本發(fā)明涉及使用肉色擬青霉Paecilomyces carneus預(yù)防和/或控制和/或消滅植物寄生線蟲，這些線蟲為遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲并屬于?？艫nguinidae、滑刃科Aphelenchidae、擬滑刃科Aphelenchoididae、環(huán)科Criconematidae、錐科Dolichodoridae、鞘科Hemicycliophoridae、異皮科Heteroderidae、紐帶科Hoplolaimidae、小齒科Iotonchidae、新墊刃科Neotylenchidae、短體科Pratylenchidae、球狀科Sphaerulariidae、墊刃科Tilenchidae、半穿刺科Tylenchulidae(墊刃亞目Suborder Tylenchina)、長針科Longidoridae(矛線亞目Suborder Dorylaimina)、毛刺科Trichodoridae(膜皮亞目Suborder Diphtherophorina)。本發(fā)明的組合物及方法可以預(yù)防和/或控制和/或消滅植物寄生性線蟲，從而使絕大多數(shù)為動物和人類所消耗的作物免受線蟲的感染和/或侵?jǐn)_，同時在土壤中創(chuàng)造提高作物產(chǎn)量的最佳條件，可以獲得有機(jī)產(chǎn)品。

技術(shù)背景

無論在什么地方，害蟲都是破壞農(nóng)作物的一個生物因素。由于害蟲妨礙了植物的最佳發(fā)育，它們對農(nóng)作物造成的傷害降低了農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量、減少產(chǎn)量。并且根據(jù)害蟲及其侵害程度，它們可能會造成寄主的死亡。

對農(nóng)作物質(zhì)量及產(chǎn)量造成重大傷害的害蟲包括用顯微鏡可見的植物寄生線蟲，并且根據(jù)它們的生命周期，它們以不同方式影響植物。這些線蟲使農(nóng)作物產(chǎn)生枯萎、萎黃病、矮態(tài)、佝僂病、脫葉、缺乏活力、感染處壞死等癥狀，造成農(nóng)作物衰弱或死亡，從而導(dǎo)致產(chǎn)量減少。為了控制侵害農(nóng)作物的害蟲，農(nóng)民需要使用化學(xué)殺蟲劑。使用化學(xué)殺蟲劑的其中一些缺點(diǎn)就是使用時會帶來高風(fēng)險(xiǎn)；食物產(chǎn)品中存在的化學(xué)殺蟲劑會損害消費(fèi)者的健康?；瘜W(xué)殺蟲劑的過度使用會改變pH值以及植物性毒素總量中的礦物含量，從而導(dǎo)致土壤失去肥力；此外，它們可能影響產(chǎn)品質(zhì)量，對化學(xué)藥劑產(chǎn)生抗性，導(dǎo)致更大劑量的使用化學(xué)殺蟲劑。

描述了目前最先進(jìn)的不同的線蟲控制方法；其中包括化學(xué)方法，例如：使用2R，5R-二羥基甲基-2R，4R-二羥基吡咯烷(專利號：WO/1999/059414)；一種分子式為C27H30O9的化學(xué)藥劑(專利號：WO/1993/002083)；使用用于線蟲控制的氟吡菌酰胺(專利號：WO/2012/038476)；基于1-70％次磷酸鉀和亞磷酸銨化肥組合物、1-30％硼肥(專利號：CN101492323)及其他。

另一方面，有使用微生物進(jìn)行線蟲控制的生物學(xué)方法，包括：食神鞘氨醇桿菌SphingobacteriumspiritivorumC-926及棒狀桿菌Corynobacterium paurometabolumC-924(專利號：MX 250042)；巴斯德氏芽菌屬Pasteuria spp.(專利號：MX 193344)；節(jié)叢孢屬Arthrobotrys真菌(專利號：US4,666,714)；蘇云金芽孢桿菌Bacillusthuringiensis(專利號：US5,270,448)；鏈霉菌屬Streptomyces dicklowiiATCC 55274(專利號：US5,549,889)；真菌厚垣孢子變種厚垣孢普奇尼亞菌Pochoniachlamydosporia var.chlamydosporia(專利號：US2009169518)；厚垣輪枝孢菌VerticilliumchlamydosporiumCC334168(專利號：WO/1991/001642)及其他。

