一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟：外植體暫養(yǎng)、外植體消毒、接種誘導(dǎo)、愈傷組織增殖或儲(chǔ)存；本發(fā)明采用聚維酮碘和次氯酸鈉配合使用的方法對(duì)凝花菜外植體進(jìn)行消毒，可以獲得大量無(wú)菌的外植體，采用本發(fā)明對(duì)凝花菜外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，有75%的外植體可以形成愈傷組織，愈傷組織不但可以進(jìn)一步增殖，增殖的大量?jī)?yōu)質(zhì)培養(yǎng)基可以進(jìn)一步分化成再生芽或植株，愈傷組織還可以儲(chǔ)存作為凝花菜的種質(zhì)資源。
【專利說(shuō)明】一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]凝花菜acerosa (Forsskal))是工業(yè)生產(chǎn)瓊脂產(chǎn)品的重要原材料之一。凝花菜的瓊脂凝膠產(chǎn)量很高，每平方厘米的葉狀體的產(chǎn)量可以達(dá)到600g，如此高的瓊脂產(chǎn)量使人們更青睞于用凝花菜作為提取瓊脂的原材料。每年，從自然種群收獲的200-300噸凝花菜干材料用來(lái)本土瓊脂生產(chǎn)，由于生物技術(shù)工業(yè)在國(guó)內(nèi)的興起，對(duì)瓊脂的需求日益增多，導(dǎo)致其他瓊脂海藻的使用，也導(dǎo)致了為了滿足凝花菜日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求而帶來(lái)的過(guò)度采集。因?yàn)槟ú朔植季窒蓿逃猩L(zhǎng)和繁殖慢，因此恢復(fù)和保護(hù)過(guò)度開發(fā)的凝花菜自然藻床的努力受抑制。因此，為了發(fā)展可行的本土的凝花菜大型養(yǎng)殖栽培技術(shù)，在沿海海域開展了在人工基質(zhì)上栽培凝花菜。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，為凝花菜無(wú)性繁殖和篩選快速生長(zhǎng)品系提供充足的種質(zhì)資源，提高凝花菜整體生產(chǎn)力和栽培領(lǐng)域的經(jīng)濟(jì)前景。
[0004]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟:
(1)外植體的暫養(yǎng):選擇健康的、分枝少的植株用作組織培養(yǎng)，用手工刷去除附生植物和其他微生物；將凝花菜葉狀體切成4-5cm長(zhǎng)的切段，并將切段于添加GeO2的PES培養(yǎng)液的充氣瓶中培養(yǎng)I周，培養(yǎng)溫度保持在20-22° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000LX，光照時(shí)間為12h ；
(2)外植體消毒:將步驟I中培養(yǎng)I周的凝花菜切段用1%的聚維酮碘浸泡l_5min，再用1%的次氯酸鈉溶液浸泡l_5min,無(wú)菌海水沖洗干凈；
(3)接種誘導(dǎo):將步驟3中消毒后的外植體置于無(wú)菌操作臺(tái)中，切成3-5_的接種段，將接種段接種于固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織的形成，培養(yǎng)條件為全黑暗、溫度保持在 20-22° C ；
(4)愈傷組織增殖或儲(chǔ)存:步驟3中獲得的愈傷組織用作增殖或用作種質(zhì)資源儲(chǔ)存。
[0005]進(jìn)一步的，步驟I中所述的GeO2的濃度為10mg/L。
[0006]進(jìn)一步的，步驟3中所述的固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖 15-20g、瓊脂 5-8g、IAAl-3mg、ΚΤ0.5_2mg。
[0007]進(jìn)一步的，步驟4中所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖20-40g、瓊脂5-8g、IAA 0.5-1.5mg、KT 0.2_lmg，增殖培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度保持在23-25° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000LX，光照時(shí)間為12h。
[0008]進(jìn)一步的，所述的愈傷組織儲(chǔ)存培養(yǎng)基為ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖10_15g、KT0.l-0.5mg，所述的儲(chǔ)存條件為12-15° C，光強(qiáng)為白色熒光燈500_800Lx，光照時(shí)間為12h。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:
本發(fā)明采用聚維酮碘和次氯酸鈉配合使用的方法對(duì)凝花菜外植體進(jìn)行消毒，可以獲得大量無(wú)菌的外植體，采用本發(fā)明對(duì)凝花菜外植體進(jìn)行誘導(dǎo)，有75%的外植體可以形成愈傷組織，愈傷組織不但可以進(jìn)一步增殖，增殖的大量?jī)?yōu)質(zhì)培養(yǎng)基可以進(jìn)一步分化成再生芽或植株，愈傷組織還可以儲(chǔ)存作為凝花菜的種質(zhì)資源。
【具體實(shí)施方式】
[0010]以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實(shí)施例1:
一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括如下步驟:
(1)外植體的暫養(yǎng):選擇健康的、分枝少的植株用作組織培養(yǎng)，用手工刷去除附生植物和其他微生物；將凝花菜葉狀體切成4-5cm長(zhǎng)的切段，并將切段于添加濃度為10mg/LGeO2的PES培養(yǎng)液的充氣瓶中培養(yǎng)I周，培養(yǎng)溫度保持在20-22° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000Lx，光照時(shí)間為 12h ；
