一種建立昆明山海棠快繁體系的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種建立昆明山海棠快繁系統(tǒng)的方法，將昆明山海棠的頂芽或腋芽播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)發(fā)芽，然后將昆明山海棠小芽轉(zhuǎn)先后移至繼代培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，得到昆明山海棠生根組培苗，即可移栽至苗床中進(jìn)行煉苗。本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法簡(jiǎn)便，步驟簡(jiǎn)單，操作方便，所得昆明山海棠種苗植株健壯，生長(zhǎng)能力強(qiáng)，適于規(guī)?；a(chǎn)，同時(shí)還有效縮短了培養(yǎng)時(shí)間，降低了生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種建立昆明山海棠快繁體系的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及植物快速繁殖方法，特別是一種建立昆明山海棠快繁體系的法。

【背景技術(shù)】
[0002] 昆明山海棠（Tripterygiumhypoglaucum(Lv.l)Hutch)，是衛(wèi)矛科 (Celastraceae)雷公藤屬落葉木質(zhì)藤本植物?！兜崮媳静荨分幸?紫金皮"為其藥物名稱； 昆明山海棠俗稱"火把花"，始載于李時(shí)珍《本草綱目》草部毒草類鉤吻條，"生滇南者花紅、 呼為火把花"。不同民族對(duì)該植物藥用部位或?yàn)楦?、根皮及莖枝，民間常以木質(zhì)藤莖入藥，或 將根及全株作為金剛藤的習(xí)用品；根皮、嫩枝葉在鄉(xiāng)下常被農(nóng)民用作植物性殺蟲劑或農(nóng)藥 使用。昆明山海棠被中醫(yī)用于殺蟲、舒筋活絡(luò)、清熱解毒、祛風(fēng)除濕等，是藥典品種"昆明山 海棠片"的原料藥材。國(guó)內(nèi)研宄相繼發(fā)現(xiàn)昆明山海棠在眾多自身免疫性疾?。ㄈ缂t斑狼瘡 等）、腫瘤與白血病、計(jì)劃生育藥物以及HIV等方面的重要價(jià)值。美、日、法等國(guó)均研宄團(tuán)隊(duì) 對(duì)該植物活性成分進(jìn)行深入系統(tǒng)研宄，并已取得許多重要成果。使之成為世界矚目的藥用 植物資源。
[0003] 該植物曾廣泛分布于我國(guó)長(zhǎng)江以南部分省區(qū)及西南地區(qū)如云南、四川、貴州、廣 西、湖南、江西等省區(qū)，四川攀西地區(qū)是主要分布區(qū)之一。藥材和原料全部依賴野生資源采 挖。由于療效獨(dú)特的藥品市場(chǎng)需求增加及新藥產(chǎn)品的開發(fā)。昆明山海棠分布區(qū)急劇萎縮。 自然更新非常困難。野生資源面臨危機(jī)。因此，如何保護(hù)和可持續(xù)利用昆明山海棠資源不 但對(duì)中藥和民族藥具有重要意義，也具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種建立昆明山海棠快繁體系的方法，本發(fā)明中利用組織培 養(yǎng)技術(shù)，不受外界自然條件影響，利用莖節(jié)擴(kuò)繁，產(chǎn)生大量的母種，大規(guī)模的擴(kuò)大種苗生產(chǎn)， 滿足種植的需求，解決資源緊缺問題。
[0005] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：
[0006] 一種建立昆明山海棠快繁體系的方法，包括以下步驟：
[0007] 步驟一、取處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)8-12 天即可獲得昆明山海棠小芽；其中，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入0. 1-2. Omg/L 異戊烯基腺嘌呤、〇? 1-1.〇mg/L萘乙酸、0? 5-3. Og/L赤霉素、0? 5-3. Omg/L噻苯隆、30-50g/L 蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ;
[0008] 步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25-30天獲得昆明山海棠組 培分化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入 3. 0-5. 0mg/L 6-節(jié)氨基腺嗓呤、2. 0-5. 0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2. 0mg/L萘乙酸、 0. 5-4. 0mg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3. 0-6. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為 5. 8-6. 2；
[0009] 步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移 至自然光下照射培養(yǎng)25-30天，獲得昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以 1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 8-3.Og/L吲哚丁酸、1. 0-5.Omg/L萘乙酸、0. 5-2.Og/L赤霉素、 2-5%蔗糖及0. 2-0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 3 ;
[0010] 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗移栽至苗床上，待昆明山海棠小苗生長(zhǎng)穩(wěn)定，即 可移栽至大田。
