比所述禽蛋的生產(chǎn)率被增加。所述涂覆物被描述為促進(jìn)殼的機(jī)械強(qiáng)化、保護(hù)免受不利的環(huán)境條件、防止污染、區(qū)分蛋起源并且允許在儲(chǔ)存或運(yùn)送期間適當(dāng)?shù)臍怏w交換。一般性描述本公開(kāi)內(nèi)容提供了用于在改善帶殼蛋的質(zhì)量的方法中使用的生物防治組合，所述生物防治組合包含至少一種第一組分和至少一種第二組分，所述至少一種第一組分包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)，所述至少一種第二組分包含拮抗性細(xì)菌的混合物，其中所述第一組分和所述第二組分在應(yīng)用到所述帶殼蛋表面上之前被組合成生物防治制劑。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，帶殼蛋的質(zhì)量的改善通過(guò)至少以下參數(shù)中的一個(gè)表現(xiàn)：(a)消毒生物污染；(b)改善帶殼蛋的新鮮度等級(jí)，如用來(lái)自接受所述制劑的帶殼蛋群體的代表性蛋使用哈夫新鮮度指數(shù)確定的；(c)改善已受精的蛋的孵化率；和(d)延長(zhǎng)可食用的(未受精的)蛋的保質(zhì)期。根據(jù)另一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的方法，所述方法包括將包含本文公開(kāi)的生物防治組合的組分的生物防治制劑應(yīng)用到所述帶殼蛋上，所述生物防治組合包含至少一種第一組分和至少一種第二組分，所述至少一種第一組分包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)，所述至少一種第二組分包含拮抗性細(xì)菌的混合物。根據(jù)又另一方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了包含以下的組分的生物防治組合的用途：(i)至少一種第一組分，所述至少一種第一組分包含含至少一種天然油的顆粒物質(zhì)；(ii)至少一種第二組分，所述至少一種第二組分包含拮抗性細(xì)菌的混合物，所述用途是用于制備用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的生物防治制劑。在一些實(shí)施方案中，生物防治組合被以兩元包裝(twomemberedpackage)的形式提供，在所述包裝中所述至少一種第一組分和所述至少一種第二組分被單獨(dú)地密封，所述包裝還包含用于使用所述組分用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的說(shuō)明書(shū)。附圖簡(jiǎn)述為了更好地理解本文公開(kāi)的主題并示例其可如何付諸于實(shí)踐，現(xiàn)將參考附圖僅以非限制性實(shí)例的方式描述多個(gè)實(shí)施方案，其中：圖1a-1b是使用本文公開(kāi)的生物防治制劑處理的蛋(圖1a)和未處理的、顯示菌落(用箭頭標(biāo)記)的蛋(圖1b)的照相圖像。實(shí)施方案詳述本公開(kāi)內(nèi)容基于以下發(fā)現(xiàn)：從土傳拮抗性細(xì)菌的混合物(第二組分)和天然油(第一組分)諸如牛至油和芝麻油獲得的水基制劑有效減少(如果不是完全消除)至少家禽蛋表面上的病原體載量。制劑通過(guò)在使用之前將兩種活性組分即細(xì)菌的混合物和天然油(在顆粒物質(zhì)上)混合來(lái)制備，并且當(dāng)以低量將常用的無(wú)機(jī)鹽磷酸氫二銨添加到所得的混合物中時(shí)，效果甚至被改善。生物防治制劑的應(yīng)用能夠表現(xiàn)出以下中的任何一個(gè)：減少污染水平(細(xì)菌性污染和真菌性污染之一或二者)以及，或者可選地，改善已受精的蛋的孵化率和/或延長(zhǎng)可食用的(未受精的)蛋的保質(zhì)期?；诒疚墓_(kāi)的發(fā)現(xiàn)，發(fā)明人已經(jīng)得出結(jié)論：通過(guò)如本文定義的至少一種第一組分和至少一種第二組分提供的生物防治制劑的應(yīng)用提供了帶殼蛋的質(zhì)量(不論其用于孵化或者用于食用)的整體上預(yù)料不到的改善。因此，根據(jù)本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提供了用于在改善帶殼蛋的質(zhì)量的方法中使用的生物防治組合(其可以以試劑盒或包裝的形式來(lái)提供)，所述組合包含至少一種第一組分和至少一種第二組分，所述至少一種第一組分包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)，所述至少一種第二組分包含拮抗性細(xì)菌的混合物，其中所述第一組分和所述第二組分在于所述蛋殼表面上使用之前被組合成生物防治制劑。生物防治組合可以被以兩種組分包裝的形式提供，所述兩種組分包裝還包括用于使用其中的兩種組分的說(shuō)明書(shū)，所述說(shuō)明書(shū)包括將所述第一組分和所述第二組分混合以形成制劑并且將所述制劑應(yīng)用到所述蛋上。根據(jù)一個(gè)另外的方面，本發(fā)明提供了改善帶殼蛋的質(zhì)量的方法，所述方法包括將包含生物防治組合的組分的生物防治制劑應(yīng)用到蛋殼上，所述生物防治組合的組分包含本文公開(kāi)的第一組分和第二組分，所述第一組分包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)，所述第二組分包含拮抗性細(xì)菌的混合物。本公開(kāi)內(nèi)容的一個(gè)另外的方面還提供了包含本文定義的至少一種第一組分和至少一種第二組分的組分組合用于制備用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的生物防治制劑優(yōu)選地水基制劑的用途。此外，根據(jù)第四另外的方面，本公開(kāi)內(nèi)容提供了制備用于消毒帶殼蛋表面的制劑的方法。最后，本文提供了用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的包裝，所述包裝包括包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)的至少一種第一組分、包含拮抗性細(xì)菌的混合物的至少一種第二組分，以及用于使用所述至少一種第一組分和所述至少一種第二組分用于制備用于改善帶殼蛋的質(zhì)量的生物防治制劑的說(shuō)明書(shū)，所述說(shuō)明書(shū)至少包括將所述至少一種第一組分與所述至少一種第二組分混合。以下描述適用于本公開(kāi)內(nèi)容的每一個(gè)方面。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，當(dāng)提及帶殼蛋(即具有包含碳酸鈣的外部覆蓋物的蛋)的“質(zhì)量的改善”時(shí)，其應(yīng)被理解為意指家禽養(yǎng)殖領(lǐng)域的技術(shù)人員已知的任何參數(shù)的改善，包括，但不限于，蛋殼表面上的病原性(例如真菌、細(xì)菌)污染的減少、蛋內(nèi)病原性污染的減少(通常基于從根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容處理的蛋群體取出的樣品蛋來(lái)確定)、保質(zhì)期的延長(zhǎng)(與未處理的蛋的保質(zhì)期相比)、根據(jù)哈夫指數(shù)確定的新鮮度的增加、增加的孵化水平，所有的均通過(guò)本領(lǐng)域已知的程序確定。