一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明研究了一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括黑三棱無菌芽的獲得、芽的誘導(dǎo)、叢生芽的增殖、室外生根煉苗移栽等步驟，本發(fā)明方法建立了黑三棱的組培快繁體系，為開發(fā)和保護(hù)黑三棱野生資源提供一定的材料來源和技術(shù)方法。
【專利說明】一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及黑三棱組織培養(yǎng)的快繁方法，屬于植物栽培【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 黑三棱，黑三棱科，又名三棱、泡三棱，5· io/ofli/kra? (Graebn.) Buch.-Ham. ex Juz.，多年生水生或沼生草本，通常生于海拔1500米以下的湖泊、河溝、沼 澤、水塘邊淺水處，僅在我國(guó)西藏見于3600米高山水域中。產(chǎn)黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、 河北、山西、陜西、甘肅、新疆、江蘇、江西、湖北、云南等省區(qū)。阿富汗、朝鮮、日本、中亞地區(qū) 和西伯利亞及遠(yuǎn)東其他地區(qū)亦有分布。善喜暖濕潤(rùn)氣候，宜在向陽(yáng)、低濕的環(huán)境中生長(zhǎng)。對(duì) 土壤要求不嚴(yán)，可栽種在溝渠、池塘的淺水處，也可栽在水田里。本種塊莖是我國(guó)常用的中 藥，即"三棱"，具破瘀、行氣、消積、止痛、通經(jīng)、下乳等功效，是本科中重要經(jīng)濟(jì)植物；亦用于 花卉觀賞。用塊莖繁殖。冬季收獲的塊莖，放于客中貯藏，翌春用貯存的塊莖或臨時(shí)挖取的 塊莖為繁殖材料，按30cm開穴、深約10cm,每穴平放塊莖2-3個(gè),栽后燒灌清水，經(jīng)常保持有 水。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種黑三棱的快速繁殖方法，該方法建立了黑 三棱的組培快繁體系，為開發(fā)和保護(hù)黑三棱野生資源提供一定的材料來源和技術(shù)方法。
[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下方案來實(shí)現(xiàn)的： 選取黑三棱塊莖的幼嫩芽，流水沖洗30min，超凈工作臺(tái)上70%的酒精處理30s，0. 15% 的升萊處理18min，無菌水沖洗5次，用含500mg/L的頭孢霉素的無菌水浸泡30min，無 菌水沖洗2次，置于無菌濾紙上吸干水分，消毒處理過的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L， 瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度20001x，每天光照時(shí)間10h，PH5. 8,濕度85%，誘導(dǎo)出來 的芽放入培養(yǎng)基B6+6-BAl. 5-2. 0mg/L+IBA0. 3-0. 4mg/L進(jìn)行叢生芽的增殖培養(yǎng)，附加蔗糖 50g/L，瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度50001x，每天光照時(shí)間12h，PH5. 8-6. 0,濕度85%， 長(zhǎng)約3cm的芽苗取出，洗去基部培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min， 栽植于滅菌過的田園土 ：蛭石：鋸末=3 :1 :1基質(zhì)中，使用自動(dòng)噴水裝置，每三天噴灑一次 70-100ppmNAA溶液，每?jī)芍車娛?00倍的多菌靈溶液，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根成活率。
[0005] 采用本發(fā)明制備的黑三棱成活率高，周期短，產(chǎn)量大，污染小，利于大規(guī)模種植。
[0006] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不 局限于下列實(shí)施方式。

【具體實(shí)施方式】 [0007] 實(shí)施例1 選取黑三棱塊莖的幼嫩芽，流水沖洗30min，超凈工作臺(tái)上70%的酒精處理30s，0. 15% 的升萊處理18min，無菌水沖洗5次，用含500mg/L的頭孢霉素的無菌水浸泡30min，無 菌水沖洗2次，置于無菌濾紙上吸干水分，消毒處理過的黑三棱芽接入B6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L， 瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度20001x，每天光照時(shí)間10h，PH5. 8,濕度85%，誘導(dǎo)出來的 芽放入培養(yǎng)基B6+6-BAl. 5mg/L+IBA0. 3mg/L進(jìn)行叢生芽的增殖培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，瓊脂 6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度50001x，每天光照時(shí)間12h，PH5. 8-6. 0,濕度85%，長(zhǎng)約3cm的 芽苗取出，洗去基部培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中l(wèi)Omin，栽植于滅菌過的 田園土 ：蛭石：鋸末=3 :1 :1基質(zhì)中，使用自動(dòng)噴水裝置，每三天噴灑一次70ppmNAA溶液，每 兩周噴施600倍的多菌靈溶液，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根成活率，成活率88%。