另一個選擇是化合物與生物制劑的組合，比如：噻嗪酮及擬青霉Paecilomyces sp.(專利號：US5,885,598)；帶擬青霉的氟硅菊酯和/或醚菊酯(專利號：US5,888,989)及其他。最后是涉及產(chǎn)生有線蟲抗性農(nóng)作物的基因改造的方法，比如下方專利文獻(xiàn)中描述的那些方法：GEP20002245、US6,294,712、US7,576,261、CN1903014、WO/2003/080838及其他。

化學(xué)方法觀察到的缺點(diǎn)是上述那些殺線蟲劑應(yīng)用的方法；對于化學(xué)制劑及生物制劑的組合，盡管有些時候通過減少化學(xué)制劑的量來實(shí)現(xiàn)，但那些缺點(diǎn)不會消失；由于從長期來看無法確定這種基因改造農(nóng)產(chǎn)品消費(fèi)的后果，創(chuàng)造抗蟲害農(nóng)作物的農(nóng)作物基因改造是一個除了高成本外還給消費(fèi)者帶來長期風(fēng)險(xiǎn)的選擇。

現(xiàn)在，生物學(xué)方法是最廣泛接受、最便利的方法，因?yàn)樗鼈兪褂脤ψ罱K消費(fèi)者無害的微生物并幫助保護(hù)土壤和農(nóng)作物的質(zhì)量，從而保護(hù)最終產(chǎn)品的質(zhì)量。

目前，擬青霉屬真菌被用作殺線蟲劑，因?yàn)樗苡行⑺谰€蟲而不傷害農(nóng)作物。專利文獻(xiàn)US7,435,411B2、CN101418264和US20050008619描述了使用含有淡紫擬青霉Paecilomyces lilacinus的組合物對土壤中的害蟲進(jìn)行控制；專利文獻(xiàn)US5,989,543、CN101422168、DE102005024783、CN101081982、CA2059642、US5,360,607、US5,989,543和CN101518265描述了使用淡紫擬青霉、玫煙色擬青霉Paecilomyces fumosoroseus、淡紫擬青霉251、淡紫擬青霉252、淡紫擬青霉253、淡紫擬青霉254及蟬擬青霉Paecilomyces cicadae進(jìn)行線蟲控制；最后，專利申請書MX/a/2011/004510描述了使用肉色擬青霉菌株P(guān)aecilomyces carneusIE-431預(yù)防和/或控制和/或消滅茄科農(nóng)作物的孢囊線蟲。

高風(fēng)險(xiǎn)農(nóng)作物線蟲中包括根結(jié)線蟲屬M(fèi)eloidogyne spp癭線蟲、根腐線蟲和根蛀蟲、遷移性和固著性體內(nèi)寄生蟲及其他。根腐線蟲和根蛀蟲是遷移性內(nèi)寄生蟲，包括莖線蟲屬Ditylenchus spp.、短體線蟲屬Pratylenchus spp.、穿孔線蟲屬Radopholus spp.及其他；遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲包括螺旋線蟲屬Helicotylenchus spp.、輪線蟲屬Criconemoides spp.、劍線蟲屬Xiphinema spp.及其他。受上述線蟲侵害的主要農(nóng)作物如表1所示：

表1受線蟲侵害的農(nóng)作物

固著性內(nèi)寄生線蟲是那些令不同農(nóng)作物根部畸形的寄生蟲，因?yàn)樗鼈円鸸B(yǎng)部分細(xì)胞的過度發(fā)育，造成供養(yǎng)部分內(nèi)部出現(xiàn)根癭(根結(jié)線蟲屬)。