另外，在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，“增加的孵化率”表示孵化的蛋的數(shù)目的統(tǒng)計(jì)學(xué)增加和/或孵化的雛雞的健康增加以及本領(lǐng)域已知的任何其他參數(shù)。增加基于與一組未處理的蛋的比較來(lái)確定。此外，在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，“延長(zhǎng)的保質(zhì)期”表示與在相同條件下儲(chǔ)存的未處理的蛋的新鮮度相比，未受精的蛋的新鮮度延長(zhǎng)至少一天(平均地)。制劑通過(guò)將生物防治組合的至少兩種組分(所述至少一種第一組份和至少一種第二組分)，優(yōu)選地還有水混合來(lái)制備?；旌?組合兩種組分的結(jié)果提供了生物防治制劑，其內(nèi)容物在下文中被進(jìn)一步討論。在一些實(shí)施方案中，生物防治制劑在其制備之后不久被應(yīng)用，即，其是新鮮制備的制劑，并且混合因此被認(rèn)為是在應(yīng)用的不久之前。當(dāng)提及新鮮制備的制劑時(shí)，其應(yīng)被理解為在將生物防治組合即生物防治制劑的至少第一組分和第二組分混合之后不超過(guò)48小時(shí)，有時(shí)不超過(guò)24小時(shí)，并且優(yōu)選地不超過(guò)12小時(shí)，或者甚至6小時(shí)應(yīng)用到蛋殼上的制劑。在一些實(shí)施方案中，生物防治組合在將其兩種組分混合之后的約12小時(shí)時(shí)間窗內(nèi)被使用。其內(nèi)容物將在下文中討論的兩種不同類型的組分(即，至少一種第一組分和至少一種第二組分)被用水稀釋以形成適用于應(yīng)用到蛋上的生物防治制劑。生物防治制劑可適用于消毒任何類型的帶殼蛋，并且至少有效減少殼表面上的病原體載量。因此，在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，當(dāng)提及蛋時(shí)，其應(yīng)被理解為意指在容納蛋清(albumen)的薄膜上具有殼包覆物的任何蛋。殼可以是硬殼或者軟殼。在一些實(shí)施方案中，殼是硬殼諸如禽(鳥(niǎo)(birds))蛋的殼。在一些其他實(shí)施方案中，殼是軟殼，諸如海龜?shù)臍?。在一些?shí)施方案中，蛋是禽(鳥(niǎo))蛋。這包括任何類型的鳥(niǎo)，諸如寵物鳥(niǎo)、產(chǎn)可食用蛋的鳥(niǎo)和野生鳥(niǎo)。當(dāng)提及產(chǎn)可食用蛋的鳥(niǎo)時(shí)，其應(yīng)被理解為包括產(chǎn)即當(dāng)未受精時(shí)被哺乳動(dòng)物食用的蛋的任何類型的鳥(niǎo)，包括，但不限于，為可食用蛋的最常見(jiàn)提供者的雞，以及其他可食用蛋的提供者，諸如鴨、野雞、鵪鶉、鵝、火雞、鴕鳥(niǎo)、鴿子和鴯鹋。根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容待被處理以用于改善其質(zhì)量的蛋可以是可食用的(即未受精的)或已受精的蛋。如將在以下實(shí)施例中顯示的，處理以及具體地消毒未降低或損害孵化的質(zhì)量，并且如此被認(rèn)為對(duì)生殖質(zhì)量是惰性的。根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容獲得的生物防治制劑可以被應(yīng)用至散養(yǎng)蛋以及至籠(coop)、家禽圍養(yǎng)區(qū)(poultryenclosure)或孵化器(incubator)內(nèi)產(chǎn)的蛋。已知在任一生長(zhǎng)環(huán)境下，蛋殼(軟的或硬的)潛在地?cái)y帶多種病原體，并且特別地可感染發(fā)育中的雛雞的病原體或者可引起處理或者食用蛋(已受精的或未受精的蛋)的哺乳動(dòng)物的疾病的病原體。當(dāng)提及病原體時(shí)，其應(yīng)被理解為包括特別地引起疾病的生物媒介(biologicalagent)。這可以包括來(lái)自任何來(lái)源的細(xì)菌、真菌和原生動(dòng)物，包括但不限于土傳(soilborn)的病原體、空氣攜帶的病原體、肥料病原體(manurepathogen)和水?dāng)y帶的病原體。在一些實(shí)施方案中，病原體是細(xì)菌或真菌。當(dāng)病原體是真菌時(shí)，引起疾病的真菌的非限制性列舉包括選自由以下組成的組的任何一種：黃曲霉(aspergillusflavus)、黑曲霉(aspergillusniger)、煙曲霉(aspergillusfumigates)、草酸青霉(penecilliumoxalicum)、皺褶青霉(penecilliumrugulosum)、fusariumgraminarium、鐮孢菌種(fusariumspp.)、毛霉種(mucorspp.)、根霉種(rhizopusspp.)、枝孢種(cladospriumspp.)、青霉種(penicilliumspp.)、念珠菌種(moniliaspp.)。當(dāng)病原體是細(xì)菌時(shí)，引起疾病的細(xì)菌的非限制性列舉包括由以下組成的組的任何一種：大腸桿菌(e.coli)、假單胞菌屬(pseudomonas)(例如銅綠假單胞菌(pseudomonasaeruginosa))、葡萄球菌屬(staphylococus)(例如金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureus))、腸球菌種(enterococcusspp.)、粘質(zhì)沙雷氏菌(serratiamarcescenes)、普通變形桿菌(proteusvulgaris)、沙門氏菌種(salmonellasp.)。組合有效防治在殼的至少表面上潛在地存在的任何病原體。當(dāng)提及蛋殼的消毒或防治(或生物防治)時(shí)，其應(yīng)被理解為由于在蛋的表面上一種或更多種病原體的存在而發(fā)展疾病的風(fēng)險(xiǎn)的任何統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的降低，如通過(guò)常規(guī)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)確定的。消毒可以包括在蛋殼的至少表面上的一種或更多種病原體的水平/濃度/量的減少，以及在所述表面上的一種或更多種病原體的完全消除。在一些實(shí)施方案中，消毒包括蛋殼外表面上的病原體的至少兩個(gè)對(duì)數(shù)的減少。生物防治制劑可以通過(guò)本領(lǐng)域可得的任何技術(shù)被應(yīng)用。這包括，但不限于，將蛋浸入包含生物防治組合的組合組分的制劑中；將制劑噴灑到蛋殼上；使蛋在吸收有所述制劑的基底上滾動(dòng)；用溶液涂刷蛋殼；將蛋引入或維持在由此類制劑形成的霧中。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，生物防治制劑通過(guò)用包含組合的生物防治組分的溶液噴灑蛋來(lái)應(yīng)用。應(yīng)用提供在蛋殼上的涂覆物。