一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑。其制備方法是通過液體深層發(fā)酵的方法生產(chǎn)出屎腸球菌WEI-10和枯草芽孢桿菌WEI-2的干燥活性粉劑，然后與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和麥芽糊精以良好的配比混合制成顆粒劑型，或者與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和白炭黑以良好的配比混合制成粉劑，經(jīng)稱量、包裝后獲得微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。該產(chǎn)品所用菌株來源明確，特性優(yōu)良，功效明顯，生產(chǎn)性能良好，穩(wěn)定性強(qiáng)，形成的功能性飼料添加劑適用于畜禽飼用，有助于提高畜禽生產(chǎn)性能，抗病能力，調(diào)節(jié)畜禽腸道微生態(tài)平衡，改善肉蛋產(chǎn)品品質(zhì)。
【專利說明】一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及活性微生物功能性飼料添加劑的配方、制備方法及應(yīng)用，屬于生物飼料添加劑生產(chǎn)【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002]背景介紹
[0003]活性微生物功能性飼料添加劑利用有益活性微生物來提高動物健康水平、生產(chǎn)性能，具有替代飼用抗生素的潛力，可以保證飼料的安全，成為保障食品安全的新型飼料添加劑，目前已成為人們研究開發(fā)的熱點(diǎn)。
[0004]目前 市售微生物飼料添加劑產(chǎn)品良莠不齊，大多數(shù)產(chǎn)品中所含菌種的來源、種屬特性、益生特性，安全性、功效特性均不清楚，進(jìn)而導(dǎo)致產(chǎn)品的效果大打折扣，低質(zhì)價廉的產(chǎn)品充斥市場，嚴(yán)重影響了消費(fèi)者對于微生物飼料添加劑的認(rèn)識和信心，從而限制了微生物飼料添加劑在市場中的推廣和應(yīng)用。究其原因是大多數(shù)生產(chǎn)廠家沒有掌握真正有效的優(yōu)良菌種及其生產(chǎn)技術(shù)，沒有通過實際飼喂試驗效果來驗證微生物飼料添加劑配方的有效性，在這種情況下，開發(fā)出的產(chǎn)品很難產(chǎn)生其宣傳的有益效果。
[0005]因此，開發(fā)一種菌株功效明確、配方組合優(yōu)良的活性微生物功能性飼料添加劑對于發(fā)展綠色生物飼料，保證食品安全具有重要意義，同時也是為了滿足市場對于優(yōu)質(zhì)微生物飼料添加劑產(chǎn)品的需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供了一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑。其中所含的活性微生物是來源和特性明確的屎腸球菌(Enterococcus faecium)WE1-10CGMCCN0.7746 和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744, WE1-10 和 WE1-2 并于2013年6月19日一同送中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，編號分別為CGMCCN0.7746和CGMCC N0.7744，保藏地址均為:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院中科院微生物研究所郵編:100101電話:86-10-64807596。其余成分為市售優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品，其中活性酵母菌菌粉購自安琪酵母股份有限公司，以此克服目前現(xiàn)有微生物添加劑菌種來源不明確，功效特性不清晰導(dǎo)致產(chǎn)品穩(wěn)定性差，存活率低，使用效果時有時無的問題。
[0007]本發(fā)明提供的畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑包括兩種劑型:顆粒劑配方如下:屎腸球菌5%，枯草芽孢桿菌5%，釀酒酵母菌5%，低聚果糖10%，山梨醇2%，乳糖3%，麥芽糊精70%，其中屎腸球菌活菌數(shù)> IX1iciCFU / g，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)^ I X 110CFU / g，釀酒酵母菌活菌數(shù)≥IXlO9CFU / g，產(chǎn)品總有效活菌數(shù)≥2 X 1ltlCFU /g;粉劑配方如下:屎腸球菌5%，枯草芽孢桿菌5%，釀酒酵母菌5%，低聚果糖10%，山梨醇2 %，乳糖3 %，白炭黑70%，其中屎腸球菌活菌數(shù)≥IX1iciCFU / mL，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≥I X 110CFU / mL,釀酒酵母菌活菌數(shù)≥I X 19CFU / mL，產(chǎn)品總有效活菌數(shù)>2X101CICFU / mL。其中所述屎腸球菌菌株為屎腸球菌(Enterococcusfaecium)WE1-10CGMCC N0.7746 ;所述枯草芽抱桿菌菌株為枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744。
