本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種誘導(dǎo)蘋果矮化砧木組培苗生根的方法。
背景技術(shù)：
：目前，矮砧栽培成為國際主流的蘋果栽培方式，歐美等大多數(shù)國家90％以上蘋果栽培采用此方式，也是今后我國蘋果生產(chǎn)的發(fā)展方向。蘋果矮化砧木，常用的有SH6、T337、美國G系等品種，具有抗逆性強(qiáng)、結(jié)果早、產(chǎn)量高和品質(zhì)優(yōu)等特點(diǎn)，由于其自生根難等問題，在含北京在內(nèi)的我國主要蘋果產(chǎn)區(qū)仍以矮化中間砧方式種植。植物組織培養(yǎng)技術(shù)具有不受時(shí)間和外界環(huán)境條件控制、節(jié)約土地、快捷高效的優(yōu)點(diǎn)，已成為工廠化生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用的一種育苗手段?，F(xiàn)有組培苗生根技術(shù)中，蘋果矮化砧木品種組培生根經(jīng)暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)兩個(gè)步驟，耗時(shí)長、操作復(fù)雜成本高，煉苗時(shí)根長較長使得組培苗取出較困難、附著培養(yǎng)基不易洗凈，增加細(xì)菌真菌病害發(fā)病率，組培移栽苗的生長環(huán)境不易控制降低了組培苗移栽成活率，限制了其在組培工廠化育苗中的應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對蘋果矮化砧木生根經(jīng)暗培養(yǎng)和光培養(yǎng)兩個(gè)步驟，耗時(shí)長、操作復(fù)雜成本高等現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種誘導(dǎo)蘋果矮化砧木組培苗生根的方法，具體步驟如下：選擇生長健壯的無根蘋果矮化砧木組培苗，切下帶頂芽的2～3厘米莖段，放入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)生根培養(yǎng)，5-10天后得到有根的蘋果矮化砧木組培苗；所述誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基是以大量元素減半的1/2MS固體培養(yǎng)基為 基本培養(yǎng)基，含有活性炭的濃度為0.2～6g/L、蔗糖的濃度為15～30g/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～1.2mg/L，pH值為5.6～6.2的培養(yǎng)基。其中，所述誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，吲哚丁酸的濃度優(yōu)選為0.5～1.0mg/L，進(jìn)一步優(yōu)選為0.6～0.9mg/L，更優(yōu)選為0.7～0.8mg/L，最優(yōu)選為0.8mg/L。其中，所述無根蘋果矮化砧木組培苗，為按常規(guī)蘋果組培方法繼代培養(yǎng)20-35天后得到的株高大于2cm的組培苗。其中，所述誘導(dǎo)生根培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx。其中，所述蘋果，品種優(yōu)選為SH6。本發(fā)明還提供與上述誘導(dǎo)蘋果矮化砧木組培苗生根的方法配合使用的煉苗和移栽方法，包括如下步驟：1)將有根的蘋果矮化砧木組培苗在溫度24～30℃，濕度≥90％，光照≥14小時(shí)/天的環(huán)境內(nèi)煉苗1天；2)洗去煉苗后的蘋果矮化砧木組培苗的基質(zhì)，采用質(zhì)量百分濃度0.2％的多菌靈進(jìn)行根部消毒，栽入基質(zhì)中，每天噴施質(zhì)量百分濃度5％的硫酸鎂溶液1次，每周噴施質(zhì)量百分濃度0.1％的多菌靈一次，培養(yǎng)25～30天后即可移栽到大田。其中，所述基質(zhì)為泥炭：珍珠巖：蛭石體積比為1：1：1的基質(zhì)。本發(fā)明還提供所述的誘導(dǎo)蘋果矮化砧木組培苗生根的方法，在蘋果繁育中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供所述煉苗和移栽方法，在蘋果繁育中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)蘋果矮化砧木的組培苗快速生根，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)6～10天時(shí)，不定根長度不低于0.2厘米，生根率達(dá)到90％以上。配合本發(fā)明的煉苗和移栽方法，大田移栽成活率大于85％，為蘋果矮化砧木組培苗誘導(dǎo)生根和煉苗提供簡單快捷高效的技術(shù)方法。