涂覆物可以是蛋殼的連續(xù)(全)涂覆物或者不連續(xù)的涂覆物，即其中殼表面具有無(wú)涂覆物的區(qū)域以及被天然油和/或至少一種拮抗性細(xì)菌涂覆的其他區(qū)域，或者涂覆物是網(wǎng)狀(net-shaped)或網(wǎng)絡(luò)狀(web-shaped)涂覆物，其中所述組合構(gòu)成網(wǎng)線。在一些實(shí)施方案中，連續(xù)的或不連續(xù)的涂覆物對(duì)于從蛋內(nèi)出來(lái)或進(jìn)入蛋中的氣體交換是惰性的。換言之，通過(guò)所應(yīng)用的組合形成的涂覆物不干擾蛋的內(nèi)部(蛋內(nèi))和外表面之間的氧氣或其他氣體交換。在一些實(shí)施方案中，生物防治制劑被維持在內(nèi)膜外部，并且不滲入越過(guò)蛋的內(nèi)膜，即，不與內(nèi)部蛋和蛋清接觸。生物防治組合可以在從產(chǎn)蛋之日直至孵化或者出于售賣或者其他目的從孵化器或其他類型的圍養(yǎng)區(qū)(例如，當(dāng)?shù)笆强墒秤玫皶r(shí))取出之日的時(shí)間段期間被使用一次或多于一次。盡管生物防治制劑的單次應(yīng)用可以滿足達(dá)到期望的消毒效果的需要，但是在一些實(shí)施方案中制劑被應(yīng)用至少兩次，有時(shí)三次或者甚至更多次，直至蛋被孵化或者被從圍養(yǎng)區(qū)/孵化器取出。在一些其他實(shí)施方案中，通過(guò)單次將由此形成的制劑應(yīng)用到蛋上一次并然后將蛋維持在連續(xù)地或周期性地包含生物防治制劑的霧環(huán)境中來(lái)使用生物防治組合?，F(xiàn)在轉(zhuǎn)向生物防治組合的第一組分和第二組分的內(nèi)容物：生物防治組合的第一組分和第二組分的內(nèi)容物(組成)在本文下文進(jìn)行描述，并且在具有公布號(hào)wo2014/170894的國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)杙ct/il2014/050348中進(jìn)一步詳細(xì)描述，所述專利的內(nèi)容通過(guò)引用以其整體并入本文。如以上指出的，在使用之前將第一組分和第二組分混合在一起。該混合之后，獲得穩(wěn)定的乳狀液，然后所述乳狀液可以用水稀釋，并且適用于應(yīng)用到待消毒的蛋上。在一些實(shí)施方案中，混合包括首先將至少一種第一組分懸浮于水中以形成乳狀液，并且然后將乳狀液與至少一種第二組分混合。可以在制備的任何階段添加另外的物質(zhì)，諸如無(wú)機(jī)鹽。第一組分包含容納至少一種天然油的顆粒物質(zhì)。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，術(shù)語(yǔ)“顆粒物質(zhì)”用于表示多個(gè)顆粒形式的物質(zhì)。顆粒可呈任何顆粒形式，包括但不限于從細(xì)圓珠到無(wú)定形結(jié)構(gòu)。顆粒物質(zhì)包括任何形式的粉末。在一些實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)包含二氧化硅(silicadioxide)(sio2，在本文中被簡(jiǎn)稱為二氧化硅(silica))。二氧化硅可以是諸如膨潤(rùn)土珠的天然地存在的二氧化硅顆粒，以及合成的二氧化硅珠。在一些實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)包含合成的二氧化硅顆粒。存在可被用于本公開(kāi)內(nèi)容的上下文的多種合成的二氧化硅顆粒。例如，顆粒物質(zhì)可以包含沉淀的合成的無(wú)定形二氧化硅珠，諸如商業(yè)上可得的產(chǎn)品tixosil、sipernat50s(sio2,20μm)和aerosil200。在一些其他實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)包含具有吸收天然油的能力的合成的或天然來(lái)源的珠。此類珠可包括但不限于乳膠珠；碳酸鈣吸收顆粒(calciumcarbonatesorbentparticle)；纖維素珠；聚苯乙烯吸收珠例如，-2，其是疏水交聯(lián)的聚苯乙烯共聚物吸收樹(shù)脂；木炭；sepharosetm珠；乳化劑-藻酸鹽珠；殼聚糖珠；藻酸鈉；苯乙烯-順丁烯二酸共聚物珠和苯乙烯-二乙烯基苯珠；纖維素紙珠。為了允許最終的制劑的良好分布并根據(jù)一些實(shí)施方式，顆粒物質(zhì)(顆粒)具有在10-25μm范圍內(nèi)的尺寸分布。顆粒物質(zhì)還可以通過(guò)，但并不限于表面積和油容量的一個(gè)或更多個(gè)來(lái)表征，在一些實(shí)施方案中，所述表面積在400-500m2n2/g的范圍內(nèi)，所述油容量在300-350dbp/100克顆粒的范圍內(nèi)。至少一種第一組分包含容納一種天然油或天然油的組合的顆粒物質(zhì)。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，應(yīng)理解“天然油”包括從自然界獲得的任何有機(jī)油。天然油優(yōu)選地是源自植物的油。在一些實(shí)施方案中，天然油被稱為精油。精油優(yōu)選地是已知表現(xiàn)出抗微生物(例如，抗細(xì)菌的、抗真菌的、抗線蟲(chóng)的)特性的那些。當(dāng)提及抗微生物特性時(shí)，其應(yīng)被理解為有效地抵抗如以下進(jìn)一步討論的任何微生物病原體。不限于以下，待使用的根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容的精油可以是源自以下植物的那些：牛至(origanumvulgare)和牛至種(origanumspp.)(例如，牛至(oregano))、薄荷種(menthaspp.)(薄荷)、百里香種(thymusspp.)(百里香)、香桃木種(myrtusspp.)、羅勒種(ocimunspp.)(例如，羅勒(ocimunbasilicum)，也被稱為羅勒(basil))、薰衣草種(lavandulaspp.)(例如，薰衣草)、姜味草種(micromeriaspp.)、芫荽種(coriandumspp.)(例如，芫荽/荷蘭芹)、阿萊藤種(aloysiaspp.)、melissaspp.、鼠尾草種(salviaspp.)、歐芹種(petroselinumspp.)、迷迭香種(rosmarinusspp.)(例如，迷迭香)、夏枯草種(prunellaspp.)、孜然芹種(cuminumspp.)(例如，孜然芹)。在一些其他實(shí)施方案中，天然油是用作拮抗微生物的碳源，例如用作養(yǎng)料/營(yíng)養(yǎng)素的植物來(lái)源的油。在本文中這些被稱為術(shù)語(yǔ)“碳基油(carbon-baseoil)”或“富含碳的營(yíng)養(yǎng)油(carbon-richnutrientoil)”。在一些實(shí)施方案中，碳基油是植物油。不限于以下，碳基油選自由以下組成的組：芝麻油、橄欖油、花生(peanut)油、棉籽油、大豆油、棕櫚油、葵花油、紅花油、菜籽油、蓖麻油、椰子油、落花生(groundnut)油。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，當(dāng)提及“天然油”時(shí)，其應(yīng)被理解為指單一類型的油以及指油的組合。