一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用。所用菌株枯草芽孢桿菌WEI-2分離自60日齡健康仔豬糞便，能夠耐受低pH環(huán)境和高濃度豬膽鹽，在胃腸消化液中長時間保持活性，分泌高活性淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶，對大腸桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直徑達到20-30mm。經過發(fā)酵后，與載體混合再利用噴霧干燥獲得干燥活性菌粉，經載體稀釋后獲得飼料添加劑產品。該添加劑適合畜禽養(yǎng)殖全程使用，可以提高畜禽生產性能，促進畜禽生長，增強畜禽機體免疫力，降低幼齡動物死亡率，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境。
【專利說明】一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和在畜禽養(yǎng)殖中的應用，尤其適用于畜禽飼料添加劑，屬于飼用微生物添加劑【技術領域】。
[0002]背景介紹
[0003]抗生素在畜禽產品中的長期使用帶來的畜禽類產品的食品安全性問題已經越來越受到人們的關注，因為長期、大量使用抗生素、抗菌藥物抑制病原菌的同時，動物腸道的正常菌群也受到抑制，動物腸道微生態(tài)平衡被破壞，耐藥性、藥物殘留等問題給動物和人類的健康帶來了巨大的威脅和危害，所以尋求有效、安全、綠色、天然的飼用抗生素替代產品，成為了畜禽養(yǎng)殖行業(yè)關注的熱點問題。
[0004]微生態(tài)制劑是一種天然的活性微生物制劑，具有無毒、無抗藥性、無殘留、無副作用的特點。近年來，微生態(tài)制劑對于動物腸道微生態(tài)平衡的調節(jié)作用和提高動物機體免疫力，進而提高養(yǎng)殖動物的健康水平和生產性能的功效已經得到人們的普遍認可，是公認的飼用抗生素的最佳替代品之一。
[0005]枯草芽孢桿菌是農業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》所列菌種，是微生物飼料添加劑的常用菌種。枯草芽孢桿菌對人和動物沒有毒性，在生長過程中可以產生高活性的蛋白酶、淀粉酶和纖維素酶，能夠促進畜禽對飼料的消化利用率；能夠產生抑菌代謝物，抑制腸道病原菌的生長；該菌是嚴格好氧細菌，進入腸道后通過生物奪氧的作用為腸道乳酸菌類和雙歧桿菌類厭氧微生物提供厭氧環(huán)境從而促進有益菌的生長，調節(jié)腸道微生態(tài)平衡。
[0006]因此，篩選一株性能優(yōu)良的枯草芽孢桿菌，并開發(fā)出低成本、高產量，能長期保持活性的菌粉產品，對于發(fā)展綠色飼料，保證食品安全具有重要的意義。

【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的第一個目的是提供了一株枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCCN0.7744。
[0008]從健康仔豬糞便中分離、篩選得到一株芽孢桿菌，經16S rDNA測序鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，命名為WE1-2，并于2013年6月19日送中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號為CGMCC N0.7744，保藏地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院中科院微生物研究所郵編:100101電話:86-10-64807596。
[0009]枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744屬革蘭氏陽性細菌，桿狀，芽孢中生或偏中生，孢囊膨大但不顯著，7%氯化鈉中生長，pH5.7生長，可利用阿拉伯糖、木糖和甘露醇產酸，可利用葡萄糖和檸檬酸鹽，水解淀粉，液化明膠，硝酸鹽還原試驗為陽性，V-P測定為陽性。生長溫度范圍在30-40°C，適宜pH值的范圍7.0-8.0，是嚴格好氧菌。
[0010]枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis) WE1-2CGMCC N0.7744 在 pH 為 2-3 的人工胃液中保持3h，存活率90%;在人工胃腸消化液中保持26h，活菌數(shù)可以維持在IO8CFU / mL,這個時間符合腸道生理周期，能夠保證菌體發(fā)揮益生作用；在豬膽鹽濃度為20g / L的人工豬膽鹽溶液中，保持3h，存活率為75%，這個膽鹽濃度遠遠高于動物體內的0.3g / L的平均膽鹽濃度。
[0011]上述特性評價試驗中，所述人工胃液包括如下成分:每1000mL水中含有胃蛋白酶3g，NaC12g，用鹽酸調pH至2-3 ;所述人工胃腸消化液包括如下成分:人工胃液pH調至3，人工腸液包括如下成分:每1000mL水中含有胰蛋白酶10g，KH2P047g，調pH至7.5，測試過程中，菌體在人工胃液中保持2h，然后接入人工腸液中保持24h ;所述人工豬膽鹽溶液成分包括:每1000mL水中含有胰蛋白酶lg，豬膽鹽20g，NaC15g，調pH至7.0。
