一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，生產(chǎn)基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系，能有效避免測(cè)交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進(jìn)程，降低培育成本。采用本發(fā)明方法選育的青脛隱性白羽雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，既可以作為商品雞直接投入生產(chǎn)，還可以與青脛黃麻羽進(jìn)行配套應(yīng)用。
【專利說明】—種青脛隱性白羽雞品系的選育方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，屬于分子育種【技術(shù)領(lǐng)域】。【背景技術(shù)】
[0002]隨著生活水平的提高，人們的消費(fèi)觀念從過去的數(shù)量型轉(zhuǎn)變?yōu)橘|(zhì)量型。人們對(duì)雞肉肉質(zhì)的要求也越來越高。我國的地方雞具有肉質(zhì)好的特點(diǎn)，但是其生長速度較慢，飼料轉(zhuǎn)化率低。而國外的快大型肉雞雖生長速度快、飼料轉(zhuǎn)化率高，其肉質(zhì)較差。為解決這一問題，將國外快大型肉雞與國內(nèi)地方優(yōu)質(zhì)肉雞進(jìn)行雜交，既能夠改善國外快大型肉雞的肉質(zhì)也能加快地方優(yōu)質(zhì)肉雞的生長速度和生產(chǎn)性能。但是，由于我國人民長期的飲食習(xí)慣的影響，中國消費(fèi)者偏愛黃麻羽、黑羽等有色羽的雞，尤其是南方城市不接受快速生長的白羽雞。為了使雜交后雞的表型符合中國消費(fèi)者的需求，就需要純合的隱性白羽雞，隱性白羽雞生產(chǎn)性能高，且與我國有色羽雜交后能保持有色羽的羽色，對(duì)于我國優(yōu)質(zhì)雞的育種上具有重大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法。
[0004]為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0005]一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0006](I)利用青脛隱性白羽雞作為父本，白來航雞作`為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代；
[0007](2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0008](3)利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞；
[0009](4)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測(cè)定自交后代的基因型，重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
[0010]所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞，經(jīng)人工引入PvuII的RFLP-PCR方法測(cè)定顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型。
[0011]所述步驟(3)中利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽公母雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)Pl為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對(duì)P2為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因i等位基因；對(duì)擴(kuò)增得到的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型；
[0012]所述的引物對(duì)Pl為:
[0013]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’(如 SEQ ID N0.1 所示)，
[0014]下游引物，Pl-R:5’-GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’(如 SEQ ID N0.2 所示)；
[0015]所述的引物對(duì)P2為:[0016]上游引物，P2-F:5’-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3’(如 SEQ ID N0.3 所示)，
[0017]下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’(如 SEQ ID N0.4 所示)。
[0018]所述的PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L,Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L, P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
[0019]所述的2XTaq PCR MasterMix含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、氯化鎂和PCR反應(yīng)緩沖液，為市售商品，可購自上海生工、大連寶生物、北京百泰克、北京康為等公司。
[0020]所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s, 35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin0
[0021]所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5%。
[0022]所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為40min。
[0023]所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
[0024]優(yōu)選的，將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產(chǎn)出有色羽肉雞。
[0025]所述的青胚黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、盧氏雞、桃源雞、瑤雞、茶花雞等。
[0026]本發(fā)明的有益效果:
[0027]本發(fā)明采用分子輔助選擇的方法鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型，可以快速判定出該位點(diǎn)的基因型，生產(chǎn)基因型為ii的青脛隱性白羽雞品系，能有效避免測(cè)交選育的繁瑣，縮短世代間隔，加快育種進(jìn)程，降低培育成本。采用本發(fā)明方法選育的青脛隱性白羽雞品系其肉質(zhì)細(xì)嫩，肉味鮮美，生產(chǎn)性能高，既可以作為商品雞直接投入生產(chǎn)，還可以與青脛黃麻羽進(jìn)行配套應(yīng)用。
[0028]本發(fā)明中用于檢測(cè)雞PMEL17基因顯性白羽位點(diǎn)基因型的引物，是針對(duì)PMEL17基因第10外顯子9bp插入(-CTGGGCACC-)設(shè)計(jì)等位基因I特異性引物Pl-R ;針對(duì)PMEL17基因第10外顯子無9bp插入設(shè)計(jì)等位基因i特異性引物P2-F。這樣引物Pl-R與Pl-F只能擴(kuò)增I等位基因，擴(kuò)增的片段大小為224bp ;引物P2-R與P2-F只能擴(kuò)增i等位基因，擴(kuò)增的片段大小為144bp。此外，由于上游引物Pl-F與下游引物P2-R的組合也可以擴(kuò)增，擴(kuò)增的片段大小為322bp，這個(gè)擴(kuò)增不受9bp插入的影響。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0029]圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中各樣本PMEL17基因顯性白羽位點(diǎn)的PCR電泳圖；
[0030]注:自左至右泳道分別代表DNA Marker I和基因型i1、i1、I1、I1、I1、i1、I1、ii和Ii的電泳帶型。
【具體實(shí)施方式】
[0031]下述實(shí)施例僅對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的任何限制。
[0032]實(shí)施例1
[0033]本實(shí)施例中青脛隱性白羽雞品系的選育方法，包括以下步驟:
[0034](I)利用固始雞群體中青脛隱性白羽雞作父本，白來航雞作母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代；
[0035] (2) Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞；
[0036](3)利用AS-PCR的方法測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，具體包括以下步驟:
[0037]①樣品的采集
[0038]對(duì)F2代選留的青脛白羽雞翅靜脈采血，加1/3抗凝劑，用蛋白酶K法提取血液DNA,將DNA樣品保存于4°C冰箱保存?zhèn)溆茫?br> [0039]②引物設(shè)計(jì)
[0040]以PMEL17 基因序列(GenBank Accession N0.AY636129)為模板設(shè)計(jì)引物對(duì) Pl 和P2，如下所示；
[0041]所述的引物對(duì)Pl為:
[0042]上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
[0043]下游引物，P1-R: 5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3，；
[0044]所述的引物對(duì)P2為:
[0045]上游引物，P2-F: 5，-CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，，
[0046]下游引物，P2-R: 5，-GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3，；
[0047]③PCR擴(kuò)增
[0048]以引物對(duì)Pl和P2為引物建立了 25.0 μ L擴(kuò)增體系:2XTaq PCR MasterMix(購自北京百泰克公司)12.5 μ L，CldH2O 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L，Pl-R 0.6 μ L, P2-F 0.6 μ L, P2-R0.4μ L, DNA 模板 1.0μ L ；
[0049]反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個(gè)循環(huán)；72°C延伸IOmin ；
[0050]④PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)與結(jié)果判定
[0051]取10.0μ L PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物，1.5%的瓊脂糖凝膠電泳(電泳電壓:120V ;電泳時(shí)間:40min)點(diǎn)樣，電泳結(jié)束后，用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)瓊脂糖凝膠照相檢測(cè)，電泳圖譜參見圖1 ;根據(jù)電泳圖譜中出現(xiàn)的條帶大小進(jìn)行判定:當(dāng)出現(xiàn)322bp和224bp片段，則為顯性白羽純合子(II基因型);當(dāng)出現(xiàn)322bp和144bp的片段，則為野生型純合子(ii基因型);當(dāng)出現(xiàn)322bp、224bp和144bp的片段，則為顯性白羽雜合子(Ii基因型)；
[0052](4)根據(jù)基因型判定結(jié)果，選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的公母雞；
[0053](5)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測(cè)定自交后代的基因型，重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系；
[0054](6)對(duì)步驟(5)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系作為父本與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產(chǎn)出有色羽肉雞。
【權(quán)利要求】
1.一種青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)利用青脛隱性白羽雞作為父本，白來航雞作為母本進(jìn)行雜交，生產(chǎn)出Fl代； (2)Fl代自交得到F2代，選留F2代青脛白羽公母雞； (3)利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽公母雞的基因型，選留顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的個(gè)體，淘汰顯性白羽位點(diǎn)為II和Ii基因型的個(gè)體，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞； (4)取顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛白羽公母雞自交，利用步驟(3)的方法測(cè)定自交后代的基因型，重復(fù)上述步驟至穩(wěn)定遺傳，得到顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(1)中青脛隱性白羽雞為青脛黃麻羽地方雞突變后的青脛白羽雞。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述步驟(3)中利用AS-PCR測(cè)定F2代青脛白羽公母雞基因型的方法，包括以下步驟:以包含PMEL17基因的待測(cè)雞全基因組DNA為模板，以引物對(duì)Pl為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因I等位基因，以引物對(duì)P2為引物PCR擴(kuò)增雞PMEL17基因i等位基因；對(duì)擴(kuò)增得到的片段進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)的基因型； 所述的引物對(duì)Pl為: 上游引物，Pl-F:5’ -CCGGCCTCTACTGCCTCAACGTCTCGT-3’，
下游引物，Pl-R:5 ’ -GTGCCCAGAGCTTCGGCGATGAGCGGTG-3’ ； 所述的引物對(duì)P2為: 上游引物，P2-F:5’ -CCACGCTCACCGTGGGGCTGCTGCTCAT-3，， 下游引物，P2-R:5’ -GAGGGGGTGAGTGCTGTGTTCTC-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系為:2XTaq PCR MasterMix 12.5μ L, ddH20 9.5 μ L, Pl-F 0.4 μ L, Pl-R0.6 μ L，P2-F 0.6 μ L，P2-R 0.4 μ L，DNA 模板 1.0 μ L。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?94°C預(yù)變性4min ;94°C變性30s，64°C退火30s，72°C延伸15s，35個(gè)循環(huán)；72°C延伸 lOmin。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠的質(zhì)量濃度為1.5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的瓊脂糖凝膠電泳的電壓為120V，電泳時(shí)間為40min。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的鑒定雞顯性白羽位點(diǎn)基因型的方法為:11基因型表現(xiàn)為322bp和224bp條帶；Ii基因型表現(xiàn)為322bp、224bp和144bp條帶；ii基因型表現(xiàn)為322bp和144bp條帶。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:將步驟(4)得到的顯性白羽位點(diǎn)為ii基因型的青脛隱性白羽雞品系與青脛黃麻羽雞品種雜交配套，生產(chǎn)出有色羽肉雞。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的青脛隱性白羽雞品系的選育方法，其特征在于:所述的青脛黃麻羽雞品種為固始雞、邊雞、淮北麻雞、淮南麻黃雞、五華雞、崇仁麻雞、瑯琊雞、盧氏雞、桃源雞、瑤雞或茶花雞。
【文檔編號(hào)】A01K67/027GK103609527SQ201310589767
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】康相濤, 田亞東, 李轉(zhuǎn)見, 楊朋坤, 孫桂榮, 韓瑞麗, 蔣瑞瑞, 呂世杰, 李國喜, 劉小軍, 閆峰賓, 王彥彬 申請(qǐng)人:河南農(nóng)業(yè)大學(xué)