在一些實(shí)施方案中，天然油包括至少一種精油和至少一種碳基油的組合，所述至少一種精油和所述至少一種碳基油兩者均是天然來(lái)源的。在一些實(shí)施方案中，天然油至少包含牛至油與至少一種碳基油組合。有時(shí)，牛至油與至少芝麻油組合。依據(jù)使用的天然油的類型、裝載的量、顆粒物質(zhì)的類型、將天然油裝載到顆粒物質(zhì)上的條件、用于裝載的表面活性劑或溶劑等，第一組分內(nèi)的(例如，由顆粒物質(zhì)容納的)天然油的量可以變化。當(dāng)提及將油裝載到顆粒物質(zhì)上時(shí)，其應(yīng)被理解為意指在油和顆粒物質(zhì)(例如，二氧化硅顆粒)之間的任何形式的締合。不限于以下，油通過(guò)被吸收到顆粒上和/或被吸收進(jìn)顆粒中而被顆粒物質(zhì)容納。顆粒和油之間的締合是可逆的，即在合適的條件下，諸如當(dāng)與水接觸時(shí)，油被容易地從顆粒釋放以形成乳狀液。在一些實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)容納按顆粒物質(zhì)的總重量計(jì)(在裝載之后)在20％至50％w/w之間的天然油。這通過(guò)常規(guī)技術(shù)諸如hplc或gc色譜法來(lái)確定，如以下還示例的。在一些其他實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)容納約30％w/w的天然油(“約”包括在25-35％之間、有時(shí)在28％至32％之間或在30％左右的范圍)。在一些實(shí)施方案中，天然油僅包含精油或包含至少一種精油和至少一種碳基(富含碳的)油的組合。如此，當(dāng)提及天然油時(shí)，其應(yīng)被理解為包含精油以及碳基油。至少一種精油和至少一種碳基油之間的比率在60:40和100:0的范圍內(nèi)，有時(shí)范圍是約80:20。當(dāng)使用油的組合時(shí)，應(yīng)理解它們可以一起被吸收到顆粒物質(zhì)上，即相同的顆粒物質(zhì)容納超過(guò)一種類型的油。在一些實(shí)施方案中，為了易于操作，使每種油類型被分別地容納在顆粒物質(zhì)上以使得形成不同類型的顆粒物質(zhì)，每種通過(guò)其容納的油的類型來(lái)表征。因此，當(dāng)提及以80:20的比率提供牛至和芝麻的顆粒物質(zhì)時(shí)，其應(yīng)被理解為顆粒物質(zhì)的兩個(gè)群體的混合物，80％攜帶牛至油并且20％的類型攜帶芝麻油；或顆粒的單個(gè)群體，每個(gè)顆粒以定義的或期望的比率吸收兩種油(即，油是預(yù)先混合的并且然后與吸收運(yùn)載體/顆粒接觸)。與油的類型無(wú)關(guān)，顆粒物質(zhì)總重的20％至50％w/w由顆粒物質(zhì)上裝載的油提供。顆粒物質(zhì)還可包含至少一種表面活性劑。如廣泛認(rèn)同的，表面活性劑是降低液體的表面張力以及同樣地兩種液體之間的界面張力以允許形成例如乳狀液的化合物。表面活性劑可以是在本領(lǐng)域被認(rèn)為使用安全的(例如，對(duì)植物或動(dòng)物無(wú)毒的)任何種類，包括離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽(yáng)離子表面活性劑以及兩性離子(或非離子)表面活性劑。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑是有機(jī)農(nóng)業(yè)中可接受的類型。根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容待使用的可能的表面活性劑的非限制性列舉包括聚乙二醇、山梨醇酐三油酸酯(tween，例如，tween85、tween65、tweenr85)、山梨醇酐脂肪酸酯(例如，span40)、蛋黃卵磷脂、zoharlq-215(脂肪酸鉀)和zoharpt-50(脂肪酸鉀)、香芹酚(carvacrol)。在一些其他實(shí)施方案中，表面活性劑包括脂肪酸的鹽。鹽可包括堿性的如鉀鹽、鈣鹽、鈉鹽以及銨鹽。在一些實(shí)施方案中，脂肪酸的鹽包括脂肪酸的鉀鹽(也被稱為皂鹽)，所述脂肪酸的鹽有時(shí)被用作殺蟲(chóng)劑、除草劑、殺真菌劑和/或除藻劑。在一些實(shí)施方案中，可通過(guò)將氫氧化鉀添加到天然的脂肪酸來(lái)獲得脂肪酸的鉀鹽，所述天然的脂肪酸諸如在動(dòng)物脂肪中和在植物油中發(fā)現(xiàn)的那些?？梢詮拈蠙?、棉籽、大豆、花生、向日葵、椰子、棕櫚、油菜籽、芝麻油、莧菜、玉米、麻風(fēng)樹(shù)提取脂肪酸。形成表面活性劑的脂肪酸還可以是合成的脂肪酸以及半合成的(例如，經(jīng)過(guò)修飾的天然的脂肪酸)。根據(jù)一些實(shí)施方案，至少一種表面活性劑為被識(shí)別為或標(biāo)記為具有殺蟲(chóng)劑和/或殺真菌劑活性的表面活性劑。不限于以下，殺蟲(chóng)的和/或殺真菌的表面活性劑可包括商業(yè)產(chǎn)品zoharpt-50和zoharlq-215，兩者均由zohardalia,israel生產(chǎn)。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，表面活性劑選自zoharpt-50和zoharlq-215。這些表面活性劑的組成是從zohardalia可得的。例如，已知zoharpt-50具有如以下表1中所示的組成：表1:表面活性劑組成第一組分中的表面活性劑的量可變化。但是，在一些實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)包含在5％至10％w/w之間的表面活性劑或表面活性劑的組合。在與第二組分混合之前，第一組分包含顆粒物質(zhì)，呈基本干燥的形式。當(dāng)提及“基本干燥”時(shí)，應(yīng)理解，第一組分可以包含低量的水，在一些實(shí)施方式中，不超過(guò)10％(w/w)。在一些其他或另外的實(shí)施方案中，第一組分中的水含量在1％至7％(w/w)的范圍內(nèi)。在又一些其他的實(shí)施方案中，“基本干燥”應(yīng)被理解為不包含通過(guò)常規(guī)方法檢測(cè)到的水(即，無(wú)可檢測(cè)量的水)。第一組分還可以包含一些痕量的有機(jī)溶劑。如以下將進(jìn)一步討論的，溶劑可以是制備顆粒物質(zhì)所必需的并且一些殘留量可以保留，只要溶劑是無(wú)毒的。在一些實(shí)施方案中，第一組分是無(wú)溶劑的(即，不包含可檢測(cè)量的有機(jī)溶劑)或包含痕量即不超過(guò)5％、4％、3％或甚至2％w/w的有機(jī)溶劑。溶劑通常是有機(jī)揮發(fā)性的極性溶劑，諸如，不限于以下，選自由以下組成的組的溶劑：丙酮、異丙醇(isopropylalcohol)(異丙醇(isopropanol)，ipa)、乙腈、丙酮、乙醇和甲醇。在一些實(shí)施方案中，在第一組分中檢測(cè)到痕量醇(alcohol)。第一組分的顆粒物質(zhì)的獨(dú)特之處在于其在使顆粒物質(zhì)與水或者與第二組分接觸后形成穩(wěn)定的乳狀液的能力。這特別是由于第一組分中表面活性劑的存在而被實(shí)現(xiàn)。表面活性劑在使組分干燥之前被添加到帶有油的顆粒中。當(dāng)提及穩(wěn)定的乳狀液時(shí)，其應(yīng)被理解為指在乳狀液形成之后，油(被分散的相)在水(分散媒介物)中的分散持續(xù)至少1小時(shí)、有時(shí)至少2、3、4、5、10、12或甚至24小時(shí)的時(shí)期。