[0011] 優(yōu)選的是，所述建立昆明山海棠快繁體系的方法中，步驟一所述取昆明山海棠莖 上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基之前，先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽用80-85%乙醇 溶液浸泡1-2分鐘，升汞消毒8-10分鐘，清洗干凈后切除昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽的 邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽。
[0012] 優(yōu)選的是，所述建立昆明山海棠快繁體系的方法中，步驟四所述的苗床基質(zhì)為： 20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖。
[0013] 優(yōu)選的是，所述建立昆明山海棠快繁體系的方法中，步驟四中將昆明山海棠生根 組培苗移栽至苗床之前，先將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽，在 移栽至苗床上。
[0014] 優(yōu)選的是，所述建立昆明山海棠快繁體系的方法中，所述步驟一至步驟三中，昆明 山海棠于培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為28-32°C，光照強(qiáng)度為2500-30001UX，光照 時(shí)間為13_15h/d。
[0015] 本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明所述的方法能快發(fā)繁殖出大量?jī)?yōu)質(zhì)的組培苗，避免 因?yàn)椴粩嗟闹貜?fù)繼代造成組培苗變異，后期通過自然光培養(yǎng)后，組培苗生長(zhǎng)健壯，玻璃化變 異降低。同時(shí)，提供在瓶?jī)?nèi)有大田環(huán)境相似的環(huán)境，提高了組培苗在后期的煉苗過程中成活 率，生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的苗滿足生產(chǎn)需要。本發(fā)明中昆明山海棠小芽的發(fā)芽率達(dá)95%，經(jīng)過繼代培 養(yǎng)后的成苗率98%，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基中，昆明山海棠生根組培苗的生根率為95%，最后 移入大田煉苗的成活率為99%，大大提高了昆明山海棠的組織培養(yǎng)效率；同時(shí)本發(fā)明中經(jīng) 過試驗(yàn)成功配制出去適合用于昆明山海棠組培的培養(yǎng)基，有效縮短了種苗的培育時(shí)間和成 本，提高了快繁的速度。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù) 以實(shí)施。
[0017] 步驟一、先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽在流水下清洗干凈，然后用80-85% 乙醇溶液浸泡1-2分鐘，升汞消毒8-10分鐘，使用無菌水反復(fù)清洗干凈后，切除昆明山海 棠莖上的頂芽或腋芽的邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽；將處理過 的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28-32°C，光照強(qiáng)度為 2500-30001ux，光照時(shí)間為13-15h/d的條件下，培養(yǎng)8-12天即可獲得昆明山海棠小芽；其 中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入0. 1-2.Omg/L異戊烯基 腺嘌呤、〇? 1-1. 〇mg/L萘乙酸、0? 5-3.Og/L赤霉素、0? 5-3.Omg/L噻苯隆、30-50g/L蔗糖及 3. 0-5. 0g/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ;其中，培養(yǎng)基中的異戊烯基腺嘌呤 能有效刺激愈傷組織分化，誘導(dǎo)生芽，同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞分裂，加速昆明山海棠的新陳代謝和蛋 白質(zhì)合成，使昆明山海棠快小芽快速增長(zhǎng)；萘乙酸為廣譜型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能有效促進(jìn)細(xì) 胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根；赤霉素為一種廣泛存在的植物激素，有效刺激葉和芽的 生長(zhǎng)；噻苯隆是一種新型高效的細(xì)胞分裂素，能很好的促進(jìn)黃精的芽組織分化；蔗糖為能 源物質(zhì)，為植物組織培養(yǎng)提供碳源和能源，還能很好的維持培養(yǎng)基內(nèi)的低滲環(huán)境，同時(shí)在一 定程度上還能減少微生物的污染，提高黃精的無菌環(huán)境質(zhì)量；昆明山海棠的小芽出芽率為 95%〇
