一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雞爪草組培快速培養(yǎng)方法，為低鹽濃度的培養(yǎng)液，加有幾種植物生長調(diào)節(jié)劑組合成一種培養(yǎng)基配方，使用本發(fā)明的組培快繁培養(yǎng)基，優(yōu)株腋芽莖段為外植體，整個(gè)無菌培養(yǎng)過程只需一種培養(yǎng)基，培養(yǎng)過程簡單易行。在培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)和生根誘導(dǎo)同步進(jìn)行，一次成苗?？s短雞爪草組培苗育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明還公開了雞爪草一次成苗組培快繁方法，增殖培養(yǎng)過程為以芽繁芽方式，增殖系數(shù)高，無變異現(xiàn)象；生根過程中無愈傷組織形成，為皮部生根，移栽成活率高。
【專利說明】一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及組織培方法，尤其涉及一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法。
【背景技術(shù)】
[0002]雞爪草在《中國藥典》各版中均有收錄。雞爪草具有抗炎、抗原生物、抗菌、抗過敏、抗腫瘤和細(xì)胞毒素、護(hù)肝以及消除耐藥質(zhì)粒等作用，臨床上用于治療鼻咽癌、鼻炎、結(jié)石癥、頭痛、跌打損傷以及面癱等癥。近年來，由于除草劑的廣泛應(yīng)用，造成產(chǎn)量銳減，加上雞爪草全株藥用，且單株產(chǎn)量低，雞爪草遭到掠奪式地采集，野生自然資源受到嚴(yán)重破壞，市場價(jià)格一路上揚(yáng)，是一味用途廣泛，具有開發(fā)應(yīng)用前景的中藥品種。
[0003]采用組織培養(yǎng)方法能大量繁殖種苗，雞爪草組培育苗鮮有報(bào)道，常規(guī)的組培育苗方法分繼代增殖和生根誘導(dǎo)兩個(gè)步驟，采用的培養(yǎng)基分繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，育苗周期長。雞爪草為一年生草本植物，全株藥用，生根瓶苗可成叢栽種在苗床中，因此如能在同一種培養(yǎng)基中同步進(jìn)行雞爪草繼代增殖和生根誘導(dǎo)，一次成苗，可節(jié)省成本及縮短組培苗育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，在培養(yǎng)基中繼代增殖和生根誘導(dǎo)同步進(jìn)行，一次成苗，縮短雞爪草組培育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:
一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，其特征在于包括以下步驟:
步驟1.外植體消毒:于晴天選取生長健壯的、無病蟲害的雞爪草植株，剪取莖段和頂芽作為外植體，剪去葉片，清洗，消毒；
步驟2.芽的誘導(dǎo):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成約2cm長段，每段留1-2個(gè)腋芽，然后斜插或垂直插在裝有上述配制好的培養(yǎng)基的玻璃瓶中。外植體初次培養(yǎng)時(shí)，全暗培養(yǎng)10-15天腋芽萌動，再移至見光的地方培養(yǎng)；
步驟3.芽的增殖和生根培養(yǎng):當(dāng)腋芽萌動長至Icm時(shí)，切取腋芽接種在裝有培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行芽的繼代增殖和生根培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為26±2°C，光照12h.d-1，光照度1500-30001χο繼代培養(yǎng)約20天芽長至2_3 cm,萌發(fā)出根系，30天長至3_5 Cm，根長2_3 cm,形成完整植株，30天后，再從一部份生根瓶苗完整植株上剪切無菌苗的腋芽莖段，進(jìn)行培養(yǎng)，不斷繼代增殖，培養(yǎng)20天，增殖系數(shù)達(dá)到6.0-8.5，將另一部份生根瓶苗直接移至室外煉苗大棚在自然散射光照下培養(yǎng)5-7天；
步驟4.生根苗的移栽及管護(hù):待生根小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長，苗高4cm時(shí)即可進(jìn)行移栽，移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，并截去過長的根系，保留2-2.5cm長，移栽于經(jīng)0.2%高錳酸鉀消毒過的苗床中，苗床基質(zhì)為黃心土:細(xì)河沙:泥炭土，體積比為3:1:1，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，避免陽光直射，移栽一周后，揭開部分薄膜透氣，每間隔7天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。
[0006]特別地，在步驟(1)中采用濃度0.1%的氯化汞消毒6-7分鐘。