遷移性內(nèi)寄生線蟲完全進(jìn)入其寄主的根部，通過皮質(zhì)并以細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)為食，從而導(dǎo)致組織的大范圍毀壞，并造成植物根部系統(tǒng)的萎縮(莖線蟲屬、短體線蟲屬、穿孔線蟲屬及其他)。

半內(nèi)寄生性線蟲緊緊附著在寄主植物上，部分身體暴露在外面。幼蟲孵出時進(jìn)入土壤，隨后附著在植物的根部(胞囊屬Heterodera spp.、刻點(diǎn)胞囊Punctodera spp.及其他)。

固著性外寄生線蟲只有身體的頭部寄生在寄主植物內(nèi)，通常情況下不會分離，除非繁殖。它們直接在土壤里產(chǎn)卵(螺旋線蟲屬、矮化線蟲屬Tylenchorhinchus spp.、輪線蟲屬及其他)。

遷移性外寄生蟲在短時間內(nèi)以一個特定部分為食，只將口針插入植物根部。有些引起合胞體形成；一個線蟲進(jìn)食的多核增生細(xì)胞(劍線蟲屬、長針線蟲屬Longidorus spp.、毛刺線蟲屬Trichodorus spp.及其他)。

在大部分國家，農(nóng)業(yè)都是最重要的生產(chǎn)部門，在創(chuàng)造就業(yè)中有著舉足輕重的地位。農(nóng)業(yè)收入的整體增長是刺激整個經(jīng)濟(jì)增長的一個必要條件，包括銷售其產(chǎn)品和服務(wù)給農(nóng)村人口的非農(nóng)業(yè)部門。

墨西哥國土面積1.98億公頃，其中1.45億公頃專用于畜牧業(yè)。這就是為什么農(nóng)業(yè)是重要生產(chǎn)部門的原因，占國民生產(chǎn)總值的4％，是農(nóng)村地區(qū)的核心活動，全國人口的很大一部分依然居住在農(nóng)村地區(qū)。

在氣候及生態(tài)系統(tǒng)方面，世界不同地區(qū)、甚至各個國家不同地區(qū)有著顯著的氣候差異，所以無論是在國內(nèi)還是國際上，這些地區(qū)的農(nóng)民要想有競爭力，害蟲防治是至關(guān)重要的。

因此，必須有用于不同土壤及環(huán)境條件的害蟲防治方法，并且還不會影響產(chǎn)品的質(zhì)量或生產(chǎn)者和/或消費(fèi)者的健康；本發(fā)明披露了使用真菌進(jìn)行線蟲防治的方法，效果好、效率高且價(jià)格低廉。

發(fā)明目的

本發(fā)明涉及使用生物學(xué)純菌株的肉色擬青霉及其組合物預(yù)防和/或控制和/或消滅一類感染和/或寄生于農(nóng)作物的遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲植物寄生線蟲，以便獲得用于動物及人類消費(fèi)的安全、優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。這類遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲植物寄生線蟲屬于：?？?、滑刃科、擬滑刃科、環(huán)科、錐科、鞘科、異皮科、紐帶科、小齒科、新墊刃科、短體科、球狀科、墊刃科、半穿刺科(墊刃亞目)、長針科(矛線亞目)、毛刺科(膜皮亞目)。

附圖說明

圖1.寄生肉色擬青霉菌株IE-431的根結(jié)線蟲。

圖2. 72小時短體線蟲上肉色擬青霉菌株418的生長情況。

圖3. 120小時短體線蟲上肉色擬青霉菌株418的生長情況。

圖4.紐帶線蟲Hoplolaimus spp.上肉色擬青霉菌株418的致病圖。

圖5.輪線蟲上肉色擬青霉菌株418的致病圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明涉及使用和應(yīng)用一個或多個肉色擬青霉細(xì)胞控制和/或預(yù)防和/或消滅一類植物寄生線蟲；這類植物寄生線蟲為感染和/或侵害農(nóng)田的遷移性和/或固著性內(nèi)寄生蟲群并屬于?？啤⒒锌?、擬滑刃科、環(huán)科、錐科、鞘科、異皮科、紐帶科、小齒科、新墊刃科、短體科、球狀科、墊刃科、半穿刺科(墊刃亞目)、長針科(矛線亞目)、毛刺科(膜皮亞目)。