[0018]步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28-32°C，光照強(qiáng) 度為2500-30001ux，光照時(shí)間為13-15h/d的條件下，培養(yǎng)25-30天獲得2-3cm高度整齊 的昆明山海棠組培分化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加 入3.〇-5.〇11^/]^6-節(jié)氨基腺嗓呤、2.〇-5.〇11^凡2,4-二氯苯氧乙酸、0.5-2.〇11^凡萘乙 酸、0. 5-4. Omg/L吲哚丙酸、3-5g/L蔗糖及3. 0-6. Og/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值 為5. 8-6. 2;其中，繼代培養(yǎng)基中，6-芐氨基腺嘌呤為植物細(xì)胞分裂素，有效促進(jìn)昆明山海 棠的細(xì)胞分裂；2,4_二氯苯氧乙酸是一種苯氧類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，具有與生長(zhǎng)素類似的生 理效應(yīng)，有效促進(jìn)昆明山海棠小芽繁殖和生長(zhǎng)；萘乙酸為廣譜型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能有效促 進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根；剛哚丙酸為植物生長(zhǎng)刺激素，促進(jìn)組培分化苗快速生 根；蔗糖為能源物質(zhì)，為植物組織培養(yǎng)提供碳源和能源，還能很好的維持培養(yǎng)基內(nèi)的低滲環(huán) 境，同時(shí)在一定程度上還能減少微生物的污染，提高黃精的無菌環(huán)境質(zhì)量；促進(jìn)昆明山海棠 組培分化苗的出苗率達(dá)98%。
[0019]步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28-32°C， 光照強(qiáng)度為2500-30001ux，光照時(shí)間為13-15h/d的條件下，培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移至自然 光下照射培養(yǎng)25-30天，獲得3-4條根的昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為： 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入0. 8-3. Og/L吲哚丁酸、1. 0-5. Omg/L萘乙酸、 0. 5-2. Og/L赤霉素、2-5%蔗糖及0. 2-0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 3 ; 其中，生根培養(yǎng)基中吲哚丁酸為廣譜型吲哚類植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，是很好的生根劑，可促進(jìn)昆 明山海棠的細(xì)胞分化和分裂，誘導(dǎo)根原體的形成；萘乙酸為廣譜型植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，能有效 促進(jìn)細(xì)胞分裂與擴(kuò)大，誘導(dǎo)形成不定根；赤霉素為一種廣泛存在的植物激素，有效刺激葉和 芽的生長(zhǎng)；蔗糖為能源物質(zhì)，為植物組織培養(yǎng)提供碳源和能源，還能很好的維持培養(yǎng)基內(nèi)的 低滲環(huán)境，同時(shí)在一定程度上還能減少微生物的污染，提高黃精的無菌環(huán)境質(zhì)量；活性炭的 加入有助于吸附一些有害的代謝物質(zhì)，同時(shí)活性炭的加入使得生根培養(yǎng)基變黑，可模仿黑 暗條件，有利于組培分化苗的生根；同時(shí)將昆明山海棠組培分化苗轉(zhuǎn)移至自然光下培養(yǎng)，組 培分化苗提供一個(gè)與外界環(huán)境相似的生長(zhǎng)條件，促進(jìn)昆明山海棠適應(yīng)外界的生存環(huán)境，提 高了昆明山海棠組培分化苗在后期煉苗過程中的成活率；昆明山海棠組培分化苗的生根率 為 95%。
[0020] 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽，再移栽至 苗床上，所述的苗床基質(zhì)為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖待昆明山 海棠小苗生長(zhǎng)穩(wěn)定，長(zhǎng)出新的根和芽即可移栽至大田，栽培時(shí)要適當(dāng)遮陰，控制遮陰度為 75%，間隔澆水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā)生。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] 步驟一、先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽在流水下清洗干凈，然后用80%乙醇 溶液浸泡1分鐘，升汞消毒8分鐘，使用無菌水反復(fù)清洗干凈后，切除昆明山海棠莖上的頂 芽或腋芽的邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽；將處理過的昆明山海 棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28°C，光照強(qiáng)度為26001UX，光照時(shí) 間為15h/d的條件下，培養(yǎng)10天即可獲得昆明山海棠小芽；其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N 68 為基本培養(yǎng)基，加入0-lmg/L異戊烯基腺嘌呤、1. Omg/L萘乙酸、2. Og/L赤霉素、1. Omg/L噻 苯隆、20g/L蔗糖及4. Og/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5. 9 ;
[0023] 步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28_32°C，光照強(qiáng)度 為26001ux，光照時(shí)間為15h/d的條件下，培養(yǎng)28天獲得2-3cm高度整齊的昆明山海棠組 培分化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入 4. Omg/L 6-節(jié)氨基腺嗓呤、.Omg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、2. Omg/L萘乙酸、3. Omg/L卩引噪丙 酸、3g/L蔗糖及3. Og/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 9 ;