換言之，穩(wěn)定性通過(guò)不分離成油相和水相來(lái)確定?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方式(包括可視檢測(cè))來(lái)確定不分離。為了形成乳狀液，將顆粒物質(zhì)與水或者與第二組分中包含的水混合。水的量取決于顆粒物質(zhì)的量。在一些實(shí)施方案中，對(duì)于每克顆粒物質(zhì)(其30％是油)，添加水以提供一升乳狀液。如此，在1升乳狀液中，0.1克顆粒物質(zhì)提供0.03％(v/v)的油濃度。在一些實(shí)施方案中，最終的乳狀液中油的百分比在0.03％和2％v/v的范圍內(nèi)。在一些實(shí)施方案中，顆粒物質(zhì)與水的混合提供了具有在1μm至20μm之間的范圍并且在一些實(shí)施方案中在3μm至10μm之間的范圍的液滴尺寸的乳狀液。在一些實(shí)施方案中，乳狀液是抗微生物乳狀液?；氐降诙M分，其具有拮抗活性。在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中，當(dāng)提及微生物病原體的拮抗物(拮抗性細(xì)菌)或病原體拮抗物時(shí)，應(yīng)被理解為抑制植物病原體(植物病原體(plantpathogen)也可被稱為植物病原體(phytopathogen))的生物學(xué)實(shí)體。抑制，在本公開(kāi)內(nèi)容的上下文中應(yīng)被理解為使病原體的生長(zhǎng)減少至少50％、至少70％、至少90％或甚至基本上消除病原體。在本發(fā)明的上下文中，植物病原體可以是任何原核或真核生物，包含但不限于細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、線蟲(chóng)或任何其他引起病害的寄生蟲(chóng)。如此，至少一種拮抗物的微生物活性可以是抗細(xì)菌的、抗真菌的、抗原生動(dòng)物的、抗線蟲(chóng)動(dòng)物等的任何一種。第二組分包括至少兩種拮抗性細(xì)菌并且在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二組分包含若干拮抗物的混合物?；旌衔飸?yīng)被理解為以相同的或不同的濃度組合在一起的兩種或更多種、有時(shí)3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15種拮抗物的組合。在一些實(shí)施方案中，至少一種拮抗物是能在作為唯一碳源的芝麻油上生長(zhǎng)的類型。此類拮抗物可通過(guò)以下來(lái)容易地鑒定：利用芝麻作為唯一碳源進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)測(cè)定并鑒定實(shí)驗(yàn)生長(zhǎng)期間存活的那些品種。具體地，可以根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容使用的拮抗性細(xì)菌是可以區(qū)別于針對(duì)至少導(dǎo)致番茄細(xì)菌潰瘍病的clavibactermichiganensissubsp.michiganensis(cbm)不具有拮抗活性的其他細(xì)菌的細(xì)菌，或者是能夠在碳基油諸如芝麻油上生長(zhǎng)的細(xì)菌。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有的拮抗性細(xì)菌在其上生長(zhǎng)(而測(cè)試的非拮抗性細(xì)菌不生長(zhǎng))的碳基油是芝麻油。在一些實(shí)施方案中，拮抗物可被稱為抑細(xì)菌劑，即其減慢生物體的生長(zhǎng)，并且在一些其他的實(shí)施方案中，拮抗物可被稱為殺細(xì)菌劑(bactericide)，即其殺死生物體。在一些實(shí)施方案中，微生物病原體的至少一種拮抗物是土傳拮抗物。在該上下文中，應(yīng)理解可從對(duì)微生物病原體顯示出耐受性(例如，部分地抵抗)或抵抗的植物的根、土壤和/或根際獲得和分離所述至少一種拮抗物。在一些其他的實(shí)施方案中，微生物病原體的拮抗物是植物來(lái)源的拮抗物，例如，從植物的部分諸如葉、莖、花、維管系統(tǒng)分離的。微生物病原體的拮抗物也可以是存在于并且因此源自土壤(即，土傳的)和源自植物的部分(例如，維管系統(tǒng))。如上文指出的，至少一種第二組分可以包含多于兩種拮抗物。在一些實(shí)施方案中，第二組分在相同的凝膠中包含若干種拮抗物的組合，即混合物。但是，在一些其他實(shí)施方案中，當(dāng)使用拮抗物的組合時(shí)，它們能夠各自通過(guò)單獨(dú)的凝膠攜帶并且僅在使用之前混合。當(dāng)使用兩種或更多種拮抗性細(xì)菌的組合時(shí)，該組合在本文中被稱為拮抗混合物。當(dāng)使用拮抗物的組合時(shí)，可以以相同的量(cfu/ml)或以不同的量將拮抗物提供/應(yīng)用至植物。根據(jù)一些實(shí)施方案，第二組分中的拮抗物(作為單一的拮抗物或作為拮抗物的混合物)的量可在500cfu/ml至5,000cfu/ml之間的范圍內(nèi)。當(dāng)作為混合物使用時(shí)，拮抗物之間的比率可依據(jù)待處理的病原體的類型而變化，且可通過(guò)常規(guī)實(shí)驗(yàn)室方法，例如，在培養(yǎng)皿中最好的抑細(xì)菌/殺細(xì)菌效果提前確定。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選的拮抗物選自由以下組成的組：假單胞菌種(pseudomonasspecies)(登錄號(hào)cbs133252)、嗜堿性假單胞菌(pseudomonasalcaliphila)(登錄號(hào)cbs133254)、枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)(登錄號(hào)cbs133255)、pseudomonascedrina(登錄號(hào)cbs133256)、假單胞菌種(登錄號(hào)cbs133257)、假單胞菌種(登錄號(hào)cbs133258)、假單胞菌種(登錄號(hào)cbs134568)、pseudomonasspanius(登錄號(hào)cbs133259)、地中海假單胞菌(pseudomonasmediterranea)(登錄號(hào)cbs134566)、綠針假單胞菌(pseudomonaschlororaphis)(登錄號(hào)cbs134567)。可以與以上列出的至少一種拮抗物組合使用的其他拮抗物在internationalorganizationforbiologicalandintegratedcontrolofnoxiousanimalsandplants的報(bào)告的表4中提供[由philippec.nicot2011編輯]，其內(nèi)容通過(guò)引用并入本文。另外，待與以上列出的至少一種優(yōu)選的拮抗物組合的拮抗物可見(jiàn)于多個(gè)文獻(xiàn)中，諸如但不限于以下文獻(xiàn)，其通過(guò)引用并入本文：如以上指出的，在一些實(shí)施方案中，拮抗物是能夠在作為唯一碳源的芝麻油上生長(zhǎng)的類型。為了制備生物防治制劑(以乳狀液形式的)，使用水(除了來(lái)自凝膠的水以外)。