[0008]本發(fā)明提供的畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑的制備方法包括如下步驟:
[0009](I)將屎腸球菌(Enterococcus faecium) WE1-10CGMCC N0.7746 和枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的菌種分別接種于各自的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)過液體深層發(fā)酵后，分別收集菌體，制成粉劑；
[0010](2)將步驟(1)制得的屎腸球菌菌粉和枯草芽孢桿菌菌粉與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和麥芽糊精按照比例混合均勻，在干燥條件下壓片制粒，通過顆粒機(jī)破碎，振動篩篩分為所需大小的顆粒，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出顆粒型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品O
[0011](3)將步驟(1)制得的屎腸球菌菌粉和枯草芽孢桿菌菌粉與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和白炭黑按照比例混合均勻，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出粉劑型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。
[0012]其中，本發(fā)明所述的屎腸球菌(Enterococcusfaecium) WE1-10CGMCC N0.7746活性粉劑的制備方法如下:從復(fù)壯、活化的菌種斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有600mL種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，37°C，靜置培養(yǎng)10h，活菌數(shù)達(dá)到I X 109_2 X IO9CFU / mL，所述種子培養(yǎng)基配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉3g，三水合磷酸氫二鉀lg，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.1g,吐溫801g，培養(yǎng)基PH值調(diào)為8.0，常規(guī)滅菌；然后以1% (V / V)接種量接于裝有60L種子培養(yǎng)基的100L發(fā)酵罐中，所 述種子培養(yǎng)基組分與搖瓶種子培養(yǎng)基一致，滅菌條件為121°C，30min,發(fā)酵條件為37°〇，50-100印111，不通氣，發(fā)酵8-1011，活菌數(shù)達(dá)到2\10竹^ / mL以上，而在同樣條件下，屎腸球菌(Enterococcus faecium)WE1-10CGMCC N0.7746在普通MRS培養(yǎng)基中的活菌數(shù)為7.5X108CFU / mL ;最后以2% (V / V)接種量接于裝有3000L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L發(fā)酵罐中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為每1000mL水中含有:蛋白胨20g，蔗糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉5g，三水合磷酸氫二鉀2g，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.05g,吐溫801g，培養(yǎng)基pH值調(diào)為8.0,121°C滅菌30min，發(fā)酵條件為40°C，50-100rpm,不通氣，發(fā)酵8_10h，活菌數(shù)達(dá)到5X109CFU / mL以上,pH為4.0-4.5,而在同樣條件下,屎腸球菌(Enterococcusfaecium)WE1-10CGMCC N0.7746 在普通 MRS 培養(yǎng)基中的活菌數(shù)為 9.6X108CFU / mL。將發(fā)酵好的培養(yǎng)液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后再通過真空冷凍干燥處理，冷凍干燥的保護(hù)劑配方為:脫脂奶粉10%，乳糖8%，L-谷氨酸鈉1%，維生素Cl%，甘油1%，保護(hù)劑與離心后的菌泥按照體積質(zhì)量比5: I混合均勻，凍干參數(shù)如下:真空度小于30Pa，冷阱溫度為-50°C至-60°C，預(yù)凍時間5h，干燥時間40-45h，干燥結(jié)束，粉碎后獲得活菌數(shù)為2 X IO11CFU / g的干燥菌粉。