[0024]步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28°C，光照 強(qiáng)度為26001uX，光照時(shí)間為15h/d的條件下，培養(yǎng)30天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)30 天，獲得3-4條根的昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培 養(yǎng)基，加入1.〇g/L吲哚丁酸、1.0mg/L萘乙酸、1.0g/L赤霉素、3%蔗糖及0.3%活性炭，并調(diào) 整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 9 ;
[0025] 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽，再移栽至苗 床上，所述的苗床基質(zhì)為：20g樹皮、10g雜木、30g輕石及15g珍珠巖待昆明山海棠小苗生 長(zhǎng)穩(wěn)定，長(zhǎng)出新的根和芽即可移栽至大田，栽培時(shí)要適當(dāng)遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆 水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā)生。
[0026] 實(shí)施例2
[0027] 步驟一、先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽在流水下清洗干凈，然后用85%乙醇 溶液浸泡1. 5分鐘，升汞消毒10分鐘，使用無菌水反復(fù)清洗干凈后，切除昆明山海棠莖上的 頂芽或腋芽的邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽；將處理過的昆明山 海棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30°C，光照強(qiáng)度為28001UX，光照 時(shí)間為14h/d的條件下，培養(yǎng)12天即可獲得昆明山海棠小芽；其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以 N 68為基本培養(yǎng)基，加入1. 5mg/L異戊烯基腺嘌呤、1. 0mg/L萘乙酸、2. 5g/L赤霉素、2. 0mg/L 噻苯隆、35g/L蔗糖及5. 0g/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6. 0 ;
[0028] 步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為28_32°C，光照強(qiáng)度 為28001ux，光照時(shí)間為14h/d的條件下，培養(yǎng)30天獲得2-3cm高度整齊的昆明山海棠組 培分化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入 3. 0mg/L 6-節(jié)氨基腺嗓呤、4mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、1.5mg/L萘乙酸、1. 0mg/L卩引噪丙酸、 3. 0g/L蔗糖及3. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為6. 0 ;;
[0029]步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為30°C，光照 強(qiáng)度為28001uX，光照時(shí)間為14h/d的條件下，培養(yǎng)35天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)25 天，獲得3-4條根的昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：：以1/2MS為基本培 養(yǎng)基，加入2. 0g/L吲哚丁酸、4. 0mg/L萘乙酸、1.5g/L赤霉素、5%蔗糖及0.5%活性炭，并調(diào) 整生根培養(yǎng)基的pH值為6. 3 ;
[0030] 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽，再移栽至苗 床上，所述的苗床基質(zhì)為：20樹皮、20雜木、25蛭石及15珍珠巖待昆明山海棠小苗生長(zhǎng)穩(wěn) 定，長(zhǎng)出新的根和芽即可移栽至大田，栽培時(shí)要適當(dāng)遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆水，溫 度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā)生。
[0031]實(shí)施例3
[0032] 步驟一、先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽在流水下清洗干凈，然后用85%乙醇 溶液浸泡1分鐘，升汞消毒8分鐘，使用無菌水反復(fù)清洗干凈后，切除昆明山海棠莖上的頂 芽或腋芽的邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽；將處理過的昆明山海 棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照強(qiáng)度為30001UX，光照時(shí) 間為13h/d的條件下，培養(yǎng)12天即可獲得昆明山海棠小芽；其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N 68 為基本培養(yǎng)基，加入0. 5mg/L異戊烯基腺嘌呤、0. 5mg/L萘乙酸、3.Og/L赤霉素、0. 5mg/L噻 苯隆、50g/L蔗糖及6.Og/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為6.2;