當(dāng)添加水時(shí)，水的總量將取決于第一組分的量。在一些實(shí)施方案中，對(duì)于每克第一組分(例如，其30％是油)，添加水以提供一升第一組分的乳狀液。如此，在1升乳狀液中，0.1g顆粒物質(zhì)提供0.03％v/v的油濃度。在一些實(shí)施方案中，最終的乳狀液中油的百分比在0.03％和2％v/v的范圍內(nèi)。根據(jù)以上，可以由20克第一組分(其30％是油)的粉末和120ml第二組分的拮抗物凝膠，并且將第一組分和第二組分與水混合以形成包含0.3％v/v油的20升乳狀液，來(lái)提供最終的制劑。相似地，可以由50克或100克第一組分的粉末和120ml第二組分的拮抗物凝膠，并且將第一組分和第二組分與水混合以形成50或100升乳狀液，來(lái)提供生物防治制劑。在一些實(shí)施方案中，第一和第二組分還與至少一種無(wú)機(jī)鹽組合。如在非限制性實(shí)例中顯示的，無(wú)機(jī)鹽的添加提供了消毒效果的改善，因?yàn)槠渲辽僭黾恿松锓乐沃苿┑挚拐婢L(zhǎng)的活性譜和/或效力。有多種無(wú)機(jī)鹽可根據(jù)本公開(kāi)內(nèi)容被使用。不限于以下，無(wú)機(jī)鹽可以是選自由以下組成的組的一種或更多種鹽：硝酸銨、硫酸銨(ammoniumsulfate)、硫代硫酸銨(ammoniumthiosulfate)、硝酸銨鈣、硝酸鈣、磷酸氫二銨、磷酸二氫鈣、氯化鉀、硝酸鉀和硫酸鉀。在一個(gè)實(shí)施方案中，無(wú)機(jī)鹽是磷酸氫二銨(dap)。在一些實(shí)施方案中，無(wú)機(jī)鹽是在相對(duì)于第一組分1％至3％w/w之間的量，有時(shí)，在約1.5％和約2.5％之間或者約2％的量。無(wú)機(jī)鹽可以作為第三組分被添加至最終制劑，或者可以被包含在第一組分中。如此，并且根據(jù)一些實(shí)施方案，第一組分包含至少一種無(wú)機(jī)鹽。在一些實(shí)施方案中，無(wú)機(jī)鹽通過(guò)顆粒物質(zhì)攜帶。一些非限制性實(shí)施例的描述生物防治制劑用于蛋的生物防治的制劑通過(guò)將兩種組分干燥的顆粒物質(zhì)和拮抗性細(xì)菌混合物混合來(lái)制備。精油粉末的制備材料為了制備所述油粉末，使用以下材料：天然油：100％牛至油(精油)和100％芝麻油(碳基油)，兩者均購(gòu)自makesscentsnaturalspaline,lancasterpa,usa。表面活性劑：購(gòu)自sigma-aldrich的香芹酚。二氧化硅珠：購(gòu)自evonikindustriesag的sipernat50s(sio2,20μm)。溶劑：異丙醇(ipa)，gadot。方法對(duì)于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模生產(chǎn)，包含天然油、表面活性劑和二氧化硅珠的粉末利用包括20-50ml容量的實(shí)驗(yàn)室瓶、藥匙(spatulas)、磁力攪拌器和加熱板的常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)室玻璃器皿裝置來(lái)制備。通常，對(duì)天然油稱重并在向其加入了溶劑的20ml小瓶中將每種天然油單獨(dú)地與選擇的表面活性劑混合。將每種油的混合物混合并加熱至約40℃的溫度，直到獲得均勻溶液。將二氧化硅珠添加至該均勻溶液中，直到液體被珠吸收。將瓶置于通風(fēng)櫥中過(guò)夜，直到所有的溶劑被蒸發(fā)。在最終的干燥粉末中每種油的載量是30-42％。干燥粉末包含2％-7％的水。用于油粉末的替代性制劑在具有公布號(hào)wo2014/xxxxxx的國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)杙ct/il2014/050348中詳細(xì)描述，所述專利的內(nèi)容通過(guò)引用以其整體并入本文。拮抗混合物的制備材料拮抗混合物包含土傳細(xì)菌的混合物作為活性成分。用于生產(chǎn)的分離、鑒定和培養(yǎng)基條件在具有公布號(hào)wo2014/xxxxxx的國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)杙ct/il2014/050348中詳細(xì)描述，所述專利的內(nèi)容通過(guò)引用以其整體并入本文。表1提供了于2012年11月19日保藏在cbs-knaw研究院并用于最終的組合/混合物的菌種的列表。這些菌種貯存在-80℃下的甘油溶液中(15％)。表1:保藏的拮抗物拮抗物登錄號(hào)名稱假單胞菌種cbs133252bn12-27a嗜堿性假單胞菌cbs133254bn12-28枯草芽孢桿菌cbs133255bn12-29pseudomonascedrinacbs133256bn12-30假單胞菌種cbs133257bn-12-31假單胞菌種cbs133258bn12-32pseudomonasspaniuscbs133259bn12-33地中海假單胞菌an1cbs134566bn13-01綠針假單胞菌an10cbs134567bn13-02假單胞菌種an21cbs134568bn13-03方法制備拮抗微生物凝膠將表1中所列的分離的拮抗物單獨(dú)地轉(zhuǎn)移到包含補(bǔ)充有0.15％粒狀瓊脂(difco)的用于增殖的培養(yǎng)基(蛋白胨(10克/升)、酵母提取物(20克/升)、甘油(10克/升)、mgso4(0.1克/升)、caco3(2克/升))的錐形燒瓶?jī)?nèi)，且每種拮抗物濃度在107至108cfu/ml之間，并在28℃下振搖72小時(shí)。然后，在室溫下使得到的凝膠樣混合物保持凝膠形式直到使用。已顯示拮抗物可以以這種形式保存多達(dá)12個(gè)月而細(xì)菌群體的減少以對(duì)數(shù)級(jí)(logarithmicorder)計(jì)不超過(guò)2。細(xì)菌長(zhǎng)期儲(chǔ)存以包含瓊脂的培養(yǎng)基的形式維持拮抗性細(xì)菌，所述培養(yǎng)基被發(fā)現(xiàn)支持拮抗性細(xì)菌長(zhǎng)期(294天)存活。表1中列出的拮抗性細(xì)菌的每種還通過(guò)它們以牛至油為唯一碳源而存活長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)間段的能力被表征。生物防治制劑的制備在應(yīng)用到蛋上之前，通過(guò)將攜帶牛至油和芝麻油的干燥的顆粒物質(zhì)與攜帶呈混合物的107-108cfu/ml的每種細(xì)菌的瓊脂凝膠混合來(lái)制備生物防治制劑。然后，將混合物用水稀釋以獲得不少于103cfu/ml的每種細(xì)菌的濃度。最終油顆粒物質(zhì)的濃度通過(guò)重量/體積液體定義。在本文提供的多種實(shí)驗(yàn)中，顆粒物質(zhì)的濃度在0.02％-2.0％的范圍內(nèi)，并且對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確濃度在其中的相關(guān)文本中指出。將油顆粒物質(zhì)和細(xì)菌混合物與適量的水混合至預(yù)定的濃度(在以上定義的范圍內(nèi))之后，即制備了生物防治混合物并且其在從制備時(shí)起的12小時(shí)的時(shí)間段內(nèi)隨時(shí)可用。為了增加活性，還將以下添加劑的一種或更多種以相對(duì)于顆粒物質(zhì)的重量2％w/w的濃度混合到制劑中：碳酸鈣、硫酸鎂、碳酸氫鉀、磷酸氫二銨。