一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括種子的消毒、無菌苗的獲得、腋芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根誘導(dǎo)等步驟。本發(fā)明通過研究篩選出組培各階段的最佳培養(yǎng)基配方和主要影響因素，找出最佳的技術(shù)參數(shù)組合，從而建立最適宜的七葉樹組織培養(yǎng)體系，為七葉樹藥用資源的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
【專利說明】一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及七葉樹的組織培養(yǎng)，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]七葉樹，Je1ScWw1S chinensis /----,七葉樹科，又稱梭稷樹、梭稷子、天師栗，落葉喬木，高達(dá)25米，樹皮深褐色或灰褐色，小枝、圓柱形，黃褐色或灰褐色，無毛或嫩時(shí)有微柔毛，有圓形或橢圓形淡黃色的皮孔；掌狀復(fù)葉，由5?7小組成，葉柄長1(Γ12厘米，有灰色微柔毛，小葉紙質(zhì)，長圓披針形至長圓倒披針形，稀長橢圓形鉀先端短銳尖，基部楔形或闊楔形，邊緣有鈍尖形的細(xì)鋸齒；花雜性，雄花與兩性花同株，花萼管狀鐘形，長3飛毫米，外面有微柔毛，裂片鈍形，邊緣有短纖毛，花瓣4，白色；果實(shí)球形或倒卵圓形，頂部短尖或鈍圓而中部略凹下，直徑3?4厘米，黃褐色，無刺，具很密的斑點(diǎn)，果殼干后厚5飛毫來，種子常Γ2粒發(fā)育，近于球形，直徑2?3.5厘米，栗褐色，種臍白色，約占種子體積的1/2，花期Γ5月，果期10月。中國黃河流域及東部各省均有栽培，僅秦嶺有野生，自然分布在海拔700m以下之山地，喜光，也耐半蔭，細(xì)紋和濕潤氣候，不耐嚴(yán)寒，喜肥沃深厚土壤。從七葉樹中萃取的天然活性成分:七葉素，通過抑制膠原蛋白酶等與肌膚紋理和完整性密切相關(guān)的酶類，促進(jìn)微循環(huán)，維持細(xì)胞正常代謝，從而促使毛孔收斂，潔凈，滋養(yǎng)，使肌膚細(xì)致無瑕。七葉樹以播種繁殖為主，由于其種子不耐貯藏，如干燥極易喪失生命力，故種子成熟后宜及時(shí)采下，隨采隨播。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是七葉樹組織培養(yǎng)的繁殖方法，本發(fā)明方法通過研究篩選出組培各階段的最佳培養(yǎng)基配方和主要影響因素，找出最佳的技術(shù)參數(shù)組合，從而建立最適宜的七葉樹組織培養(yǎng)體系，為七葉樹藥用資源的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。
[0004]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用下列技術(shù)方案:
取七葉樹的種子在濃硫酸中層積處理2h，流水沖洗2h，放入磨口廣口瓶中，在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇震蕩滅菌處理30s，50%的氯胺水震蕩滅菌處理15min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干表面水分，消毒處理過的七葉樹的種子接種到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌苗的培育，培養(yǎng)出來的無菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培養(yǎng)基中進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，加入8-10mg/L的牛血清蛋白，誘導(dǎo)出來的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖，培養(yǎng)條件為附加蔗糖40g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度26 °C，光照強(qiáng)度30001X，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來的叢生芽接入3/4MT+0.1-0.2mg/LIBA培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖20g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度28°C，光照強(qiáng)度80001x，光照時(shí)間16h/d。
[0005]采用本發(fā)明制備的七葉樹生根率高，利用率大，利于大規(guī)模種植。
[0006]下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】
[0007]實(shí)施例1
取七葉樹的種子在濃硫酸中層積處理2h，流水沖洗2h，放入磨口廣口瓶中，在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇震蕩滅菌處理30s，50%的氯胺水震蕩滅菌處理15min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干表面水分，消毒處理過的七葉樹的種子接種到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌苗的培育，培養(yǎng)出來的無菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培養(yǎng)基中進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，加入8mg/L的牛血清蛋白，誘導(dǎo)出來的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖，培養(yǎng)條件為附加蔗糖40g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度26°C，光照強(qiáng)度30001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來的叢生芽接入3/4MT+0.lmg/LIBA培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖20g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度28°C，光照強(qiáng)度80001x，光照時(shí)間16h/d,生根率93%。