[0013]其中本發(fā)明所述的枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744活性粉劑的制備方法如下:從復(fù)壯、活化的菌種斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37°C，振蕩培養(yǎng)20-30h，即得枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的搖瓶種子液，活菌數(shù)為2X IO9CFU / mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為 ?每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.lg，pH值為7.4，常規(guī)滅菌；然后以I % (V /V)接種量接入裝有50L種子發(fā)酵培養(yǎng)基的100L種子發(fā)酵罐中，于35-37°C，培養(yǎng)20_25h，攪拌轉(zhuǎn)速為250-300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡劑，壓力為0.05-0.06MPa，得到一級種子發(fā)酵液，活菌數(shù)為3.2X109CFU / mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)，而在同樣條件下，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744在肉湯培養(yǎng)基中的活菌數(shù)為2.2X109CFU / mL。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致，滅菌條件為125°C，40min ;最后以2% (V / V)接種量接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L生產(chǎn)發(fā)酵罐中，于35-37°C，發(fā)酵25-30h，攪拌轉(zhuǎn)速為250_300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡齊U，壓力為0.06-0.08MPa，發(fā)酵結(jié)束獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCCN0.7744的活菌發(fā)酵液，活菌數(shù)為5X109CFU / mL以上，芽孢產(chǎn)率為80%左右，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:每IOOOmL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏5g，葡萄糖10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.15g，七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7.2，125°C滅菌40min，而在同樣條件下，枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744在肉湯培養(yǎng)基中的活菌數(shù)為
3.5X109CFU / mL，芽孢產(chǎn)率為62%左右。發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后轉(zhuǎn)移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質(zhì)量比為2: 1-3: I的比例向混合攪拌罐中加入載體，混合均勻。同時將噴霧干燥設(shè)備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進(jìn)口溫度達(dá)到180-200°C，出口溫度達(dá)到110-140°C，塔內(nèi)壓力保持在_12_18Pa，然后打開進(jìn)料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90°C時，打開打漿泵，將菌泥與載體的混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內(nèi)壓力及進(jìn)出口溫度的穩(wěn)定，干燥后粉碎獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744的活性干燥菌粉，菌粉活菌數(shù)達(dá)到2X IO11CFU / g以上，所述載體為麥芽糊精。
[0014]本發(fā)明產(chǎn)品的使用對象、使用方法和用量:
[0015]本發(fā)明產(chǎn)品適用于豬、雞、鴨、鵝等畜禽的常規(guī)飼喂，由于產(chǎn)品的高營養(yǎng)特性及多種益生功效，尤其適用于妊娠母豬，幼畜和幼禽。將本品按照0.1-0.2%。的比例與畜禽基礎(chǔ)日糧拌勻后直接飼喂。應(yīng)激期、疾病預(yù)防期、病后恢復(fù)期用量加倍。
[0016]本發(fā)明產(chǎn)品的優(yōu)勢和功效:
[0017]本發(fā)明產(chǎn)品使用的微生物均為農(nóng)業(yè)部《飼料添加劑品種目錄》所列菌種，可以安全使用。本發(fā)明產(chǎn)品最大的優(yōu)勢是使用的菌種屎腸球菌(Enterococcusfaecium)WE1-10CGMCC N0.7746 和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744 均為發(fā)明人從健康動物腸道自主分離、篩選，檢測具有優(yōu)良益生特性和發(fā)酵特性的單一菌株，功能明確，功效明顯，活性高，保藏特性好，生產(chǎn)性能穩(wěn)定。經(jīng)驗證，屎腸球菌(Enterococcusfaecium) WE1-10CGMCC N0.7746能夠在人工胃腸消化液中正常存活26h，能夠耐受高濃度豬膽鹽(2% )，對常規(guī)的革蘭氏陰性和陽性致病菌(大腸桿菌、沙門氏菌和金黃色葡萄球菌)均有抑菌作用，抑菌圈直徑達(dá)到30-40mm ;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCCN0.7744因其以孢子形式存在，具有更強(qiáng)的耐受人工胃腸消化液和膽鹽的能力，更重要的是該菌可以分泌產(chǎn)生高活性淀粉酶、蛋白酶和纖維素酶，這對于促進(jìn)飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子的降解和高分子不易消化物質(zhì)的分解具有重要的作用；釀酒酵母菌的添加既可以為畜禽生長提供大量營養(yǎng)物質(zhì)，例如各種維生素、微量元素，氨基酸、糖類等，還可以為微生物的生長提供碳源、氮源和能量等等；產(chǎn)品中另一個活性成分低聚果糖不被畜禽腸道吸收利用，也無法被畜禽腸道中的有害菌利用，只能被腸道中的有益乳酸菌和雙歧桿菌選擇性利用，因此低聚果糖的添加既有助于屎腸球菌(Enterococcus faecium) WE1-10CGMCC N0.7746在腸道中的存活和增殖，又有助于腸道中本身固有乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，從而調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡，增進(jìn)畜禽健康水平。
[0018]四種有效成分按照最佳配比復(fù)合使用，具有相互促進(jìn)，協(xié)同增效的作用。屎腸球菌在動物腸道定殖后可以降低腸道PH，抑制有害菌的生長，激活腸道粘膜免疫；枯草芽孢桿菌雖然不能定植于腸道中，但是可以消耗腸道中的氧氣，制造厭氧環(huán)境為乳酸菌的繁殖創(chuàng)造有利條件，同時可以分泌大量消化酶促進(jìn)飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子和大分子營養(yǎng)物質(zhì)的降解，為有益菌的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)動物對飼料成分的消化吸收；酵母菌既可以為動物提供營養(yǎng)物質(zhì)，又可以促進(jìn)微生物的增殖，與乳酸菌和枯草芽孢桿菌有著很好的協(xié)同生長作用；低聚果糖是一種優(yōu)良的益生元，可以選擇性的促進(jìn)有益菌，主要是乳酸菌和雙歧桿菌的增殖，因此四種有效成分復(fù)配使用可以產(chǎn)生如下功效:1)促進(jìn)畜禽生長，尤其是幼齡畜禽的生長，提高飼料利用率，降低飼料成本，縮短存欄時間；2)抑制腸道病原菌的生長、繁殖，從而防治畜禽疾病，減少抗生素等獸藥的使用；3)提高畜禽免疫機(jī)能，尤其是幼齡畜禽的抗病能力，從而降低死淘率，提高成活率；4)提高母畜繁殖率，從而促進(jìn)整個養(yǎng)殖場的生產(chǎn)能力；5)調(diào)節(jié)畜禽腸道微生態(tài)平衡，預(yù)防、緩減母畜便秘和仔畜腹瀉；6)改善肉蛋品質(zhì)，提高營養(yǎng)成分含量。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑的生產(chǎn)工藝流程。
【具體實施方式】
[0020]下面給出實施例以對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述，需要指出的是以下實施例不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限 制，本領(lǐng)域的技術(shù)熟練人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容對本發(fā)明作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0021]實施例一:畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑的制備方法，包括如下步驟:
[0022](I)將屎腸球菌(Enterococcus faecium) WE1-10CGMCC N0.7746 和枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的菌種分別接種于各自的種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基，經(jīng)過液體深層發(fā)酵后，分別收集菌體，制成粉劑；
[0023](2)將步驟(1)制得的屎腸球菌(Enterococcus faecium)WE1-10CGMCC N0.7746菌粉和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744菌粉與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和麥芽糊精按照比例混合均勻，在干燥條件下壓片制粒，通過顆粒機(jī)破碎，振動篩篩分為所需大小的顆粒，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出顆粒型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。所述顆粒型微生物功能性飼料添加劑中各組分的重量百分比為:屎腸球菌5%，枯草芽孢桿菌5 %，釀酒酵母菌5 %，低聚果糖10 %，山梨醇2 %，乳糖3 %，麥芽糊精70 %，其中屎腸球菌活菌數(shù)≤I X IO10CFU / g，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≤I X IO10CFU / g，釀酒酵母菌活菌數(shù)≤I X IO9CFU / g，復(fù)配后總有效活菌數(shù)≤2 X IO10CFU / g。
