一種假地藍植株再生的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，包括無菌莖尖的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)等步驟。本研究以假地藍莖尖為外植體，系統(tǒng)地研究了誘導(dǎo)愈傷組織、愈傷組織分化、幼苗生根的培養(yǎng)基條件，為建立高效便捷的無病毒假地藍快速繁殖技術(shù)體系提供依據(jù)。
【專利說明】 一種假地藍植株再生的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]假地藍，Croia/aria /errwgiflea,又名響鈴草,荷豬草,黃花野百合,豆科,多年生草本，根長達60厘米以上，莖、枝直立或略上升，通常分枝甚多，莖、枝、葉各部分均有稍長而擴展的毛，生于山坡疏林及荒山草地，海拔400-1000米，我國普遍有分布，而以西南為多見。干燥全草，莖圓形，全體有黃棕色茸毛，葉片卷曲，多脫落，呈橢圓形或卵形，黃綠色，枝端尚帶莢果，種子大多脫落，帶根者，根蜿蜒而長，圓形，少分枝，須根細長，表面土黃色。種子含豬屎豆堿、次豬屎豆堿、光萼豬屎豆堿、尼勒吉扔堿、豬屎青堿等生物堿，尚含β -谷甾醇、木犀草素、牡荊素、牡荊素木糖甙以及能凝集人A型和B型紅細胞的植物凝集素。藥用功效為斂肺氣，補脾腎，利小便，消腫毒，治久咳痰血，耳鳴，耳聾，夢遺，慢性腎炎，膀胱炎，腎結(jié)石，扁桃腺炎，淋巴腺炎，疔毒，惡瘡。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供假地藍植株再生的快速繁殖方法，本研究以假地藍莖尖為外植體，系統(tǒng)地研究了誘導(dǎo)愈傷組織、愈傷組織分化、幼苗生根的培養(yǎng)基條件，為建立高效便捷的無病毒假地藍快速繁殖技術(shù)體系提供依據(jù)。
[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實現(xiàn)的:
取假地藍長出的嫩莖尖，并把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水沖洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養(yǎng)基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加鹿糖30g/L,瓊脂
6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基 MSB+6-BA2.5-3.0mg/L+KT2.5-3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L, pH5.8,光照25001x,溫度24±2°C,假地藍再生試管苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)一個月后，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗凈根部的培養(yǎng)基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然后栽植到滅菌過的基質(zhì)山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恒溫28°C的智能人工氣候培養(yǎng)柜內(nèi)培養(yǎng)，光照強度20001x，光照時間24h/d。
[0005]采用本發(fā)明制備的假地藍成活率高，周期短，操作簡單利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步闡述，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。

【具體實施方式】
[0007]實施例1
取假地藍長出的嫩莖尖，并把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水沖洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養(yǎng)基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基 MSB+6-BA2.5mg/L+KT2.5mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)一個月后，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗凈根部的培養(yǎng)基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然后栽植到滅菌過的基質(zhì)山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恒溫28°C的智能人工氣候培養(yǎng)柜內(nèi)培養(yǎng)，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率89%。
[0008]實施例2
取假地藍長出的嫩莖尖，并把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水沖洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養(yǎng)基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基 MSB+6-BA3.0mg/L+KT3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)一個月后，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗凈根部的培養(yǎng)基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然后栽植到滅菌過的基質(zhì)山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恒溫28°C的智能人工氣候培養(yǎng)柜內(nèi)培養(yǎng)，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率90%。
[0009]實施例3
取假地藍長出的嫩莖尖，并把莖尖切成V字型，用0.1%的升汞處理6min，無菌水沖洗5次，消毒處理過的假地藍莖尖接入培養(yǎng)基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加鹿糖30g/L,瓊脂6.5g/L，pH5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C，誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基 MSB+6-BA3.0mg/L+KT2.5mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L，瓊脂 6.5g/L，pH5.8，光照25001x，溫度24±2°C，假地藍再生試管苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)一個月后，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗凈根部的培養(yǎng)基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然后栽植到滅菌過的基質(zhì)山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中，放入恒溫28°C的智能人工氣候培養(yǎng)柜內(nèi)培養(yǎng)，光照強度20001x，光照時間24h/d，成活率91%。
【權(quán)利要求】
1.本發(fā)明研究了一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，包括無菌莖尖的獲得，愈傷組織的誘導(dǎo)，愈傷組織的分化，生根誘導(dǎo)等，其主要步驟如下: (1)取假地藍的幼嫩莖尖，對其進行消毒處理； (2)將步驟(I)消毒處理過的假地藍莖尖接入培養(yǎng)基為MSB+2，4-D4.0mg/L+脯氨酸500mg/l+谷氨酰胺500mg/L+水解酪蛋白300mg/L+8g/L卡拉膠進行愈傷組織誘導(dǎo)，附加鹿糖30g/L，瓊脂6.5g/L，ρΗ5.8，光照強度ΙΟΟΟΙχ，光照時間5h/d，溫度24±2°C ； (3)取步驟(2)誘導(dǎo)出來的愈傷組織放入分化培養(yǎng)基MSB+6-BA2.5-3.0mg/L+KT2.5-3mg/L+GA30.5mg/L,附加蔗糖 30g/L,瓊脂 6.5g/L，ρΗ5.8，光照 25001χ,溫度24±2°C ； (4)取步驟(3)分化培養(yǎng)出來的假地藍芽苗進行生根誘導(dǎo)。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(I)中所述假地藍無菌莖尖的獲得為，取假地藍長出的嫩莖尖，并把莖尖切成V字型，用0.1%的升萊處理6min,無菌水沖洗5次。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種假地藍植株再生的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(4)假地藍生根誘導(dǎo)的方法為假地藍再生試管苗在生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)一個月后，開瓶煉苗3d，取出小苗在自來水下洗凈根部的培養(yǎng)基，用低濃度高錳酸鉀溶液潤洗根部，然后栽植到滅菌過的基質(zhì)山地黃壤土:蛭石:泥炭=1:1:1中,放入恒溫28°c的智能人工氣候培養(yǎng)柜內(nèi)培養(yǎng)，光照強度20001x，光照時間24h/d。
【文檔編號】A01H4/00GK104273033SQ201410550703
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司