[0012]枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的發(fā)酵上清液中同時具有淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的活性，三種酶的產量分別為246U / mL，683U / mL和152.6U / mL。
[0013]枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744對大腸桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌均有抑菌作用，抑菌圈直徑達到20-30mm。
[0014]枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744是本發(fā)明過程中分離到的所有芽孢桿菌中生長速率和產孢速率最快，生物量和芽孢產量最高，生長穩(wěn)定性最好的一株芽孢桿菌，適宜作為工業(yè)化生產菌株。該菌株在肉湯培養(yǎng)基中生長25h左右活菌數(shù)達到最大，為2.6 X IO9CFU / mL，生長至36h左右芽孢產量達到最高，為2.1 X IO9CFU / mL左右，產孢率大約為80%，菌株經多次傳代和多次重復發(fā)酵試驗，生長特性和產量穩(wěn)定。
[0015]本發(fā)明的第二個目的是提供了一種枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744作為畜禽飼料添加劑的制備方法。所述制備方法的具體步驟如下:
[0016](I)斜面菌種的活化:從枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的保藏甘油管中挑一環(huán)菌液劃線于營養(yǎng)瓊脂平板，于32-37°C，培養(yǎng)15-20h，使芽孢桿菌復壯，并長出單菌落，挑單菌落劃線于斜面培養(yǎng)基進行活化，所述斜面培養(yǎng)基同樣是營養(yǎng)瓊月旨，配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15_20g，pH值為
7.2-7.4，常規(guī)滅菌。
[0017](2)種子搖瓶的制備:從上述活化好的斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250_300mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37°C，振蕩培養(yǎng)20_30h，即得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744 的搖瓶種子液，活菌數(shù)為 2 X IO9CFU / mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.lg，pH值為7.4，常規(guī)滅菌。
[0018](3)種子罐的培養(yǎng):將上述制備好的搖瓶種子液按照1% (V / V)的接種量接入裝有50L種子發(fā)酵培養(yǎng)基的100L種子發(fā)酵罐中，于35-37°C，培養(yǎng)20_25h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。得到二級種子發(fā)酵液，活菌數(shù)為
3.2 X IO9CFU / mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致。
[0019](4)生產發(fā)酵:將上述制備好的種子發(fā)酵液按照1-2% (V / V)的接種量接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L生產發(fā)酵罐中，于35-37 °C，發(fā)酵25_30h，攪拌轉速為250-300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。發(fā)酵結束獲得枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的活菌發(fā)酵液，活菌數(shù)為5 X IO9CFU / mL以上，芽孢產率為80%左右。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.15g，七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7.2。
[0020](5)發(fā)酵液后處理:發(fā)酵結束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機富集菌體(15000-20000rpm)后轉移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質量比為2:1-3:1的比例向混合攪拌罐中加入載體，混合均勻。同時將噴霧干燥設備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進口溫度達到180-200 °C，出口溫度達到110-140 °C，塔內壓力保持在-12-18Pa，然后打開進料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90°C時，打開打漿泵，將菌泥與載體的混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內壓力及進出口溫度的穩(wěn)定，干燥后的干粉粉碎至80目以上，獲得枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的活性干燥菌粉。利用營養(yǎng)瓊脂平板對活性干燥菌粉進行計數(shù)，菌粉活菌數(shù)達到ZXIOiCFU / g以上，根據計數(shù)結果，利用載體將活菌含量稀釋至> 200億CFU / g，得到成品菌粉。所述載體為可溶性淀粉。