[0024](3)將步驟(1)制得的屎腸球菌(Enterococcus faecium)WE1-10CGMCC N0.7746菌粉和枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744菌粉與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和白炭黑按照比例混合均勻，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出粉劑型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。所述粉劑型微生物功能性飼料添加劑中各組分的重量百分比為:屎腸球菌5 %，枯草芽孢桿菌5 %，釀酒酵母菌5 %，低聚果糖10 %，山梨醇2 %，乳糖3 %，白炭黑70%，其中屎腸球菌活菌數(shù)≥IX10iciCFU / mL，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≥I X 10ltlCFU / mL，釀酒酵母菌活菌數(shù)≥I X 109CFU / mL，復(fù)配后總有效活菌數(shù)≥2 X 1010CFU / mL。
[0025]其中，屎腸球菌(Enterococcus faecium)WE1-10CGMCC N0.7746 活性粉劑的制備方法如下:從復(fù)壯 、活化的菌種斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有600mL種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，37°C，靜置培養(yǎng)10h，活菌數(shù)達(dá)到1 X 109-2X 109CFU / mL，所述種子培養(yǎng)基配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉3g，三水合磷酸氫二鉀lg，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.1g,吐溫801g，培養(yǎng)基pH值調(diào)為8.0，常規(guī)滅菌；然后以1% (V / V)接種量接于裝有60L種子培養(yǎng)基的100L發(fā)酵罐中，所述種子培養(yǎng)基組分與搖瓶種子培養(yǎng)基一致，滅菌條件為12rC，30min，發(fā)酵條件為37°C，50-100rpm，不通氣，發(fā)酵8-10h，活菌數(shù)達(dá)到2X109CFU / mL以上；最后以2% (V / V)接種量接于裝有3000L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L發(fā)酵罐中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為每1000mL水中含有:蛋白胨20g，蔗糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉5g，三水合磷酸氫二鉀2g，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.05g,吐溫801g，培養(yǎng)基pH值調(diào)為8.0,121°C滅菌30min，發(fā)酵條件為40°C，50-100rpm，不通氣，發(fā)酵8-10h，活菌數(shù)達(dá)到5X109CFU / mL以上，pH為
4.0-4.5。將發(fā)酵好的培養(yǎng)液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后再通過冷凍干燥處理，冷凍干燥的保護(hù)劑配方為:脫脂奶粉10%，乳糖8%，L-谷氨酸鈉1%，維生素Cl%，甘油1%，保護(hù)劑與離心后的菌泥按照體積質(zhì)量比5: I混合均勻，凍干參數(shù)如下:真空度小于30Pa，冷阱溫度為_50°C至_60°C，預(yù)凍時間5h，干燥時間40-45h，干燥結(jié)束，粉碎后獲得活菌數(shù)為2 X 1011CFU / g的干燥菌粉。
[0026]其中枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744活性粉劑的制備方法如下:從復(fù)壯、活化的菌種斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有250mL液體種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，于35-37°C，振蕩培養(yǎng)20_30h，即得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的搖瓶種子液，活菌數(shù)為2X 109CFU / mL,芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述搖瓶種子培養(yǎng)基的配方為--每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，三水合磷酸氫二鉀lg，一水合硫酸錳0.lg, pH值為7.4，常規(guī)滅菌；然后以1% (V / V)接種量接入裝有50L種子發(fā)酵培養(yǎng)基的100L種子發(fā)酵罐中，于35-37°C，培養(yǎng)20_25h，攪拌轉(zhuǎn)速為250-300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡劑，壓力為0.05-0.06MPa，得到一級種子發(fā)酵液，活菌數(shù)為3.2X 109CFU / mL，芽孢處于剛開始形成的狀態(tài)。