肉色擬青霉菌株IE-412、IE-416、IE-418、IE-419、IE-431、IE-451和IE-452被存放、保存、儲存在生態(tài)研究所(Instituto de Ecología A.C.)的真菌菌種庫(INECOL)中。這些菌株的生產(chǎn)和/或分離和/或保存是通過在包含至少一個氮源和/或至少一個碳源和/或一種或多種礦物鹽和/或至少一個合適的載體和/或至少一種抗生素劑和/或至少一種促生長劑的固體培養(yǎng)基上培育它們來實(shí)現(xiàn)。在培養(yǎng)基中真菌的孵化溫度大約為13-37℃。

真菌的繁育和繁殖主要包括固體或液體培養(yǎng)基組合物中的細(xì)胞接種；固體或液體培養(yǎng)基組合物包括足夠量的一種或多種氨基酸和/或一種或多種長鏈碳水化合物和/或一種或多種礦物鹽和/或一種或多種載體和/或一種或多種抗生素劑和/或一種或多種緩沖劑。培養(yǎng)是固定培養(yǎng)或靜止培養(yǎng)，在40-90％氧含量中的不間斷氧合作用讓真菌肉色擬青霉實(shí)現(xiàn)最佳發(fā)育。

肉色擬青霉的作用機(jī)制的特點(diǎn)是產(chǎn)生特定的酶，讓其在線蟲發(fā)育的任何階段(幼蟲、成蟲、卵及其他)都能降解線蟲角質(zhì)層并進(jìn)入到線蟲內(nèi)部，肉色擬青霉在線蟲內(nèi)部生長、繁殖，直到引起不同分類群的植物寄生線蟲的死亡。

肉色擬青霉菌株IE-418的特點(diǎn)是擁有下列DNA核苷酸序列：

GGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCCTGTGAACTTATACCATTTACTGTTGCTTCGGCGGGTCACGGCCCCGGGGAAGGACAGCGGTCGCCGTCAGGCCTCAGCTGCCCGCCCCCGGAAACAGGCGCCCGCCGGGGAACTCAAACTCTTCTGTATTTCTTTATCTAATATATACTGTCTGAGTAAAAACTAAAATGAATCAAAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCCAGTATTCTGGCGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGTCCCCTGTGGACTCGGTGTTGGGGACCGGCGAGACAGCCGCGGATCTTCTTCCGCAGCGAGTCGCCGCCCCCCAAATGACTTGGCGGCCTCGTCGCGGCCCTCCTCTGCGTAGTATAGCACACCTCGCAACAGGAGCCCGGCGAATGGCCACTGCCGTAAAACCCCCCAACTTTTTCAGAGTTGACCTCGAATCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCA

肉色擬青霉菌株IE-418擁有如下結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：

在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(PDA)中徑向生長、垂直分生孢子的菌絲體在10天內(nèi)長了12mm；在甲基磺酸乙酯培養(yǎng)基(EMA)中白毛塵狀菌絲體在10天內(nèi)長了9-11mm。根據(jù)Kornerup&Wanscher(1961)比色圖表，在兩種培養(yǎng)基中，它將培養(yǎng)基盤的后面染成了深綠色29F8。白色菌絲體，絲狀、塵狀質(zhì)地。在燕麥培養(yǎng)基(OA)中，它在10天內(nèi)長了18-20mm。由于孢子形成，具有塵狀質(zhì)地的菌絲體在接種55天后在燕麥培養(yǎng)基(OA)中由白色變?yōu)榈奂t色7A2。在33天后，它將盒背面的培養(yǎng)基稍微染成不均勻的灰黃色3C3或3C4，最老的部分染成橄欖綠色3E7。瓶形分生孢子細(xì)胞，在非常細(xì)的頸中朝頂端漸漸變細(xì)，單瓶梗，或在明確的2-5輪枝孢菌細(xì)胞中，盡管三細(xì)胞群占優(yōu)勢，最小長度7.2-8.8μm，更常見長度9.6-10.4μm，更大長度11-14.4μm。寬度是1.6-2.4μm。近球形分生孢子，橢圓體至球體，馬蹄狀，鏈狀排列。孢子長2.4-4.0μm，寬1.6-2.4μm。在5mm的盤上，孢子形成是25x 10⁶個孢子。

本發(fā)明的肉色擬青霉菌株IE-418產(chǎn)品的特點(diǎn)是能夠感染和/或寄生于下列群的植物寄生線蟲：根據(jù)De Ley P.和Blaxter.M.在2004年提出的分子分析的分類的遷移性內(nèi)寄生蟲和/或固著性內(nèi)寄生蟲和/或半內(nèi)寄生線蟲和/或遷移性外寄生蟲和/或固著性外寄生蟲，來自下列科的：?？坪?或滑刃科和/或擬滑刃科和/或環(huán)科和/或錐科和/或鞘科和/或異皮科和/或紐帶科和/或小齒科和/或新墊刃科和/或短體科和/或球狀科和/或墊刃科和/或半穿刺科(墊刃亞目)和/或長針科(矛線亞目)和/或毛刺科(膜皮亞目)。

在調(diào)查使用和應(yīng)用肉色擬青霉菌株IE-431控制和/或預(yù)防和/或消滅植物寄生線蟲、遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲、半內(nèi)寄生蟲以及遷移性和固著性外寄生蟲時，確定上述菌株即使在感染這些寄生蟲時在不控制和/或消滅寄生蟲的情況下需要至少15天的感染，除了在根結(jié)線蟲的情況下。意外地發(fā)現(xiàn)肉色擬青霉菌株IE-418在72小時內(nèi)寄生于和/或感染植物寄生線蟲，控制并消滅上述科的線蟲。

進(jìn)行肉色擬青霉菌株IE-431有效性和效率評估的第一階段，將細(xì)胞(分生孢子和/或芽生孢子和/或菌絲段)放入與遷移性和固著性內(nèi)寄生蟲、半內(nèi)寄生蟲以及遷移性和固著性外寄生蟲接觸的懸濁液中，其中包括：根結(jié)線蟲、短體線蟲、穿孔線蟲、螺旋線蟲、輪線蟲、紐帶線蟲、劍線蟲，并且相同的線蟲分別與肉色擬青霉菌株IE-431接觸。

肉色擬青霉菌株IE-431第一階段評估的結(jié)果如下：

1.根結(jié)線蟲屬線蟲的幼蟲、成蟲、卵塊的存活能力降低。

2.接觸24小時，真菌生長并進(jìn)入寄主。

3.在72小時時，發(fā)現(xiàn)菌絲體在根結(jié)線蟲屬線蟲的卵塊及根結(jié)線蟲屬雌性線蟲內(nèi)外部發(fā)育。

4.在120小時時，真菌完全侵入根結(jié)線蟲屬線蟲的卵塊以及根結(jié)線蟲屬雌性線蟲的內(nèi)部。(圖1)

肉色擬青霉菌株IE-431對短體線蟲屬、紐帶線蟲屬及輪線蟲屬第一階段評估的結(jié)果如下：

1.接觸120小時，看到一些真菌孢子在線蟲角質(zhì)層生長。

2.在15天時，菌絲體在線蟲外部初步發(fā)育，所以它不可能控制或消滅線蟲。

肉色擬青霉菌株IE-431第一階段評估的結(jié)果如下：

1.接觸48小時，真菌生長并進(jìn)入線蟲。

2.從72小時(圖2)到120小時(圖3)，發(fā)現(xiàn)菌絲體在線蟲內(nèi)部和外部生長，表明有控制和/或消滅線蟲的可能性。

在第二階段，評估肉色擬青霉菌株IE-418對外寄生線蟲的致病力，該致病力用死亡率％表示。(圖4)