[0033] 步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照強(qiáng)度為 30001ux，光照時(shí)間為13h/d的條件下，培養(yǎng)25天獲得2-3cm高度整齊的昆明山海棠組 培分化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入 5.Omg/L6-芐氨基腺嘌呤、3.Omg/L2,4_二氯苯氧乙、2.Omg/L萘乙酸、0? 5-4.Omg/L吲哚 丙酸、4g/L蔗糖及5. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為6.2 ;
[0034]步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為32°C，光照 強(qiáng)度為30001uX，光照時(shí)間為13h/d的條件下，培養(yǎng)40天后，轉(zhuǎn)移至自然光下照射培養(yǎng)25 天，獲得3-4條根的昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：生根培養(yǎng)基為：以 1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入2. 0g/L吲哚丁酸、5. 0mg/L萘乙酸、2. 0g/L赤霉素、5%蔗糖及 0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為6.3 ;
[0035] 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈，晾干水汽，再移栽至苗 床上，所述的苗床基質(zhì)為：28g樹皮、15g雜木、30g輕石及10g珍珠巖待昆明山海棠小苗生 長(zhǎng)穩(wěn)定，長(zhǎng)出新的根和芽即可移栽至大田，栽培時(shí)要適當(dāng)遮陰，控制遮陰度為75%，間隔澆 水，溫度為28°C，超過28°C要水簾降溫，防止根腐病發(fā)生。
[0036] 試驗(yàn)比較
[0037] 采用昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽作為組培材料，均是在培養(yǎng)條件為：在培養(yǎng)溫 度為30°C，光照強(qiáng)度為28001UX，光照時(shí)間為14h/d，pH為6. 0的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，其中，
[0038] (1)組1為本發(fā)明所述建立昆明山海棠快繁體系的方法，培養(yǎng)基分別為：
[0039] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入2. 0mg/L異戊烯基腺嘌呤、1. 0mg/L萘乙 酸、3. 0g/L赤霉素、噻苯隆3. 0mg/L、50g/L鹿糖及6. 0g/L瓊脂；
[0040] 繼代培養(yǎng)基為以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、 5. 0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、2. 0mg/L萘乙酸、4. 0mg/L卩引噪丙酸、5g/L鹿糖及6. 0g/L瓊 脂；
[0041] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入3. 0g/L吲哚丁酸、5. 0mg/L萘乙酸、 2. 0g/L赤霉素、5%蔗糖及0. 5%活性炭；
[0042] (2)組2的培養(yǎng)基分別為：
[0043] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入2. 0mg/L異戊烯基腺嘌呤、3. 0g/L赤霉 素、噻苯隆3. 0mg/L、50g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0044] 繼代培養(yǎng)基為以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、 5. Omg/L 2,4_二氯苯氧乙酸、4. Omg/L吲噪丙酸、5g/L鹿糖及6. Og/L瓊脂；
[0045] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入3. Og/L吲哚丁酸、2. Og/L赤霉素、 5 %蔗糖及0.5 %活性炭。
[0046] (3)組3的培養(yǎng)基分別為：
[0047] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入1. 0mg/L萘乙酸、3. 0g/L赤霉素、3. Omg/ L噻苯隆、50g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0048] 繼代培養(yǎng)基為以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、 2. 0mg/L萘乙酸、4. 0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0049] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入3. 0g/L吲哚丁酸、5. 0mg/L萘乙酸、 2. 0g/L赤霉素、5%蔗糖及0. 5%活性炭。