[0007]特別地，玻璃瓶是廣口瓶。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，在整個(gè)無菌培養(yǎng)過程只需一種培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)和生根誘導(dǎo)同步進(jìn)行，一次成苗，縮短雞爪草組培苗育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0009]實(shí)施例一
外植體消毒:于晴天選取生長健壯的、無病蟲害的雞爪草植株，剪取莖段和頂芽作為外植體，剪去葉片(留葉柄)，用加有少許洗潔精的水清洗1-2次，再用流水沖洗干凈，然后在超凈工作臺上用0.1%的氯化汞消毒6-7分鐘并搖動數(shù)次，最后用無菌水清洗4-5次。
[0010]芽的誘導(dǎo):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成約2cm長段，每段留1-2個(gè)腋芽，然后斜插或垂直插在裝有上述實(shí)施例1配制好的培養(yǎng)基的廣口瓶中。外植體初次培養(yǎng)時(shí)，全暗培養(yǎng)10-15天腋芽即可開始萌動，然后再移至見光的地方培養(yǎng)。
[0011]芽的增殖和生根培養(yǎng):當(dāng)腋芽萌動長至Icm左右時(shí)，切取腋芽接種在裝有培養(yǎng)基的廣口瓶中，進(jìn)行芽的繼代增殖和生根培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。繼 代培養(yǎng)約20天芽長至2-3 Cm，開始萌發(fā)出根系，30天長至3-5 Cm，根長2-3 cm,形成完整植株。30天后，再從一部份生根瓶苗完整植株上剪切無菌苗的腋芽莖段，進(jìn)行培養(yǎng)，不斷繼代增殖，培養(yǎng)約20天，增殖系數(shù)達(dá)到6.0-8.5。將另一部份生根瓶苗直接移至室外煉苗大棚在自然散射光照下培養(yǎng)5-7天。
[0012]生根苗的移栽及管護(hù):待生根小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長，苗高4cm左右時(shí)即可進(jìn)行移栽。移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，并截去過長的根系，保留2-2.5cm長，移栽于經(jīng)0.2%高錳酸鉀消毒過的苗床中，苗床基質(zhì)體積比為黃心土:細(xì)河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，保持一定的溫度和濕度，并要避免陽光直射，移栽一周后，可揭開部分薄膜透氣，以后揭開薄膜的面積可逐漸加大，每間隔7天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。10-20天成活，成活率達(dá)92.5%。
[0013]實(shí)施例二
外植體消毒:于晴天選取生長健壯的、無病蟲害的雞爪草植株，剪取莖段和頂芽作為外植體，剪去葉片(留葉柄)，用加有少許洗潔精的水清洗1-2次，再用流水沖洗干凈，然后在超凈工作臺上用0.1%的氯化汞消毒6-7分鐘并搖動數(shù)次，最后用無菌水清洗4-5次。
[0014]芽的誘導(dǎo):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成約2cm長段，每段留1-2個(gè)腋芽，然后斜插或垂直插在裝有上述實(shí)施例2配制好的培養(yǎng)基的廣口瓶中。外植體初次培養(yǎng)時(shí)，全暗培養(yǎng)10-15天腋芽即可開始萌動，然后再移至見光的地方培養(yǎng)。
[0015]芽的增殖和生根培養(yǎng):當(dāng)腋芽萌動長至Icm左右時(shí)，切取腋芽接種在裝有培養(yǎng)基的廣口瓶中，進(jìn)行芽的繼代增殖和生根培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。繼代培養(yǎng)約20天芽長至2-3 Cm，開始萌發(fā)出根系，30天長至3-5 Cm，根長2-3 cm,形成完整植株。30天后，再從一部份生根瓶苗完整植株上剪切無菌苗的腋芽莖段，進(jìn)行培養(yǎng)，不斷繼代增殖，培養(yǎng)約20天，增殖系數(shù)達(dá)到6.0-8.5。將另一部份生根瓶苗直接移至室外煉苗大棚在自然散射光照下培養(yǎng)5-7天。
[0016]生根苗的移栽及管護(hù):待生根小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長，苗高4cm左右時(shí)即可進(jìn)行移栽。移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，并截去過長的根系，保留2-2.5cm長，移栽于經(jīng)0.2%高錳酸鉀消毒過的苗床中，苗床基質(zhì)體積比為黃心土:細(xì)河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，保持一定的溫度和濕度，并要避免陽光直射，移栽一周后，可揭開部分薄膜透氣，以后揭開薄膜的面積可逐漸加大，每間隔7天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。10-20天成活，成活率達(dá)92.6%。
[0017]實(shí)施例三