1.與肉色擬青霉菌株IE-418接觸24小時，紐帶線蟲屬的個體死亡率是2％。

2.接觸真菌24小時，紐帶線蟲屬的個體死亡率是68％。接觸真菌120小時，紐帶線蟲屬的個體死亡率是78％。

3.相反，在空白處理中發(fā)現(xiàn)只有26％的紐帶線蟲屬的個體在實(shí)驗(yàn)開始后死亡。

評估肉色擬青霉菌株IE-418對輪線蟲屬的致病力，該致病力用死亡率％表示。(圖5)

1.與肉色擬青霉菌株IE-418接觸24小時，46％的輪線蟲屬個體死亡。

2.與肉色擬青霉菌株IE-418接觸72小時，發(fā)現(xiàn)超過80％的輪線蟲屬個體寄生有真菌。

3.最后，輪線蟲屬線蟲感染肉色擬青霉菌株IE-418后120小時時，發(fā)現(xiàn)96％的個體死亡，并且有明顯的孢子形成。

4.相反，在空白處理中，未見到菌絲體且只有16.6％的死亡率。

在第三階段，肉色擬青霉的應(yīng)用結(jié)合農(nóng)作物輪作以及白僵菌Beauveria bassiana和蠟蚧菌Lecanicillium lecanii的應(yīng)用，以便并行防治其他現(xiàn)有農(nóng)作物蟲害，比如：薊馬(纓翅目Thysanoptera)、白粉虱(半翅目Hemiptera)、蚜蟲Aphis spp.(半翅目)(可能從早期就影響植物，嚴(yán)重影響產(chǎn)量)、金龜子Macrodactylus spp.(鞘翅目Coleoptera)，是雜食昆蟲并且可以在幾天內(nèi)摧毀農(nóng)作物；柔膜菌Helotiales造成的病害，比如：蠶豆葡萄孢Botrytis fabae(巧克力斑病)和/或灰葡萄孢B.cinerea(灰霉病)，和/或銹菌目Uredinales造成的病害，比如：單胞銹菌屬Uromyces spp.和/或柄銹菌屬Puccinia spp.和/或疣雙胞銹菌屬Tranzschelia spp.(銹菌類)，各種農(nóng)作物的生產(chǎn)者無法再使用市場上銷售的化學(xué)品控制這些病害。

為了預(yù)防和/或控制和/或消滅線蟲以及上述害蟲和病害，在植物生長的早期使用蠟蚧菌，在土壤中單獨(dú)使用或者與肉色擬青霉結(jié)合使用。

獲得的結(jié)果令人意外，薊馬、白粉虱、蚜蟲明顯減少，幾乎完全消滅了巧克力斑病。至于銹病，農(nóng)作物依然干凈直到長出葉鞘，如果是蠶豆則遍布農(nóng)作物，也就是當(dāng)種子成熟準(zhǔn)備收獲時。

此外，白僵菌被用來控制金龜子屬。過兩天或超過兩天之后，這種害蟲開始死亡并且數(shù)量大量減少。為了獲得更好的效果，農(nóng)務(wù)時使用真菌白僵菌，在幼蟲階段前感染害蟲，從而減少害蟲數(shù)量。