然后將組分用水稀釋至50l的總體積，包含0.3％的凝膠和0.5％的粉末。蛋的消毒對(duì)已受精的雞孵化蛋進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)。每個(gè)研究組包括15枚從其產(chǎn)生多至24小時(shí)齡的蛋。生物防治制劑通過(guò)顆粒物質(zhì)的重量/體積來(lái)定義。拮抗混合物中每種細(xì)菌的量相同，并且在以上陳述的范圍內(nèi)。實(shí)施例i將被分成5個(gè)處理組的總計(jì)75枚蛋(每組15枚)用生物防治制劑壓力噴灑直至過(guò)量制劑流出。每組用不同濃度的顆粒物質(zhì)處理，如在表2中詳細(xì)描述的：表2：在500ml壓力噴灑器中用不同濃度消毒處理號(hào)顆粒物質(zhì)的濃度顆粒物質(zhì)的量1水020.2％0.5克30.4％1.0克40.8％2.0克51.0％2.5克然后允許蛋空氣干燥持續(xù)8小時(shí)，在該點(diǎn)使用以下技術(shù)中的一項(xiàng)檢查每枚蛋：-使用雙末端攜帶培養(yǎng)基的拭子收集樣品，一側(cè)用于收集細(xì)菌(攜帶適用于培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基)，并且另一側(cè)用于收集真菌(攜帶適用于培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)基)。-通過(guò)以下收集樣品：在從蛋收集樣品之前用無(wú)菌水打濕雙尖棉拭子，并且然后通過(guò)用棉尖在蛋殼上擦拭從每枚蛋收集樣品。然后將每個(gè)棉尖從拭子上取出并且置于包含9.5ml無(wú)菌水的無(wú)菌管中并且渦旋。將該管用作用于樣品的多個(gè)稀釋物的來(lái)源；然后將每個(gè)稀釋的樣品以一式兩份置于具有用于培養(yǎng)真菌或者用于培養(yǎng)大腸菌群(coliform)的培養(yǎng)基的皮氏培養(yǎng)皿上。在37℃下孵育5天之后計(jì)數(shù)菌落的數(shù)目并且將代表性的結(jié)果提供于表3中。表3：用不同生物防治濃度消毒之后的菌落形成單位值得注意的是，該測(cè)定重復(fù)很多次，并且每次提供相似的結(jié)果。這些結(jié)果表明，盡管事實(shí)上細(xì)菌比病原真菌對(duì)消毒處理更加敏感，消毒處理在減少蛋上的病原體污染上是顯著有效的。在一個(gè)另外的實(shí)驗(yàn)中，對(duì)人為用大腸桿菌污染的蛋(作為陽(yáng)性對(duì)照)測(cè)試生物防治制劑的效果。具體地，使用電噴灑器(bosh,pfs55)用大腸桿菌的溶液噴灑蛋直至液體流出，并且允許蛋干燥持續(xù)約4小時(shí)，此后用生物防治制劑(顆粒濃度為0.8％)處理蛋。實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次，每次每個(gè)測(cè)試組6枚蛋?？諝飧稍?小時(shí)之后，使用用無(wú)菌水打濕的雙尖棉拭子測(cè)試每枚蛋并且在殼的不同區(qū)域在蛋殼上用棉尖擦拭至少4次。然后將每個(gè)棉尖從拭子上取出并且置于包含5ml無(wú)菌水的無(wú)菌管中并且充分渦旋。將該管用作用于樣品的多個(gè)稀釋物的來(lái)源；然后將每個(gè)稀釋的樣品置于具有適用于細(xì)菌或真菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基的皮氏培養(yǎng)皿上，并且對(duì)于細(xì)菌在35℃下孵育48小時(shí)，或者對(duì)于真菌在28℃下孵育5天。然后對(duì)菌落計(jì)數(shù)并且將那些可疑的菌落送去鑒定。將程序重復(fù)5次，并且將三次的結(jié)果提供于表4中：表4：用不同生物防治濃度消毒之后的菌落形成單位結(jié)果表明盡管人為噴灑蛋(以對(duì)數(shù)級(jí))顯著增加病原體計(jì)數(shù)，用生物防治制劑消毒有效抵抗細(xì)菌污染和真菌污染二者。在又一個(gè)另外但是條件相同的實(shí)驗(yàn)中，用每組170枚(總計(jì)850枚蛋)獲得相似的結(jié)果，表明從0.4％的濃度起在處理有效性上沒(méi)有差異?；谝陨?，使用包含0.6％(1.0克)、0.8％(2.0克)和1.0％(2.5克)的制劑進(jìn)行若干相同測(cè)試，將水用作對(duì)照。表5a-5b顯示在(提供相似結(jié)果和相同結(jié)論的若干實(shí)驗(yàn)中的)兩個(gè)示例性實(shí)驗(yàn)中獲得的結(jié)果。表5a：用不同生物防治濃度處理之后的菌落形成單位表5b：用不同生物防治濃度處理之后的菌落形成單位實(shí)施例ii-效果的持續(xù)時(shí)間在一個(gè)另外的實(shí)驗(yàn)中，評(píng)價(jià)消毒處理的有效性的持續(xù)時(shí)間。具體地，如下文所示，確定來(lái)自處理當(dāng)天和處理后若干天的病原體污染的量。具體地，用包含0.8％(2克)顆粒物質(zhì)的生物防治制劑或者水(作為對(duì)照)處理蛋(15枚)。使用棉拭子從蛋殼表面采集樣品(如以上描述的)，并且孵育5天，如以上(實(shí)施例i)描述的。病原體計(jì)數(shù)提供于表6中：表6：用不同生物防治濃度處理之后的菌落形成單位結(jié)果表明，消毒處理甚至在噴灑后多達(dá)10天也是有效的。值得注意的是，盡管對(duì)照組中的計(jì)數(shù)也減少，但僅在生物防治處理后計(jì)數(shù)減少到“0”。實(shí)施例iii-添加劑對(duì)真菌生長(zhǎng)的影響檢查了多種添加劑對(duì)真菌生長(zhǎng)的影響。檢查的真菌包括鐮孢菌種的兩個(gè)分離株(分離株#1和分離株#2)、小核菌屬和木霉屬。檢查無(wú)生物防治制劑時(shí)以下無(wú)毒添加劑的效果：碳酸氫鈉、磷酸氫二銨、七水合硫酸鎂、碳酸氫鉀。基于發(fā)明人以前的經(jīng)驗(yàn)選擇這些添加劑作為真菌生長(zhǎng)抑制劑。表7總結(jié)了在菌落尺寸上(以厘米計(jì))添加的每種添加劑的量。皮氏培養(yǎng)皿中菌落的尺寸(直徑)越大，添加劑的抑制效果越低。處理之前菌落的初始直徑是0.5cm。因此，處理之后，0.5cm的直徑指示添加劑有效阻止菌落生長(zhǎng)。結(jié)果還表明，磷酸氫二銨在阻止真菌生長(zhǎng)方面最有效。表7：添加劑對(duì)真菌生長(zhǎng)的影響n＝未檢測(cè)到生長(zhǎng)鑒于表7中呈現(xiàn)的結(jié)果，選擇磷酸氫二銨用于與生物防治制劑組合。具體地，將一定量的磷酸氫二銨(2％w/vdap)添加至新鮮制備的包含0.4％w/v的第一組分(顆粒)的生物防治制劑中。檢查與對(duì)照(僅水處理)相比混合物對(duì)真菌生長(zhǎng)的影響，其結(jié)果呈現(xiàn)于表8中。表8：磷酸氫二銨對(duì)真菌生長(zhǎng)的效果真菌制劑0.4％制劑0.4％+dap對(duì)照(僅水)鐮孢菌種(#1)--+++鐮孢菌種(#2)--+++小核菌屬+-+++木霉種++-+++在該表中，“+++”指示顯著的真菌生長(zhǎng)，即特定處理無(wú)抑制效果，“++”指示中等生長(zhǎng)，即對(duì)真菌生長(zhǎng)的部分抑制效果；“+”指示一些但不顯著的生長(zhǎng)，即對(duì)生長(zhǎng)的高度效果，并且“-”指示無(wú)生長(zhǎng)，即，顯著的抗真菌效果。