[0021]本發(fā)明的第三個目的是提供枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCCN0.7744作為畜禽飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖中的應用，是將該添加劑成品菌粉以0.05-0.1%0的比例拌入畜禽全價飼料，用于畜禽養(yǎng)殖全程。經畜禽飼喂試驗證明，本發(fā)明的飼料添加劑可以顯著提高畜禽生產性能，促進畜禽生長，增強機體的抗病能力，降低幼齡動物死亡率，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境。
[0022]基于上述特性，本發(fā)明提供的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCCN0.7744具有顯著的益 生特性，動物服用后可以通過胃液和膽鹽，并在腸道中存活，其分泌的消化酶有助于提高飼料轉化率，高效抑菌活性可以提高畜禽的健康狀況。由該菌株制備的飼料添加劑可以用作畜禽微生物飼料添加劑，具有提高畜禽生產性能，促進畜禽生長，增強畜禽機體免疫力，降低幼齡動物死亡率，降低糞便排泄量，減少糞臭，改善養(yǎng)殖環(huán)境的有益功效。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744對人工胃腸消化液的耐受性。圖中前2h是菌株在人工胃液中的存活曲線，隨后的24h是菌株從人工胃液轉接至人工腸液后的存活曲線。
[0024]圖2為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744對金黃色葡萄球菌的抑菌效果，其中無抑菌圈的是空白培養(yǎng)基對照組；有較大抑菌圈的是枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744 的培養(yǎng)液的上清液。
[0025]圖3 為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744 在 5000L 生產發(fā)酵罐條件下的生長曲線。
【具體實施方式】
[0026]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0027]實施例一:枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744 的分離和鑒
定
[0028]稱取60日齡健康仔豬的糞便lg，放入盛有99mL滅菌的0.85%生理鹽水的三角瓶中(三角瓶中預先放入20粒無菌玻璃珠)，37°C，180rpm振蕩30min，80°C處理15min，吸取ImL懸濁液做十倍遞增梯度稀釋，選取2-3個適宜稀釋度，吸取0.1mL稀釋液于無菌營養(yǎng)瓊脂平板表面，每個稀釋度做兩個平行，用涂布棒均勻涂布，37°C培養(yǎng)24-48h。從平板上挑選不同形態(tài)的菌落劃線純化，分別保藏并進行16S rDNA的測序鑒定。
[0029]實施例二:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744 耐受低 pH 胃液、人工胃腸消化液和豬膽鹽
[0030]從枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744的保藏斜面(營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基)挑一環(huán)菌苔接于裝有50mL肉湯培養(yǎng)基的300mL三角瓶中，于37°C，180rpm振蕩培養(yǎng)30h，此時芽孢產量接近80%，將菌液在6000rpm的條件下離心10min，棄去上清，用滅菌的0.85%的生理鹽水洗滌一次，再用同體積生理鹽水懸浮。吸取IOmL懸浮菌液分別接于裝有90mL pH分別為1、2、3、4、5的人工胃液和90mL人工豬膽鹽溶液的500mL三角瓶中，豬膽鹽濃度分別為3g / L、5g / LUOg / L、15g / L、20g / L，以不加膽鹽的樣品為對照。然后在37°C，靜置培養(yǎng)180min，分別于初始接種、30min、60min、120min、180min對培養(yǎng)物進行活菌計數(shù)，繪制活菌數(shù)變化曲線，計算菌株在不同PH人工胃液和不同濃度人工膽鹽中保溫180min時的存活率。菌株在pH為3的人工胃液中保溫2h后吸取IOmL菌懸液接于裝有90mL人工腸液的500mL三角瓶中，同樣在37°C，靜置培養(yǎng)，分別于初始接種、311、611、2111、24h對培養(yǎng)物進行活菌計數(shù)，繪制活菌數(shù)變化曲線。