與化學(xué)控制地塊(少50％葉鞘)及未控制地塊相比，取得的結(jié)果是在使用生物控制的寬豆地塊上寬豆植物的產(chǎn)量增加。

因此，肉色擬青霉菌株IE-418的特點(diǎn)是從第一次使用開始就減少線蟲數(shù)量，在三到五天內(nèi)對下列科的線蟲發(fā)揮全部效力：?？坪?或滑刃科和/或環(huán)科和/或錐科和/或鞘科和/或異皮科和/或紐帶科和/或小齒科和/或新墊刃科和/或短體科和/或球狀科和/或墊刃科和/或半穿刺科(墊刃亞目)和/或長針科(矛線亞目)和/或毛刺科(膜皮亞目)。然而，菌株IE-431無法殺死上述大部分上述植物性線蟲，但是它對異皮科的內(nèi)寄生和/或半內(nèi)寄生線蟲特別有效。

本發(fā)明披露了一種分離和/或保存和/或大量繁殖肉色擬青霉的方法，以及使用和/或應(yīng)用肉色擬青霉控制和/或預(yù)防和/或消滅感染和/或侵害耕種下列農(nóng)作物區(qū)域的線蟲：甜菜、龍舌蘭、鱷梨、大蒜、苜蓿、棉花、番荔枝、橡膠樹、香桃木、水稻、燕麥、巴里椰子樹、竹子、秋海棠、茄子、西蘭花、花生、咖啡樹、可可樹、星蘋果樹、西葫蘆、南瓜、西葫蘆、苦櫻桃、大麻黃、山茶、紅薯、肉桂、甘蔗、楊桃、杏樹、紅花、大麥、洋蔥、雪松、香櫞樹、李子、柑橘類植物、椰子樹、卷心菜、花椰菜、康乃馨、菊花、印加豆、人參果、豌豆、辣椒、桃樹、土荊芥、菠菜、絲瓜、覆盆子、草莓、蠟樹、菜豆、梔子樹、鷹嘴豆、劍蘭、石榴、番石榴、蠶豆、無花果、墨西哥薯蕷、萵苣、青檬、檸檬樹、玉米、曼密蘋果樹、橘子、蘋果樹、芒果樹、雛菊、大濱菊、甜瓜、榅桲、薄荷、黑莓、薯蕷、橙子、油桃、核桃樹、仙人鏡、秋葵、番木瓜樹、土豆、稗草、黃瓜、梨樹、香蕉、胡椒、松樹、菠蘿樹、火龍果、柚子、西瓜、白柳、高粱、大豆、煙草、地櫻桃、葡萄柚、小麥、葡萄藤、長春花、非洲堇、胡蘿卜、豬李、墨西哥黃柿子、番荔枝、刺果番荔枝、天堂李、腰果樹、甜瓜、枇杷樹、黃瓜、柿子樹、葡桃、西瓜、黃美果欖、白美果欖、黑美果欖、番荔枝，這種寄生蟲在其他作物間傳播。

可以開發(fā)應(yīng)用下列形式的含肉色擬青霉細(xì)胞的組合物：懸濁液、微粒、粉末、凍干、小球、控釋形式、生態(tài)泵、凝膠、膠狀物、糊狀物、膠囊、固定化細(xì)胞、乳濁液、微乳液、溶液和/或上述形式的組合。

