一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【專利摘要】一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟：（1）取地楓皮種子作為外植體進(jìn)行消毒；（2）將消毒后的外植體置于MS基本培養(yǎng)基中誘導(dǎo)發(fā)芽得到無(wú)菌試管苗；（3）將所述無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中進(jìn)行試管苗快速繁殖培養(yǎng)獲得叢生芽；（4）將所述叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗培養(yǎng)得到健壯植株；（5）將所述健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到完整的帶根苗；（6）取完整的帶根苗進(jìn)行煉苗后移植于沙床生長(zhǎng)一個(gè)月，再移栽至大田。采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的地楓皮叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到8-12倍，獲得的組培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上，有效解決了地楓皮的規(guī)?；鐔?wèn)題。
【專利說(shuō)明】一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]地楓皮(Illicium difengpi B.N Chang et al.)為木蘭科八角茴香屬植物,其干燥樹(shù)皮供藥用，具有祛風(fēng)除濕，行氣止痛等功效，臨床常用于風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、腰肌勞損和跌打損傷等癥狀治療，療效好，藥用價(jià)值高，是多種中成藥產(chǎn)品的主要原材料。經(jīng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，地楓皮多生于石灰?guī)r地區(qū)的山頂或石山疏林下，其生境分布區(qū)域非常狹窄，野生資源蘊(yùn)藏量稀少，而且由于長(zhǎng)期以來(lái)不合理的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)方式和盲目的資源開(kāi)發(fā)利用，導(dǎo)致巖溶地區(qū)土地生產(chǎn)力持續(xù)下降、石漠化面積不斷擴(kuò)增，地楓皮的生存環(huán)境受到的破壞越來(lái)越大，野生地楓皮的生產(chǎn)能力越來(lái)越弱，地楓皮于1992年已屬于國(guó)家III級(jí)重點(diǎn)保護(hù)珍稀瀕危植物，1999年又被批準(zhǔn)為國(guó)家II級(jí)重點(diǎn)保護(hù)野生植物，而目前地楓皮已被列入《中國(guó)植物紅皮書》漸危種。
[0003]在自然條件下，地楓皮主要以種子進(jìn)行繁殖，但是因其種皮較薄，干燥時(shí)種子的油脂會(huì)變質(zhì)，過(guò)濕時(shí)又容易腐爛，極易喪失發(fā)芽力，而其生長(zhǎng)環(huán)境巖石多，土壤稀薄，無(wú)法為地楓皮種子的正常繁殖提供理想的生長(zhǎng)環(huán)境，致使在自然環(huán)境中地楓皮的繁殖能力非常低弱，資源更新速度非常緩慢，難以滿足市場(chǎng)需要。雖然也有科研工作者對(duì)地楓皮的扦插繁殖技術(shù)進(jìn)行一定程度的研究，但效果不是十分明顯，無(wú)法滿足人工栽培的需要。而采用生物技術(shù)組織培養(yǎng)技術(shù)，可以有效快速地提高地楓皮種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)地楓皮優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足生產(chǎn) 上的需要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，它能夠快速繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良地楓皮種苗、滿足生產(chǎn)需要。
[0005]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的:一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟:
[0006](I)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0007](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0008](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含0.5-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、
0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的PH值為5.8 ；
[0009](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0010](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; [0011](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。
[0012]本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于:
[0013](I)采用生物技術(shù)對(duì)地楓皮進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，通過(guò)地楓皮叢生芽的繁殖，在短時(shí)間內(nèi)可培育出大量適合栽培種植的地楓皮幼苗，顯著提高了地楓皮種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)模化生產(chǎn)，滿足生產(chǎn)上的需要。
[0014](2)在MS繁殖培養(yǎng)基中添加的6-芐基腺嘌呤6-BA、吲哚乙酸IAA和激動(dòng)素KT屬于化學(xué)合成物質(zhì)，價(jià)格較為便宜，可大大降低地楓皮組織培養(yǎng)的成本消耗，達(dá)到降低成本的目的；
[0015]在MS繁殖培養(yǎng)基中添加0.5-3.0mg/L的6_芐基腺嘌呤6-BA和0.1-1.5mg/L的激動(dòng)素KT可促進(jìn)叢生芽的分化；添加濃度為0.1-0.5mg/L的生長(zhǎng)激素吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽的生長(zhǎng)；
[0016]在MS壯苗培養(yǎng)基中添加濃度為1.0-3.0mg/L的6_芐基腺嘌呤6-BA和0.2-1.0的吲哚乙酸IAA可促進(jìn)叢生芽的再次增殖及長(zhǎng)高展葉；
[0017]在MS生根培養(yǎng)基上組合使用濃度為0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸MA、0.1-0.5mg/L的生根粉ABT可獲得帶根的完整植株，這些植株經(jīng)煉苗后可直接移栽沙床。
[0018](3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的地楓皮叢生芽增殖系數(shù)達(dá)到8-12倍，叢生芽經(jīng)過(guò)復(fù)壯后，接種到含有生根粉IAA、ABT的生根培養(yǎng)基上，獲得的組培苗生根率在85%以上，移栽苗床成活率在90%以上；快速、便捷、高效地進(jìn)行地楓皮組織培養(yǎng)，實(shí)現(xiàn)地楓皮組培種苗的規(guī)?；a(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明。
[0020]實(shí)施例1
[0021]本發(fā)明所述的地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0022](I)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0023](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0024](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、1.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為8.8 ；
[0025](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、1.5mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為3.5 ；