[0031]測定結果顯示，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744以孢子形式在PH高于I的人工胃液中保持180min(3h)，存活率達到90%以上；在濃度為20g / L的人工豬膽鹽溶液中保持180min(3h)，存活率為75% ;在人工消化液中保持26h，活菌數(shù)可以維持在IO8CFU / mL，這個時間符合腸道生理周期，能夠保證菌體發(fā)揮益生作用。上述結果表明，枯草芽孢桿菌 (Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744能夠耐受酸性環(huán)境，耐受高濃度豬膽鹽，并且能夠在消化液中保持足夠長的存活時間，說明枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744是一株高抗逆性益生芽孢桿菌，可以經過畜禽的胃、十二指腸，最終以較高的活性狀態(tài)達到小腸，發(fā)揮益生作用。
[0032]實施例三:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的產酶特性
[0033]在檢測分離到的芽孢桿菌的產酶活性時，發(fā)現(xiàn)枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744在可溶性淀粉平板、酪素平板和剛果紅纖維素平板上均有較大的透明圈。隨后將枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的單菌落接種于肉湯培養(yǎng)基中，37°C，180rpm，振蕩培養(yǎng)25_30h，1000Orpm離心10min，獲得上清液。分別用3，5-二硝基水楊酸法(DNS法)、福林-酚法和以羧甲基纖維素鈉為底物檢測還原糖的方法測定上清液中淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶的活性，結果表明，發(fā)酵上清液中同時具有上述三種酶的活性，三種酶的活力分別為246U / mL，683U / mL和152.6U / mL。
[0034]實施例四:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的抑菌活性
[0035]1.培養(yǎng)液上清的制備
[0036]從枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744的保藏斜面挑一環(huán)菌苔接種于肉湯培養(yǎng)基中，370C，180rpm振蕩培養(yǎng)22h，此時菌體即將產生芽孢，取ImL菌液12000rpm離心Imin,取上清液。
[0037]2.抑菌活性檢測平板的制備
[0038]將15mL完全熔化的LB瓊脂培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，待其凝固后垂直放上牛津杯；另取完全熔化的LB瓊脂培養(yǎng)基，待其冷卻到55°C時加入指示菌混勻，取IOmL混有指示菌的培養(yǎng)基倒入放有牛津杯的培養(yǎng)皿中，待完全凝固后拔出牛津杯，制成檢測平板。所述指示菌包括大腸桿菌、沙門氏菌、藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌。
[0039]3.抑菌活性的測定
[0040]取200 μ L培養(yǎng)液上清加入檢測平板的孔中，4°C放置24h后放入37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20h，測得抑菌圈直徑大小為20-30min。
[0041]實施例五:枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的生長發(fā)酵特性
[0042]從本發(fā)明過程中分離到的所有芽孢桿菌中，挑選了初篩效果良好的10株經過鑒定為枯草芽孢桿菌，并且性狀優(yōu)良的菌株進行復篩，包括枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744，比較這些菌株的生長發(fā)酵特性。從10株菌的營養(yǎng)瓊脂活化平板上分別挑取單菌落接于裝有250mL肉湯培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于37°C，180rpm振蕩培養(yǎng)，定時取樣鏡檢觀察，分別于剛產生芽孢和不再產生芽孢的兩個時間點取樣，利用10倍遞增稀釋涂布法測定活菌數(shù)，對于不再產生芽孢的時間點，停止培養(yǎng)，將培養(yǎng)液在80°C條件下處理15min后，同樣進行10倍遞增稀釋涂布測定芽孢數(shù)，測定結果見表1。所測的10株枯草芽孢桿菌中，綜合菌株的生長速率、產孢速率、生物量和產孢率四個指標的測定結果，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744優(yōu)于其余菌株。進一步對該菌株連續(xù)傳代，每一代均進行生長特性測試，結果表明，經過10代的培養(yǎng)，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的生長速率、產孢速率、產量等發(fā)酵性能均保持穩(wěn)定，該菌株適合作為工業(yè)生產菌株。
[0043]表110株枯草芽孢桿菌的生長發(fā)酵特性
[0044]
【權利要求】
