一種玄參繁育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種玄參繁育方法，包括以下步驟：a、株系篩選，b、材料處理，c、無性系建立，d、煉苗移植。脫毒種苗田間表現(xiàn)優(yōu)異，植株健壯、長勢一致，葉片濃綠、肥厚、寬大，產(chǎn)品品質(zhì)極大提高。原原種田間無病蟲害發(fā)生，原種及生產(chǎn)種病蟲害極少發(fā)生，產(chǎn)量較常規(guī)苗分別提高166.6%、152.8%。
【專利說明】一種玄參繁育方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)領(lǐng)域，確切地說是一種玄參繁育方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 玄參為玄參科植物玄參（Scrophularianingpoensis Hemsl.)的干燥根，始載于 《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有涼血滋陰，瀉火解毒的功效，臨床上用于熱病傷陰、溫毒發(fā)斑、骨蒸勞 嗽、目赤、咽痛、白喉、癰腫瘡毒等癥，是我國特有種，目前僅在中國自然分布，全國大部分地 區(qū)均有栽培，主產(chǎn)于浙江、安徽、湖北、貴州等地。為常用大宗藥材，作為中成藥的原料，可生 產(chǎn)天王補心丸、天麻丸、脈絡(luò)寧、清咽喉合劑等幾十種中成藥，現(xiàn)也運用于化妝品生產(chǎn)，作為 植物潤滑劑、防凍霜、防皺霜等。
[0003] 野生玄參的繁殖方式是利用種子進行有性繁殖，而藥農(nóng)為了保存優(yōu)質(zhì)品種，提高 產(chǎn)量及縮短生長周期等，栽培玄參均采用無性繁殖的方式，但多年來缺乏品種的提純復(fù)壯， 病毒積累嚴重，產(chǎn)量和質(zhì)量大幅度下降。因此，課題組于2009年開始進行玄參的品種搜集 與鑒定工作，并于同期進行脫毒快繁技術(shù)研究，2010年成功獲得玄參脫毒種，2011年進行 田間對比試驗。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種玄參繁育方法
[0005] 上述目的通過以下方案實現(xiàn)：
[0006] -種玄參繁育方法，其特征在于：包括以下步驟：
[0007] a、株系篩選
[0008] 于玄參收獲期優(yōu)選田間長勢旺盛，無病蟲害，支根多，根系肥大的植株，定植于資 源圃；
[0009] b、材料處理與莖尖剝?nèi)?br> [0010] (1)預(yù)處理與消毒
[0011] 于玄參收獲期取根部頂端具白色鱗片包裹的芽，以自來水沖洗去除表面泥土灰 塵，逐層剝?nèi)パ客獠亏[片至Icm 3左右，在無菌條件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡IOs 左右，再用〇. 1 %升汞溶液浸泡IOmin左右，無菌水浸洗6?7次；
[0012] (2)莖尖剝?nèi)?br> [0013] 在解剖鏡下將步驟（1)處理后的頂芽的莖尖仔細剝離，并切取0. 3?0. 5mm的尖 端外植體，接種于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為MS+6-BA1. 0?I. 5mg/L ;
[0014] c、無性系建立
[0015] 外植體接種7d左右后，生長點開始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽誘導(dǎo)分化 培養(yǎng)基中培養(yǎng)40d左右形成叢生芽，待叢生芽苗高3?5cm時剪成帶有2片葉，長約I. 5cm 的小段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)為MS全量培養(yǎng)基，20d左右為一個轉(zhuǎn)接周期；增殖至適當(dāng) 的苗量后，選生長健壯，長勢一致的試管苗，分批轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為 1/2MS+IBA0. 05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；
[0016] d、煉苗移植
[0017] 苗生根后，將瓶塞打開，移至強光照下煉苗3d左右，煉苗后，取出試管苗，用自來 水小心洗去根上的培養(yǎng)基殘留物，然后將其移栽到土：泥炭：珍珠巖為1 : 1 : 1左右的 基質(zhì)中，成活后的試管苗生長穩(wěn)定后移栽大田。