實(shí)施例

獲得的肉色擬青霉殺線蟲劑組合物按照以下方式但不限于以下方式提供：

實(shí)施例1：肉色擬青霉菌株418組合物1。

實(shí)施例2：肉色擬青霉菌株418組合物2。

實(shí)施例3：肉色擬青霉菌株418組合物3。

實(shí)施例4：用于分離和保存肉色擬青霉菌株IE-418的組合物4。

實(shí)施例5：用于分離和保存肉色擬青霉菌株IE-418的組合物5。

一般情況下，一種或多種肉色擬青霉組合物的應(yīng)用方法主要包括：

至少在播種10天前，一次或多次將肉色擬青霉的組合物用于土壤中進(jìn)行殺菌。使用次數(shù)取決于植物寄生線蟲的種類以及其蟲口密度。

如果播種的農(nóng)作物是塊莖、鱗莖、根莖、球莖等，應(yīng)用方法是在播種前將它們浸泡在組合物中至少一個小時。

對于移種灌木和/或喬木作物，將其直接應(yīng)用于植物的根部和/或?qū)⒁シN的土壤中。

如果是播種農(nóng)作物的種子，在下種前將組合物應(yīng)用到壟溝里和/或在播種不久前直接放到種子里。

可選擇但是也不限制在農(nóng)作物種植后和/或生長過程中使用組合物。

在收獲時和/或收獲后，和/或在輪種期，和/或土壤修養(yǎng)期，將組合物應(yīng)用于土壤以便預(yù)防新的寄生蟲侵害和/或控制和/或消滅殘留的植物寄生線蟲。這種做法為下個生長周期做好土壤準(zhǔn)備。

作為補(bǔ)充，為了控制線蟲，可從下列生物制劑中選擇一種或多種添加到上述組合物中：蘇云金芽孢桿菌、蘇云金芽孢桿菌ATCC 55273、堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌Bacillus firmus CNCMI-1582、食神鞘氨醇桿菌、棒狀桿菌、節(jié)叢孢屬Arthrobotrys spp.、穿刺芽孢桿菌Pasteuria penetrans 98-35、鏈霉菌屬菌Streptomyces dicklowii、甜菊Stevia rebaudiana、紅灰鏈霉菌Streptomyces rubrogriseus、厚垣孢普奇尼亞菌Pochonia chlamydosporia、單頂孢菌Monacrosporium ullum、解淀粉芽孢桿菌Bacillus amyloliquefaciens、厚垣輪枝孢菌CC 334168、枯草芽胞桿菌Bacillus subtillis DSM17231、和/或地衣芽孢桿菌Bacilluslicheniformis DSM 17236、厚垣輪枝孢菌、淡紫色擬青霉、玫煙色擬青霉、淡紫擬青霉251、淡紫擬青霉252、淡紫擬青霉253、淡紫擬青霉254、立枯絲核菌Rhizoctonia solaniAG-4、尖孢鐮刀菌Fusariumoxysporum、腐霉屬菌Pythium sp.、煙草黑脛病菌Phytophthora nicotiana、大麗輪枝菌Verticillium dahliae、蟬擬青霉菌、食神鞘氨醇桿菌C-926、和/或棒狀桿菌C-924、肉色擬青霉菌株IE-431、白僵菌、蠟蚧菌、齒梗孢屬真菌Calcarisporium spp.和/或上述的組合。

對本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)總結(jié)如下：

1.生物學(xué)方法理性管理農(nóng)作物害蟲線蟲。

2.改善耕地土壤質(zhì)量。

3.修復(fù)化學(xué)藥劑比如殺蟲劑造成的土壤傷害。

4.獲得高質(zhì)量農(nóng)產(chǎn)品和森林資源。

5.提高農(nóng)作物和/或森林資源產(chǎn)量。

6.有利于土壤中供應(yīng)給植物的大量元素比如磷元素供應(yīng)并且改善土壤肥力。其溶磷功效比得上青霉菌屬真菌及曲霉屬真菌。

7.同其他控制方法相比，第一次使用較短時間內(nèi)就能消滅植物內(nèi)寄生線蟲。

8.獲得的殺線蟲劑組合物對人類、動物和植物無害。

9.可以同其他控制方法相結(jié)合，比如農(nóng)作物輪作、土壤修養(yǎng)及其他。

10.是預(yù)防和/或控制和/或消滅植物寄生線蟲的可持續(xù)方法，易于管理和應(yīng)用。

11.從短、中、長期來看，是經(jīng)濟(jì)、有用的方法。

12.特殊性是因?yàn)楫a(chǎn)生特定酶，這種酶攻擊植物寄生線蟲而不影響對農(nóng)業(yè)系統(tǒng)有用的非寄生線蟲。

菌種IE-418還被存放于智利微生物資源庫中，存取編號RGM2140，日期2013年12月13日。