所述種子發(fā)酵培養(yǎng)基與搖瓶種子培養(yǎng)基的配方一致，滅菌條件為125°C，40min ;最后以2% (V / V)接種量接入裝有2500L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L生產(chǎn)發(fā)酵罐中，于35-37°C，發(fā)酵25_30h，攪拌轉(zhuǎn)速為250-300rpm，控制適當(dāng)通氣量，并加入適量消泡劑，壓力為0.06-0.08MPa,發(fā)酵結(jié)束獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)WE1-2CGMCC N0.7744的活菌發(fā)酵液，活菌數(shù)為5X 109CFU / mL以上，芽孢產(chǎn)率為80%左右，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g,酵母膏5g,葡萄糖10g,三水合磷酸氫二鉀Ig,—水合硫酸猛0.15g,七水合硫酸鎂0.3g，pH值為7.2，125°C滅菌40min。發(fā)酵結(jié)束后的發(fā)酵液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后轉(zhuǎn)移至混合攪拌罐中，按照載體與菌泥的質(zhì)量比為2: 1-3: I的比例向混合攪拌罐中加入載體，混合均勻。同時將噴霧干燥設(shè)備的蒸汽壓力保持在0.3-0.6MPa，進(jìn)口溫度達(dá)到180-200°C，出口溫度達(dá)到110-140°C，塔內(nèi)壓力保持在_12_18Pa，然后打開進(jìn)料罐閥門，開始水噴霧，待壓力穩(wěn)定，出口溫度保持在80-90°C時，打開打漿泵，將菌泥與載體的混合物料打入緩沖罐，開始噴霧干燥，干燥過程中保持罐內(nèi)壓力及進(jìn)出口溫度的穩(wěn)定，干燥后粉碎獲得枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744的活性干燥菌粉，菌粉活菌數(shù)達(dá)到2X IO11CFU / g以上，所述載體為麥芽糊精。
[0027]實施例二:畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖中的應(yīng)用
[0028]本發(fā)明產(chǎn)品已進(jìn)行大量畜禽飼喂試驗。肉雞飼喂試驗結(jié)果表明，肉雞從出生后I日齡連續(xù)服用本發(fā)明產(chǎn)品，持續(xù)至出欄，可以顯著提高肉雞平均日增重，降低料肉比；能夠提高肉雞血清中IgG、IgA含量，促進(jìn)外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)；脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)明顯增加；本發(fā)明產(chǎn)品還可以顯著提高肉雞腸道中乳酸菌數(shù)量，降低大腸桿菌菌數(shù)；本發(fā)明產(chǎn)品的使用劑量加倍后對于人工誘發(fā)的肉雞大腸桿菌病有預(yù)防作用。蛋雞飼喂試驗結(jié)果表明，蛋雞進(jìn)入產(chǎn)蛋高峰后連續(xù)服用本發(fā)明產(chǎn)品30-60天，可以顯著提高蛋雞生產(chǎn)性能，包括平均蛋重、平均日產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、破蛋率和料蛋比等指標(biāo)均比對照組顯著改善。本發(fā)明產(chǎn)品可以有效降低雛禽(例如肉仔雞和蛋仔雞等)的死淘率。
[0029]本發(fā)明產(chǎn)品對于斷奶仔豬的保健功效尤其明顯，斷奶前后使用劑量加倍，可以明顯緩減因應(yīng)激產(chǎn)生的腹瀉或者生長遲緩現(xiàn)象；正常飼喂保育仔豬30天，可以提高仔豬平均日增重、降低料肉比、死亡率和發(fā)病率，經(jīng)檢測，仔豬的特異性免疫和非特異性免疫指標(biāo)均較對照明顯增加，回腸、結(jié)腸和盲腸的乳酸菌和雙歧桿菌菌數(shù)明顯增多，大腸桿菌數(shù)量下降。妊娠母豬飼喂試驗結(jié)果表明，本發(fā)明產(chǎn)品可以有效緩減母豬在妊娠期的便秘現(xiàn)象，增加分娩頭數(shù)，提高產(chǎn)仔率。育肥豬飼喂試驗結(jié)果表明，本發(fā)明產(chǎn)品可以明顯提高生長育肥豬的生產(chǎn)性能，縮短出欄時間，提高養(yǎng)殖效率。
[0030]表1列出了通過實驗得出的本發(fā)明產(chǎn)品在實際飼喂過程中不同階段畜禽飼料中的最佳推薦使用量。
[0031]表1本產(chǎn)品在不同階段畜禽飼料中的最佳推薦使用量
[0032]
【權(quán)利要求】