[0018] 所述的一種玄參繁育方法，其特征在于：所述的無性系建立的所有操作的培養(yǎng)條 件均為：培養(yǎng)溫度為24?26°C，光照強度1500?2000Lx/12h. d。
[0019] 所述的一種玄參繁育方法，其特征在于=RT-PCR方法檢測玄參花葉病毒：
[0020] 最佳反應(yīng)體系：復(fù)性溫度59°C,上、下游引物使用濃度各為25 μ mol/L，鎂離子作 用濃度為1. 5 μ mol/L，dNTP作用濃度為400 μ mol/L，35個循環(huán)。最佳反應(yīng)模式為：94°C預(yù) 變性 5min ;94°C變性 45s，59°C復(fù)性 40s，72°C延伸 60s，35 個循環(huán)；72°C延伸 lOmin。
[0021] 所述的20d左右為一個轉(zhuǎn)接周期指的是當(dāng)增殖20d左右后，將莖段剪切后繼續(xù)重 復(fù)進行增殖培養(yǎng)
[0022] 所述的適當(dāng)?shù)拿缌坑稍嚬苊缧枰庇臄?shù)量決定。
[0023] 本發(fā)明的有益效果為：脫毒種苗田間表現(xiàn)優(yōu)異，植株健壯、長勢一致，葉片濃綠、月巴 厚、寬大，產(chǎn)品品質(zhì)極大提高。原原種田間無病蟲害發(fā)生，原種及生產(chǎn)種病蟲害極少發(fā)生，產(chǎn) 量較常規(guī)苗分別提高166. 6%、152. 8%。綜合田間長勢、產(chǎn)量、產(chǎn)品品質(zhì)以及生產(chǎn)成本四個 指標(biāo)，形成玄參脫毒種苗繁育的最佳模式為：原原種--原種--生產(chǎn)種。

【具體實施方式】
[0024] 實施例1、
[0025] 一、株系篩選
[0026] 玄參生長期，在亳州市憔城區(qū)進行地上片選，并于收獲期在片選的基礎(chǔ)上進行地 下性狀篩選，優(yōu)選田間長勢旺盛，無病蟲害，支根多，根系肥大的植株，定植于資源圃。
[0027] 通過品種特征鑒別，與中國植物志玄參科植物玄參性狀相吻合。
[0028] 多年生草本，株高140?160cm。根肥大，近圓柱形或紡錘形，支根3?6條，粗3? 4cm，外皮灰黃褐色，縱皺多，具皮孔，頂端具多數(shù)由白色鱗片包裹的芽。莖直立、方形，光滑 或有腺狀柔毛。葉對生，葉片卵形或卵狀橢圓形，先端漸尖，基部圓形或近截形，邊緣具頓鋸 齒，齒緣反卷；葉背有稀疏散生的細毛。聚傘花序疏散開展，呈圓錐狀，著生于枝莖上部，混 合花序，花梗長?；ㄝ嗑?萼片，卵圓形，先端鈍，綠色；花冠暗紅紫色，唇形，長約8mm，5裂。 雄蕊5枚，4枚有花藥，2強，一枚退化呈鱗片狀，貼生在花冠管上；雌蕊一枚?；ūP明顯，子 房上位，2室，花柱細長。蒴果卵圓形。種子多數(shù)，黑褐色?；ㄆ??9月，果期9?11月。
[0029] 二、組織培養(yǎng)脫毒
[0030] 1、材料處理
[0031] (1)預(yù)處理與消毒
[0032] 于玄參收獲期取根部頂端具白色鱗片包裹的芽，以自來水沖洗去除表面泥土灰 塵，逐層剝?nèi)パ客獠亏[片至Icm 3左右，在無菌條件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡IOs 左右，再用〇. 1 %升汞溶液浸泡IOmin左右，無菌水浸洗6?7次；
[0033] (2)莖尖剝?nèi)?br> [0034] 在解剖鏡下將步驟（1)處理后的頂芽的莖尖仔細剝離，并切取0. 3?0. 5mm的尖 端外植體，接種于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為MS+6-BA1. 0?I. 5mg/L ;
[0035] 2、無性系建立
[0036] 外植體接種7d后，生長點開始膨大，30d后分化出不定芽；不定芽誘導(dǎo)分化培 養(yǎng)基中培養(yǎng)40d形成叢生芽，待叢生芽苗高3?5cm時剪成帶有2片葉，長約I. 5cm的 小段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)為MS全量培養(yǎng)基，20d為一個轉(zhuǎn)接周期；增殖至適當(dāng)?shù)?苗量后，選生長健壯，長勢一致的試管苗，分批轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為 1/2MS+IBA0. 05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出；
[0037] 3、煉苗移植