[0050] (4)組4的培養(yǎng)基分別為：
[0051] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入2. 0mg/L異戊烯基腺嘌呤、1. 0mg/L萘乙 酸、3. 0g/L赤霉素、50g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0052] 繼代培養(yǎng)基為以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤、 5. 0mg/L 2,4_二氯苯氧乙酸、2. 0mg/L萘乙酸、5g/L鹿糖及6. 0g/L瓊脂；
[0053] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L萘乙酸、2. 0g/L赤霉素、5% 蔗糖及0.5 %活性炭。
[0054] (5)組5的培養(yǎng)基分別為：
[0055] 誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入2. 0mg/L異戊烯基腺嘌呤、1. 0mg/L萘乙 酸、3. 0mg/L噻苯隆、50g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0056] 繼代培養(yǎng)基為以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入5. 0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、 2. 0mg/L萘乙酸、4. 0mg/L吲哚丙酸、5g/L蔗糖及6. 0g/L瓊脂；
[0057] 生根培養(yǎng)基為：以1/2MS為基本培養(yǎng)基，加入3. 0g/L吲哚丁酸、5. 0mg/L萘乙酸、 5 %蔗糖及0.5 %活性炭。
[0058] 得到的結(jié)果如表1所示：
[0059]

【權(quán)利要求】
1. 一種建立昆明山海棠快繁體系的方法，其特征在于，包括以下步驟： 步驟一、取處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)8-12天即 可獲得昆明山海棠小芽；其中，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：以N68為基本培養(yǎng)基，加入0. 1-2. Omg/L 異戊烯基腺嘌呤、〇? 1-1. 〇mg/L萘乙酸、0? 5-3. Og/L赤霉素、0? 5-3. Omg/L噻苯隆、30-50g/L 蔗糖及3. 0-5. Og/L瓊脂，調(diào)整誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ; 步驟二、將昆明山海棠小芽置于繼代培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25-30天獲得昆明山海棠組培分 化苗；其中，所述繼代培養(yǎng)基為：以white培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，加入3. 0-5. Omg/L 6-芐氨 基腺嘌呤、2. 0-5. Omg/L 2,4-二氯苯氧乙酸、0? 5-2. Omg/L萘乙酸、0? 5-4. Omg/L吲哚丙酸、 3_5g/L蔗糖及3. 0-6. 0g/L瓊脂，并調(diào)整繼代培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 2 ; 步驟三、將昆明山海棠組培分化苗移栽至生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)30-40天后，轉(zhuǎn)移至自然 光下照射培養(yǎng)25-30天，獲得昆明山海棠生根組培苗；其中，所述生根培養(yǎng)基為：以1/2MS 為基本培養(yǎng)基，加入0. 8-3. 0g/L吲哚丁酸、1. 0-5. 0mg/L萘乙酸、0. 5-2. 0g/L赤霉素、2-5% 蔗糖及0. 2-0. 5%活性炭，并調(diào)整生根培養(yǎng)基的pH值為5. 8-6. 3 ; 步驟四、將昆明山海棠生根組培苗移栽至苗床上，待昆明山海棠小苗生長(zhǎng)穩(wěn)定，即可移 栽至大田。
2. 如權(quán)利要求1所述建立昆明山海棠快繁體系的方法，其特征在于，步驟一所述取昆 明山海棠莖上的頂芽或腋芽置于誘導(dǎo)培養(yǎng)基之前，先將昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽用 80-85%乙醇溶液浸泡1-2分鐘，升汞消毒8-10分鐘，清洗干凈后切除昆明山海棠莖上的頂 芽或腋芽的邊緣部分，得到處理過的昆明山海棠莖上的頂芽或腋芽。
3. 如權(quán)利要求1所述建立昆明山海棠快繁體系的方法，其特征在于，步驟四所述的苗 床基質(zhì)為：20-30樹皮、10-20雜木、20-30蛭石及10-15珍珠巖。
4. 如權(quán)利要求1所述建立昆明山海棠快繁體系的方法，其特征在于，步驟四中將昆明 山海棠生根組培苗移栽至苗床之前，先將昆明山海棠生根組培苗根部的培養(yǎng)基清洗干凈， 晾干水汽，在移栽至苗床上。
5. 如權(quán)利要求1所述建立昆明山海棠快繁體系的方法，其特征在于，所述步驟一至 步驟三中，昆明山海棠于培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為28-32°C，光照強(qiáng)度為 2500-30001ux，光照時(shí)間為 13-15h/d。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104429954SQ201410674726
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月21日
【發(fā)明者】霍麗妮, 陳睿, 李培源, 蘇煒, 蘇鈦, 王杰鵬 申請(qǐng)人:廣西中醫(yī)藥大學(xué)