[0008]實(shí)施例2
取七葉樹的種子在濃硫酸中層積處理2h，流水沖洗2h，放入磨口廣口瓶中，在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇震蕩滅菌處理30s，50%的氯胺水震蕩滅菌處理15min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干表面水分，消毒處理過的七葉樹的種子接種到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌苗的培育，培養(yǎng)出來的無菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培養(yǎng)基中進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，加入I Omg/L的牛血清蛋白，誘導(dǎo)出來的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖，培養(yǎng)條件為附加蔗糖40g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度26°C，光照強(qiáng)度30001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來的叢生芽接入3/4MT+0.2mg/LIBA培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖20g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度28°C，光照強(qiáng)度80001x，光照時(shí)間16h/d,生根率95%。
[0009]實(shí)施例3
取七葉樹的種子在濃硫酸中層積處理2h，流水沖洗2h，放入磨口廣口瓶中，在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇震蕩滅菌處理30s，50%的氯胺水震蕩滅菌處理15min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干表面水分，消毒處理過的七葉樹的種子接種到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌苗的培育，培養(yǎng)出來的無菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培養(yǎng)基中進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)，加入9mg/L的牛血清蛋白，誘導(dǎo)出來的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖，培養(yǎng)條件為附加蔗糖40g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度26°C，光照強(qiáng)度30001x，光照時(shí)間12h/d，誘導(dǎo)出來的叢生芽接入3/4MT+0.2mg/LIBA培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖20g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度28°C，光照強(qiáng)度80001x，光照時(shí)間16h/d,生根率96%。
【權(quán)利要求】
1.一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括種子的消毒、無菌苗的獲得、腋芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、生根誘導(dǎo)，其主要步驟如下: (1)取七葉樹的種子，進(jìn)行消毒處理； (2)將步驟(1)消毒處理過的七葉樹的種子接種到不加激素的1/2MS培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌苗的培育； (3)取步驟(2)培養(yǎng)出來的無菌苗切取根以上部分接入MT+lmg/L6-BA+lmg/LGA3培養(yǎng)基中進(jìn)行腋芽的誘導(dǎo)； (4)將步驟(3)誘導(dǎo)出來的腋芽接入MT+lmg/L6-BA+0.5mg/LKT培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽的增殖； (5)將步驟(3)誘導(dǎo)出來的叢生芽接入3/4MT+0.1-0.2mg/LIBA培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)，附加蔗糖20g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度28°C，光照強(qiáng)度80001x，光照時(shí)間16h/d。
2.按照權(quán)利要求1所述的一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(1)中所述七葉樹無菌種子的獲得為取七葉樹的種子在濃硫酸中層積處理2h，流水沖洗2h，放入磨口廣口瓶中，在超凈工作臺(tái)上用70%乙醇震蕩滅菌處理30s，50%的氯胺水震蕩滅菌處理15min，無菌水沖洗5次，吸水紙吸干表面水分。
3.按照權(quán)利要求1所述的一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(2)、(3)和(4)中培養(yǎng)條件為附加蔗糖40g/L，瓊脂7.5g/L，培養(yǎng)溫度26°C，光照強(qiáng)度30001x，光照時(shí)間 12h/d。
4.按照權(quán)利要求1所述的一種七葉樹組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于:步驟(3)中腋芽的誘導(dǎo)中加入8-10mg/L的牛血清蛋白可以防止在誘導(dǎo)過程中褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)，影響以下的增殖效果。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104255530SQ201410550654
【公開日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年10月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月17日
【發(fā)明者】劉東鋒, 楊成東 申請(qǐng)人:南京帝道農(nóng)業(yè)科技有限公司