[0008] 實(shí)施例2 選取黑三棱塊莖的幼嫩芽，流水沖洗30min，超凈工作臺(tái)上70%的酒精處理30s，0. 15% 的升萊處理18min，無菌水沖洗5次，用含500mg/L的頭孢霉素的無菌水浸泡30min，無 菌水沖洗2次，置于無菌濾紙上吸干水分，消毒處理過的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L， 瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度20001x，每天光照時(shí)間10h，PH5. 8,濕度85%，誘導(dǎo)出來的 芽放入培養(yǎng)基B6+6-BA2. 0mg/L+IBA0. 4mg/L進(jìn)行叢生芽的增殖培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，瓊脂 6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度50001x，每天光照時(shí)間12h，PH5. 8-6. 0,濕度85%，長(zhǎng)約3cm的 芽苗取出，洗去基部培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min，栽植于滅菌過的 田園土 ：蛭石：鋸末=3 :1 :1基質(zhì)中，使用自動(dòng)噴水裝置，每三天噴灑一次90ppmNAA溶液，每 兩周噴施600倍的多菌靈溶液，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根成活率，成活率90%。
[0009] 實(shí)施例3 選取黑三棱塊莖的幼嫩芽，流水沖洗30min，超凈工作臺(tái)上70%的酒精處理30s，0. 15% 的升萊處理18min，無菌水沖洗5次，用含500mg/L的頭孢霉素的無菌水浸泡30min，無 菌水沖洗2次，置于無菌濾紙上吸干水分，消毒處理過的黑三棱芽接入B 6+6-BA2. 5mg/ L+IBAO. 4mg/L+ZT0. 8mg/L+500mg/L水解乳蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L， 瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度20001x，每天光照時(shí)間10h，PH5. 8,濕度85%，誘導(dǎo)出來的 芽放入培養(yǎng)基B6+6-BA2. 0mg/L+IBA0. 4mg/L進(jìn)行叢生芽的增殖培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，瓊脂 6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度50001x，每天光照時(shí)間12h，PH5. 8-6. 0,濕度85%，長(zhǎng)約3cm的 芽苗取出，洗去基部培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)下端2-3cm浸泡于1/2MS溶液中10min，栽植于滅菌過的 田園土 ：蛭石：鋸末=3 :1 :1基質(zhì)中，使用自動(dòng)噴水裝置，每三天噴灑一次lOOppmNAA溶液， 每?jī)芍車娛?00倍的多菌靈溶液，一個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根成活率，成活率91%。
【權(quán)利要求】
1. 一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，包括黑三棱無菌芽的獲得、芽的誘導(dǎo)、叢生 芽的增殖、室外生根煉苗移栽，其主要步驟如下： (1) 取黑三棱塊莖的芽，進(jìn)行消毒處理； (2) 取步驟（1)消毒處理過的黑三棱芽接入Β6+6-ΒΑ2· 5mg/L+IBA0· 4mg/L+ZIU 8mg/ L+500mg/L水解乳蛋白培養(yǎng)基中進(jìn)行芽的誘導(dǎo)，附加蔗糖30g/L，瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光 照強(qiáng)度20001x，每天光照時(shí)間10h，PH5. 8,濕度85% ; (3) 取步驟（2)誘導(dǎo)出來的芽放入培養(yǎng)基Β6+6-ΒΑ1· 5-2. Omg/L+IBAO. 3-0. 4mg/L進(jìn)行 叢生芽的增殖培養(yǎng)，附加蔗糖50g/L，瓊脂6. 5g/L，溫度28°C，光照強(qiáng)度50001x，每天光照時(shí) 間 12h，PH5. 8,濕度 85% ; (4) 取步驟（3)培養(yǎng)出來的叢生芽取出進(jìn)行室外生根煉苗移栽。
2. 按照權(quán)利要求1所述的一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟 (1)中所述黑三棱無菌芽的獲得為，選取黑三棱塊莖的幼嫩芽，流水沖洗30min，超凈工作臺(tái) 上70%的酒精處理30s，0. 15%的升汞處理18min，無菌水沖洗5次，用含500mg/L的頭孢霉 素的無菌水浸泡30min，無菌水沖洗2次，置于無菌濾紙上吸干水分。
3. 按照權(quán)利要求1所述的一種黑三棱組織培養(yǎng)的快速繁殖方法，其特征在于：步驟 (4)中一枝黃花的生根煉苗培養(yǎng)方法為長(zhǎng)約3cm的芽苗取出，洗去基部培養(yǎng)基，形態(tài)學(xué)下端 2-3cm浸泡于1/2MS溶液中l(wèi)Omin，栽植于滅菌過的田園土 ：蛭石：鋸末=3 :1 :1基質(zhì)中，使 用自動(dòng)噴水裝置，每三天噴灑一次70-100ppmNAA溶液，每?jī)芍車娛?00倍的多菌靈溶液，一 個(gè)月后統(tǒng)計(jì)生根成活率。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104206273SQ201410463051
【公開日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】楊存 申請(qǐng)人:南京通澤農(nóng)業(yè)科技有限公司