結(jié)果表明向生物防治制劑中添加商購(gòu)可得的肥料dap，增加了生物防治制劑抵抗真菌生長(zhǎng)的活性譜和效力。實(shí)施例iv-生物防治制劑對(duì)孵化的影響還檢查了生物防治制劑對(duì)孵化百分比的影響。在同一天收集來(lái)自相同群的蛋并且孵育。將每枚蛋用電噴灑器(boshpfs55)用生物防治制劑噴灑(降低的粉末濃度百分比(下表中所示的百分比)，并且每種細(xì)菌的恒定濃度為103cfu/ml)，直至流出。作為陽(yáng)性對(duì)照，一組蛋用博滅特(bromosept)50％(50％二癸基二甲基溴化銨溶液)，一種用于家禽和其他牲畜的商業(yè)消毒劑進(jìn)行類似地噴灑。實(shí)驗(yàn)包括5次重復(fù)，每次重復(fù)包括80枚蛋(檢查總計(jì)400枚蛋)。將每個(gè)處理組置于單獨(dú)的托盤上。在孵化那天，計(jì)數(shù)(根據(jù)常規(guī)標(biāo)準(zhǔn))適用于銷售的雛雞，并且將結(jié)果總結(jié)于表9中：表9：生物防治制劑對(duì)孵化的影響消毒處理％孵化％可銷售的雛雞博滅特50％87.682.80.2％87.483.00.4％87.883.10.8％87.582.81.0％87.682.5結(jié)果表明，生物防治制劑至少與商業(yè)上標(biāo)準(zhǔn)的博滅特50％一樣有效。實(shí)施例v-生物防治制劑對(duì)可食用的(未受精的)蛋新鮮度的影響該研究的目的是為了確定本文公開(kāi)的生物防治制劑對(duì)以下對(duì)于可食用蛋的質(zhì)量重要的因素的影響。-防治由大腸菌群細(xì)菌引起的帶殼蛋污染；-防治由真菌和霉菌引起的帶殼蛋污染；-防止污染物滲入殼；-改善蛋的保質(zhì)期，通過(guò)沿著預(yù)定時(shí)間點(diǎn)(間隔)測(cè)量的根據(jù)哈夫單位的新鮮度保存水平確定的。材料和方法：在處理之前3小時(shí)從畜牧場(chǎng)收集新鮮未受精的蛋。處理組包括：對(duì)照組—其中蛋未接受處理處理組—其中通過(guò)ulv噴灑用包含2％的顆粒物質(zhì)和計(jì)數(shù)為5x104cfu/ml的細(xì)菌混合物的最終制劑處理蛋。將對(duì)照和處理組在不同溫度7℃-5℃；25℃±2℃；30℃±0.5℃和30℃±0.5℃下孵育。所有組都在室內(nèi)(正常)濕度或者，如果特別指出的話，在高于90％的濕度(高濕度)下孵育。總孵育時(shí)間是60天，并且從第1天起以10天的間隔采集6枚蛋的樣品用于檢查以下：(1)真菌群體；(2)細(xì)菌群體(大腸桿菌&沙門氏菌)；和(3)新鮮度—哈夫單位&等級(jí)，后者是根據(jù)以下蛋新鮮度指數(shù)：結(jié)果a.蛋表面上的污染以下表10a至10d提供了作為孵育溫度的函數(shù)的蛋表面上的大腸菌群(cfu/蛋代表大腸桿菌和沙門氏菌種的組合/總?cè)后w)、真菌的水平和蛋新鮮度等級(jí)。值是總?cè)后w的平均值–cfu/蛋；表10a-在5℃-7℃下孵育之后的蛋質(zhì)量組孵育時(shí)間(天)大腸菌群(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)等級(jí)對(duì)照1116aa處理101aa對(duì)照10138aa處理1002aa對(duì)照211014aa處理2101aa對(duì)照301214aa處理3001aa對(duì)照40913aa處理4000aa對(duì)照621016a處理6200aa表10b-在25℃下孵育之后的蛋質(zhì)量表10c-在25℃并且超過(guò)90％濕度(相對(duì)濕度)下孵育之后的蛋質(zhì)量組孵育時(shí)間(天)大腸菌群*(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)等級(jí)對(duì)照1125aa處理100aa對(duì)照1057500aa處理10070aa對(duì)照2168900b處理21550a對(duì)照303661440c處理301500a對(duì)照407002000c處理40075a對(duì)照628402600c處理622110b另外，參考圖1a和1b，所述圖顯示在25℃和>90％濕度下孵育14天之后處理的(圖1a)和未處理的(圖1b)蛋的照相圖像。蛋殼上的真菌生長(zhǎng)從圖1b上是清楚的。表10d-在30℃下孵育之后的蛋質(zhì)量值得注意的是，蛋黃散了或蛋黃干了表示在30℃下儲(chǔ)存30天或更多天，未維持蛋的新鮮度。b.蛋內(nèi)的污染以下表11a至11e提供了作為孵育溫度的函數(shù)的蛋內(nèi)的大腸菌群(cfu/蛋代表大腸桿菌和沙門氏菌種的組合/總?cè)后w)、真菌的水平(即污染物滲入的程度)。值是總?cè)后w的平均值–cfu/蛋；表11a-在5℃-7℃下孵育之后的蛋質(zhì)量處理孵育時(shí)間(天)大腸菌群(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)對(duì)照100處理100對(duì)照1000處理1000對(duì)照2100處理2100對(duì)照3000處理3000對(duì)照4000處理4000對(duì)照6200處理6200表11b-在25℃下孵育之后的蛋質(zhì)量處理孵育時(shí)間(天)大腸菌群(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)對(duì)照100處理100對(duì)照1000處理1000對(duì)照2100處理2100對(duì)照3000處理3000對(duì)照4000處理4000對(duì)照6203處理6200表11c-在25℃并且超過(guò)90％濕度(相對(duì)濕度)下孵育之后的蛋質(zhì)量表11d-在30℃下孵育之后的蛋質(zhì)量處理孵育時(shí)間(天)大腸菌群(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)對(duì)照100處理100對(duì)照1000處理1000對(duì)照2100處理2100對(duì)照3020處理3000對(duì)照4006處理4000對(duì)照6200處理6200表11d-在30℃下在高濕度(>90％rh)中孵育之后的蛋質(zhì)量處理孵育時(shí)間(天)大腸菌群(cfu/蛋)真菌(cfu/蛋)對(duì)照100處理100對(duì)照10187處理1004對(duì)照215322處理2122對(duì)照3013244處理30612對(duì)照4081067處理401118對(duì)照62307087處理629622本文以上呈現(xiàn)的結(jié)果導(dǎo)致以下結(jié)論：-蛋具有將病原體遞送到消費(fèi)者的可能性。-高濕度加速/支持可滲入到蛋內(nèi)的大腸菌群和真菌在蛋殼表面上的生長(zhǎng)。-在冰箱外的蛋儲(chǔ)存(溫度高于7℃)降低蛋新鮮度等級(jí)。-在所有的測(cè)試條件下，用本文公開(kāi)的制劑處理優(yōu)于對(duì)照(未處理的)，顯示出更好的等級(jí)和在帶殼蛋表面和蛋內(nèi)更少的被真菌和大腸菌群細(xì)菌(大腸桿菌和沙門氏菌種的復(fù)合物)的污染。當(dāng)前第1頁(yè)12