[0038] 苗生根后，將瓶塞打開，移至強光照下煉苗3d，煉苗后，取出試管苗，用自來水小心 洗去根上的培養(yǎng)基殘留物，然后將其移栽到土：泥炭：珍珠巖為1 : 1 : 1的基質(zhì)中，成活 后的試管苗生長穩(wěn)定后移栽大田；
[0039] 所述的無性系建立的所有操作的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為24?26°C，光照強度 1500 ?2000Lx/12h. d ;
[0040] 所述的20d為一個轉(zhuǎn)接周期指的是當(dāng)增殖20d后，將莖段剪切后繼續(xù)重復(fù)進行增 殖培養(yǎng)；
[0041] 4、田間對比試驗
[0042] 試驗采用隨機區(qū)組設(shè)計，每小區(qū)10m2, 3次重復(fù)。將按照上述操作得到的CK與脫毒 苗的子芽按照顏色、大小進行分級，在整好的畦面上按行株距50cmX 25cm挖穴，穴深10cm， 每穴栽芽頭1個，芽頭向上，覆土與畦面平。種植期統(tǒng)一控制肥水及田間管理。
[0043] (1)不同品種生育期表現(xiàn)
[0044]

【權(quán)利要求】
1. 一種玄參繁育方法，其特征在于：包括以下步驟： a、 株系篩選 于玄參收獲期優(yōu)選田間長勢旺盛，無病蟲害，支根多，根系肥大的植株，定植于資源 圃； b、 材料處理與莖尖剝?nèi)? (1) 預(yù)處理與消毒 于玄參收獲期取根部頂端具白色鱗片包裹的芽，以自來水沖洗去除表面泥土灰塵，逐 層剝?nèi)パ客獠亏[片至lcm3左右，在無菌條件下置于70%左右的酒精溶液中浸泡10s左右， 再用0. 1%升萊溶液浸泡lOmin左右，無菌水浸洗6?7次； (2) 莖尖剝?nèi)? 在解剖鏡下將步驟（1)處理后的頂芽的莖尖仔細剝離，并切取〇. 3?0. 5 mm的尖端外 植體，接種于誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為MS+6-BA1. (Tl. 5 mg/L ; c、 無性系建立 外植體接種7d左右后，生長點開始膨大，30d左右分化出不定芽；不定芽誘導(dǎo)分化培 養(yǎng)基中培養(yǎng)40d左右形成叢生芽，待叢生芽苗高:T5cm時剪成帶有2片葉，長約1. 5cm的 小段接入增殖培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)為MS全量培養(yǎng)基，20d左右為一個轉(zhuǎn)接周期；增殖至適當(dāng) 的苗量后，選生長健壯，長勢一致的試管苗，分批轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基，誘導(dǎo)生根培養(yǎng)基為 1/2MS+IBA0. 05mg/L，5d左右苗根部即有白色根系生出； d、 煉苗移植 苗生根后，將瓶塞打開，移至強光照下煉苗3 d左右，煉苗后，取出試管苗，用自來水小 心洗去根上的培養(yǎng)基殘留物，然后將其移栽到土：泥炭：珍珠巖為1 : 1 : 1左右的基質(zhì) 中，成活后的試管苗生長穩(wěn)定后移栽大田。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玄參繁育方法，其特征在于：所述的無性系建立的所有 操作的培養(yǎng)條件均為：培養(yǎng)溫度為24?26 °C，光照強度1500?2000Lx/12 h. d。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種玄參繁育方法，其特征在于：RT-PCR方法檢測玄參花葉 病毒： 最佳反應(yīng)體系：復(fù)性溫度59°C,上、下游引物使用濃度各為25 iimol/L，鎂離子作用濃 度為1. 5 ii mol/L，dNTP作用濃度為400 ii mol/L，35個循環(huán)； 最佳反應(yīng)模式為：94°C預(yù)變性5min ;94°C變性45s，59°C復(fù)性40s，72°C延伸60s，35個 循環(huán)；72°C延伸lOmin。
【文檔編號】A01H4/00GK104365483SQ201410667851
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月20日
【發(fā)明者】董玲, 李衛(wèi)文, 李貝蓓, 廖華俊, 寧志怨, 江芹, 王愛聽 申請人:安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所, 安徽井泉集團中藥飲片有限公司