1.一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用，其特征在于所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)為 WE1-2，保藏編號為 CGMCC N0.7744。
2.根據權利要求1所述的一種枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用，其特征在于枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744作為畜禽飼料添加劑的制備方法，具體步驟如下: (1)斜面菌種的活化:從枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的保藏甘油管中挑一環(huán)菌液劃線于營養(yǎng)瓊脂平板，于32-37°C，培養(yǎng)15-20h，使芽孢桿菌復壯，并長出單菌落，挑單菌落劃線于斜面培養(yǎng)基進行活化，所述斜面培養(yǎng)基同樣是營養(yǎng)瓊月旨，配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂15_20g，pH值為7.2-7.4，常規(guī)滅菌。 (2)種子搖瓶的制備:從上述培養(yǎng)好的斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250-300mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37°C，振蕩培養(yǎng)20_30h，即得枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的搖瓶種子液。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.lg，pH值為7.4，常規(guī)滅菌。 (3)種子罐的培養(yǎng):將上述制備好的搖瓶種子液按照1%(V / V)的接種量接入裝有種子發(fā)酵培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐中，于35-37°C，培養(yǎng)20-25h，攪拌轉速為250_300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑，得到二級種子發(fā)酵液。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致。 (4)生產發(fā)酵:將上述制備好的種子發(fā)酵液按照1-2%(V / V)的接種量接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的生產發(fā)酵罐中，于35-37°C，發(fā)酵25-30h，攪拌轉速為250_300rpm，控制適當通氣量，并加入適量消泡劑。發(fā)酵結束獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCCN0.7744的活菌發(fā)酵液。所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏5g,葡萄糖IOg,三水合磷酸氫二鉀Ig, —水合硫酸猛0.15g,七水合硫酸鎂0.3g, pH值為7.2。 (5)發(fā)酵液后處理:發(fā)酵結束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機富集菌體后轉移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質量比為2: 1-3: I的比例向混合攪拌罐中加入載體，混合均勻。同時將噴霧干燥設備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進口溫度達到180_200°C，出口溫度達到110-140°C，塔內壓力保持在-12-18Pa，然后打開進料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90°C時，打開打漿泵，將菌泥與載體的混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內壓力及進出口溫度的穩(wěn)定，干燥后的干粉粉碎至80目以上，獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的活性干燥菌粉。利用營養(yǎng)瓊脂平板對活性干燥菌粉進行計數(shù)，根據計數(shù)結果，利用載體將活菌含量稀釋至> 200億CFU / g，得到成品菌粉。所述載體為可溶性淀粉，所述高速管式離心機收集菌體的轉速為 15000-20000rpm。
3.根據權利要求1所述的枯草芽孢桿菌飼料添加劑及其制備方法和應用，其特征在于枯草芽孢桿菌WE1-2作為畜禽飼料添加劑的應用。
4.根據權利要求3所述的畜禽飼料添加劑的應用，其特征在于:適用于畜禽養(yǎng)殖全程使用。
5.根據權利要求3所 述的畜禽飼料添加劑的應用，其特征在于:按照0.05-0.1%。拌全價飼料。
【文檔編號】A23K1/16GK103981118SQ201310719942
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權日:2013年12月24日
【發(fā)明者】喬琳, 姚宏明, 高長斌, 劉蕊, 金忠輝 申請人:北京偉嘉人生物技術有限公司, 沈陽偉嘉牧業(yè)技術有限公司