(2)外植體消毒:將步驟I中培養(yǎng)I周的凝花菜切段用1%的聚維酮碘浸泡2min，再用1%的次氯酸鈉溶液浸泡2min，無(wú)菌海水沖洗干凈；
(3)接種誘導(dǎo):將步驟3中消毒后的外植體置于無(wú)菌操作臺(tái)中，切成3-5_的接種段，將接種段接種于固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織的形成，培養(yǎng)條件為全黑暗、溫度保持在20-22° C ;固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖18g、瓊脂6g、IAA 2mg、KT Img ;共接種100塊接種段，其中有75塊形成愈傷組織，愈傷組織誘導(dǎo)率為75% ；
(4)愈傷組織增殖或儲(chǔ)存:步驟3中獲得的愈傷組織用作增殖或用作種質(zhì)資源儲(chǔ)存，增殖培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖35g、瓊脂7g、IAA lmg、KT 0.5mg，增殖培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度保持在23-25° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000LX，光照時(shí)間為12h ;儲(chǔ)存培養(yǎng)基為ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖12g、KT0.3mg，所述的儲(chǔ)存條件為12-15° C，光強(qiáng)為白色熒光燈500-800LX，光照時(shí)間為12h。
[0011]實(shí)施例2:
方法同實(shí)施例1，所不同的是，固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖18g、瓊脂6g、IAA 3mg、KT 2mg ;共接種100塊接種段，其中有70塊形成愈傷組織，愈傷組織誘導(dǎo)率為70%。
[0012]實(shí)施例3:
方法同實(shí)施例1，所不同的是，固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖18g、瓊脂6g、IAA Img、KT 0.5mg ;共接種100塊接種段，其中有68塊形成愈傷組織，愈傷組織誘導(dǎo)率為68%。
[0013]實(shí)施例4:
方法同實(shí)施例1，所不同的是，固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖18g、瓊脂6g、IAA lmg、KT 2mg ;共接種100塊接種段，其中有60塊形成愈傷組織，愈傷組織誘導(dǎo)率為60%。
[0014] 上述實(shí)例只是為說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思以及技術(shù)特點(diǎn)，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實(shí) 質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種凝花菜愈傷組織的誘導(dǎo)方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)外植體的暫養(yǎng):選擇健康的、分枝少的植株用作組織培養(yǎng)，用手工刷去除附生植物和其他微生物；將凝花菜葉狀體切成4-5cm長(zhǎng)的切段，并將切段于添加GeO2的PES培養(yǎng)液的充氣瓶中培養(yǎng)I周，培養(yǎng)溫度保持在20-22° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000LX，光照時(shí)間為12h ； (2)外植體消毒:將步驟I中培養(yǎng)I周的凝花菜切段用1%的聚維酮碘浸泡l_5min，再用1%的次氯酸鈉溶液浸泡l_5min,無(wú)菌海水沖洗干凈； (3)接種誘導(dǎo):將步驟3中消毒后的外植體置于無(wú)菌操作臺(tái)中，切成3-5_的接種段，將接種段接種于固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)愈傷組織的形成，培養(yǎng)條件為全黑暗、溫度保持在 20-22° C ； (4)愈傷組織增殖或儲(chǔ)存:步驟3中獲得的愈傷組織用作增殖或用作種質(zhì)資源儲(chǔ)存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，步驟I中所述的GeO2的濃度為IOmg/L0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，步驟3中所述的固體PES誘導(dǎo)培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖15-20g、瓊脂5-8g、IAAl_3mg、KT0.5_2mg。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，步驟4中所述的愈傷組織增殖培養(yǎng)基的配方為，ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖20-40g、瓊脂5-8g、IAA 0.5-1.5mg、KT 0.2_lmg，增殖培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度保持在23-25° C，光強(qiáng)為白色熒光燈2000-3000LX，光照時(shí)間為12h。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)方法，其特征在于，所述的愈傷組織儲(chǔ)存培養(yǎng)基為ILPES培養(yǎng)基中添加蔗糖10-15g、 KT0.1-0.5mg，所述的儲(chǔ)存條件為12-15° C，光強(qiáng)為白色熒光燈500-800Lx，光照時(shí)間為12h。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103733988SQ201310584618
【公開日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】張明 申請(qǐng)人:青島佰眾化工技術(shù)有限公司