1.一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑，其特征在于: A.顆粒劑配方由以下成分組成:屎腸球菌5%，枯草芽孢桿菌5 %，釀酒酵母菌5 %，低聚果糖10%，山梨醇2%，乳糖3%，麥芽糊精70%，其中屎腸球菌活菌數(shù)≥IXIOiciCFU / g，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≥I X IO10CFU / g，釀酒酵母菌活菌數(shù)≥I X IO9CFU / g，產(chǎn)品總活菌數(shù)≥ 2 X IO10CFU / g。 B.粉劑配方由以下成分組成:屎腸球菌5%，枯草芽孢桿菌5%，釀酒酵母菌5%，低聚果糖10%，山梨醇2%，乳糖3%，白炭黑70%，其中屎腸球菌活菌數(shù)≥I X IO10CFU / mL，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)≥I X IO10CFU / mL，釀酒酵母菌活菌數(shù)≥I X IO9CFU / mL，產(chǎn)品總活菌數(shù)≥ 2 X IO10CFU / mL。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的飼料添加劑，其特征在于:所述屎腸球菌菌株為屎腸球菌(Enterococcus faecium) WE1-10CGMCC N0.7746，原料菌粉活菌數(shù)≥ 2 X IO11CFU / g ;所述枯草芽孢桿菌菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) WE1-2CGMCC N0.7744，原料菌粉活菌數(shù)≥ 2 X IO11CFU / g。
3.一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑的制備方法，其特征在于:將經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)制備好的屎腸球菌菌粉和枯草芽孢桿菌菌粉與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和麥芽糊精按照比例混合均勻，在干燥條件下壓片制粒，通過顆粒機(jī)破碎，振動篩篩分為所需大小的顆粒，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出顆粒型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:將經(jīng)發(fā)酵生產(chǎn)制備好的屎腸球菌菌粉和枯草芽孢桿菌菌粉 與酵母菌菌粉、低聚果糖、山梨醇、乳糖和白炭黑按照比例混合均勻，經(jīng)稱量、包裝后生產(chǎn)出粉劑型微生物功能性飼料添加劑產(chǎn)品。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法,其特征在于:所述的屎腸球菌(Enterococcusfaecium)WE1-10CGMCC N0.7746活性粉劑的生產(chǎn)步驟如下:從復(fù)壯、活化的菌種斜面上挑一環(huán)菌種接于裝有600mL種子培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，37°C，靜置培養(yǎng)10h，所述種子培養(yǎng)基配方為:每1000mL水中含有:蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉3g，三水合磷酸氫二鉀lg，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.1g,吐溫801g，培養(yǎng)基pH值調(diào)為8.0，常規(guī)滅菌；然后以1% (V / V)接種量接于裝有60L種子培養(yǎng)基的100L發(fā)酵罐中，所述種子培養(yǎng)基組分與搖瓶種子培養(yǎng)基一致，滅菌條件為121°C，30min,發(fā)酵條件為37°C，50-100rpm，不通氣，發(fā)酵8-10h ;最后以2% (V / V)接種量接于裝有3000L發(fā)酵培養(yǎng)基的5000L發(fā)酵罐中，所述發(fā)酵培養(yǎng)基配方為每1000mL水中含有:蛋白胨20g，蔗糖20g，檸檬酸銨2g，三水合乙酸鈉5g，三水合磷酸氫二鉀2g，七水合硫酸鎂0.2g，一水合硫酸錳0.05g，吐溫801g，培養(yǎng)基pH值調(diào)為8.0,121°C滅菌30min，發(fā)酵條件為40°C，50-100rpm,不通氣，發(fā)酵8-10h。將發(fā)酵好的培養(yǎng)液通過高速管式離心機(jī)富集菌體后再通過真空冷凍干燥處理，冷凍干燥的保護(hù)劑配方為:脫脂奶粉L-谷氨酸鈉！^，維生素^^，甘油I %，真空度小于30Pa，冷阱溫度為-50°C至_60°C，預(yù)凍時間5h，干燥時間40_45h，，獲得活菌數(shù)為2 X IO11CFU / g的干燥菌粉。
6.一種畜禽用活性微生物功能性飼料添加劑,其特征在于:所述的飼料添加劑在畜禽養(yǎng)殖全程中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的飼料添加劑按照0.1-0.2%。拌全價飼料。
【文檔編號】A23K1/00GK104012753SQ201310719955
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】喬琳, 吳興利, 姚宏明, 高長斌, 劉蕊, 金忠輝 申請人:北京偉嘉人生物技術(shù)有限公司, 沈陽偉嘉牧業(yè)技術(shù)有限公司