植體消毒:于晴天選取生長健壯的、無病蟲害的雞爪草植株，剪取莖段和頂芽作為外植體，剪去葉片(留葉柄)，用加有少許洗潔精的水清洗1-2次,再用流水沖洗干凈，然后在超凈工作臺上用0.1%的氯化汞消毒6-7分鐘并搖動數(shù)次，最后用無菌水清洗4-5次。
[0018]芽的誘導(dǎo):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成約2cm長段，每段留1-2個(gè)腋芽，然后斜插或垂直插在裝有上述實(shí)施例3配制好的培養(yǎng)基的廣口瓶中。外植體初次培養(yǎng)時(shí)，全暗培養(yǎng)10-15天腋芽即可開始萌動，然后再移至見光的地方培養(yǎng)。
[0019]芽的增殖和生根培養(yǎng):當(dāng)腋芽萌動長至Icm左右時(shí)，切取腋芽接種在裝有培養(yǎng)基的廣口瓶中，進(jìn)行芽的繼代增殖和生根培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為(26±2) 0C ,光照12h.d-Ι，光照度1500-30001x。繼代培養(yǎng)約20天芽長至2-3 Cm，開始萌發(fā)出根系，30天長至3-5 Cm，根長2-3 cm,形成完整植株。30天 后，再從一部份生根瓶苗完整植株上剪切無菌苗的腋芽莖段，進(jìn)行培養(yǎng)，不斷繼代增殖，培養(yǎng)約20天，增殖系數(shù)達(dá)到6.0-8.5。將另一部份生根瓶苗直接移至室外煉苗大棚在自然散射光照下培養(yǎng)5-7天。
[0020]生根苗的移栽及管護(hù):待生根小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長，苗高4cm左右時(shí)即可進(jìn)行移栽。移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，并截去過長的根系，保留2-2.5cm長，移栽于經(jīng)0.2%高錳酸鉀消毒過的苗床中，苗床基質(zhì)體積比為黃心土:細(xì)河沙:泥炭土(3:1:1)，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，保持一定的溫度和濕度，并要避免陽光直射，移栽一周后，可揭開部分薄膜透氣，以后揭開薄膜的面積可逐漸加大，每間隔7天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。10-20天成活，成活率達(dá)94.1%。
【權(quán)利要求】
1.一種雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，其特征在于包括以下步驟: 步驟1.外植體消毒:于晴天選取生長健壯的、無病蟲害的雞爪草植株，剪取莖段和頂芽作為外植體，剪去葉片，清洗，消毒； 步驟2.芽的誘導(dǎo):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成約2cm長段，每段留1-2個(gè)腋芽，然后斜插或垂直插在裝有上述配制好的培養(yǎng)基的玻璃瓶中，外植體初次培養(yǎng)時(shí)，全暗培養(yǎng)10-15天腋芽萌動，再移至見光的地方培養(yǎng)； 步驟3.芽的增殖和生根培養(yǎng):當(dāng)腋芽萌動長至Icm時(shí)，切取腋芽接種在裝有培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行芽的繼代增殖和生根培養(yǎng)，培養(yǎng)室溫度為26±2°C，光照12h.d-1，光照度1500-30001x,繼代培養(yǎng)約20天芽長至2_3 Cm，萌發(fā)出根系，30天長至3_5 Cm，根長2_3 Cm，形成完整植株，30天后，再從一部份生根瓶苗完整植株上剪切無菌苗的腋芽莖段，進(jìn)行培養(yǎng)，不斷繼代增殖，培養(yǎng)20天，增殖系數(shù)達(dá)到6.0-8.5，將另一部份生根瓶苗直接移至室外煉苗大棚在自然散射光照下培養(yǎng)5-7天； 步驟4.生根苗的移栽及管護(hù):待生根小苗葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長，苗高4cm時(shí)即可進(jìn)行移栽，移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，并截去過長的根系，保留2-2.5cm長，移栽于經(jīng)0.2%高錳酸鉀消毒過的苗床中，苗床基質(zhì)為黃心土:細(xì)河沙:泥炭土，體積比為3:1:1，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，避免陽光直射，移栽一周后，揭開部分薄膜透氣，每間隔7天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，其特征在于:在步驟(1)中采用濃度0.1%的氯化汞消 毒6-7分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雞爪草組培快速養(yǎng)培方法，其特征在于:玻璃瓶是廣口瓶。
【文檔編號】A01H4/00GK104026020SQ201410286741
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月25日
【發(fā)明者】李永鋒, 傅汝毅, 陳國勇, 陶玲云, 藍(lán)文苑 申請人:廣西博士海意信息科技有限公司