附圖說明圖1是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6誘導(dǎo)生根5d后的照片；圖2是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6誘導(dǎo)生根12d后的照片；圖3是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6組培生根苗穴盤生長10d后的照片。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。預(yù)備例1無根蘋果矮化砧木組培苗的培育在北京市順義區(qū)楊鎮(zhèn)蘋果組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)了本發(fā)明的方法，所用蘋果矮化砧木SH6組培苗以任意適合該品種的組培方式得到即可，本實(shí)施例采用如下方法組培：選擇蘋果矮化砧木SH6的單株?duì)I養(yǎng)枝，撿取帶頂芽或側(cè)芽的莖段，外植體消毒用自來水沖洗30分鐘，70％酒精消毒10～60s，無菌水沖洗2～4次，0.1％升汞消毒3～10分鐘，無菌水沖洗2～4次，然后采用初代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基先后進(jìn)行初代和繼代培養(yǎng)。所述初代培養(yǎng)基是以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮濃度為200～400mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基。所述繼代培養(yǎng)基是以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)20～35天后，選擇生長健壯，高度大于2cm的無根蘋 果矮化砧木組培苗待用。預(yù)備例1SH6誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基中吲哚丁酸濃度的篩選：采用大量元素減半的1/2MS培養(yǎng)基，添加2g/L的活性炭，22g/L的蔗糖，設(shè)置分別添加0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L……1.2mg/L的吲哚丁酸進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如表1所示：表1吲哚丁酸添加濃度篩選結(jié)果IBA(mg/L)生根率(％)02.18±0.890.18.36±1.010.216.65±0.960.328.12±1.330.437.53±1.640.557.76±1.620.674.94±2.460.786.47±2.490.890.64±3.050.973.17±1.97155.58±2.631.136.94±1.781.211.76±1.31結(jié)果表明，在誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基上添加0.1～1.2mg/L的吲哚丁酸能提高生根率，尤其是吲哚丁酸的濃度為0.5～1.0mg/L時(shí)生根率能達(dá)到50％以上，吲哚丁酸的濃度為0.6～0.9mg/L時(shí)生根率達(dá)到70％以上，吲哚丁酸的濃度為0.7～0.8mg/L時(shí)生根率高達(dá)85％以上，當(dāng)吲哚丁酸的濃度為0.8mg/L時(shí)生根率最高，90％以上。實(shí)施例1蘋果矮化砧木苗的生根蘋果矮化砧木SH6誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基配制：采用大量元素減半的1/2MS培養(yǎng)基，添加0.2～6g/L的活性炭，15～30g/L的蔗糖，吲哚丁酸0.1～1.2mg/L，調(diào)整pH值為5.6～6.2，滅菌后待用。切取無根蘋果矮化砧木組培苗2～3厘米帶頂芽莖段，放入誘導(dǎo)生 根培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)，溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx；蘋果矮化砧木SH6組培苗煉苗和移栽：繼代培養(yǎng)試驗(yàn)材料誘導(dǎo)生根5～10天后(圖1為誘導(dǎo)生根5天后的照片，圖2為誘導(dǎo)生根12天后的照片)，砧木組培苗根長達(dá)到0.2～0.5厘米后，移至智能溫室大棚閉瓶煉苗1天，智能溫室大棚配備有高壓彌霧設(shè)備、濕簾控溫設(shè)備和全光照補(bǔ)光照明系統(tǒng)，維持棚內(nèi)溫度24～30℃，濕度≥90％，光照≥14小時(shí)/天，從瓶中取出生根組培苗，洗去培養(yǎng)基，采用0.2％多菌靈進(jìn)行根部消毒處理，移栽入穴盤中(見圖3)，穴盤填充基質(zhì)為泥炭：珍珠巖：蛭石體積比1：1：1的混合物，移栽組培苗每天噴施5％的硫酸鎂溶液1次，每周噴施0.1％多菌靈一次，培養(yǎng)25～30天至組培苗根系發(fā)育完全后即可移栽到大田。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3