[0026](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的萘乙酸NAA,0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為85.6% ；
[0027](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。
[0028]實(shí)施例2
[0029]本發(fā)明所述的地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0030](I)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0031](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0032](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.lmg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為10.6 ；[0033](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.8 ；
[0034](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的萘乙酸NAA,0.lmg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為89.2% ；[0035](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。
[0036]實(shí)施例3
[0037]本發(fā)明所述的地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的再一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0038](I)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0039](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0040](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.8mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為10.3 ；
[0041](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.6mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.2 ；
[0042](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.6mg/L的吲哚乙酸IAA、0.3mg/L的萘乙酸NAA,0.3mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為
92.6% ；
[0043](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。[0044]實(shí)施例4
[0045]本發(fā)明所述的地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法的又一個(gè)實(shí)例，包括以下步驟:
[0046](I)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0047](2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0048](3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含，2.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.3mg/L的吲哚乙酸IAA、0.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽增殖系數(shù)為11.5;
[0049](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.8mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，叢生芽再次增殖的系數(shù)為4.0 ；
[0050](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.8mg/L的吲哚乙酸IAA、0.lmg/L的萘乙酸NAA,0.2mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8，生根率為
93.3% ；
[0051](6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水， 煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。
【權(quán)利要求】
1.一種地楓皮的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，其特征在于:該方法包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒:取地楓皮種子作為外植體，依次用2%洗潔精水溶液浸泡5min、線狀自來(lái)水沖洗15-30min、添加了 2_3滴吐溫-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，其中無(wú)菌水為經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水； (2)種子萌發(fā)獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(1)得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天，種子發(fā)芽后獲得無(wú)菌試管苗，其中MS培養(yǎng)基中含0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的無(wú)菌試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為8_10小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得到試管苗叢生芽，其中MS繁殖培養(yǎng)基中含0.5-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1-0.5mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-1.5mg/L的激動(dòng)素KT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的PH值為5.8 ； (4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中含1.0-3.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6_BA、0.2-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于MS生根培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001UX，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)35天得到帶根的完整植株，其中MS生根培養(yǎng)基中含0.1-1.0mg/L的吲哚乙酸IAA、0.1-0.5mg/L的萘乙酸NAA,0.1-0.5mg/L的生根粉ABT、30g/L蔗糖和3.4g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ; (6)煉苗與移栽:步驟(5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開(kāi)瓶蓋，在瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗2-4天，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽大田。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103734014SQ201410005203
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2014年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月6日
【發(fā)明者】韋坤華, 李林軒, 呂惠珍, 繆劍華, 黃寶優(yōu), 韋范, 秦雙雙 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)藥用植物園