一種香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法,包括以下幾個(gè)步驟:步驟A:制備植物乳桿菌凍干菌劑;步驟B:制備凍干產(chǎn)朊假絲酵母;步驟C:制備凍干單寧酶;步驟D:依次復(fù)活植物乳桿菌凍干菌劑、產(chǎn)朊假絲酵母和單寧酶;步驟E:將所得到的復(fù)活菌劑充分?jǐn)嚢韬笾瞥蓮?fù)活水,保持復(fù)活水中含菌量在108cfu/mL~1010cfu/mL;步驟F:將香蕉莖葉切成2-4cm大小,處理至其含水量在60%~65%左右,將步驟E所得的復(fù)活水與香蕉莖葉攪拌均勻,裝入發(fā)酵桶中,壓實(shí)、密封后在常溫下避光,即可制得香蕉莖葉青貯飼料。本發(fā)明采用以上方法,可以變廢為寶,能清除和鈍化香蕉莖葉中不利于消化的單寧,降低纖維素含量,開(kāi)發(fā)出優(yōu)質(zhì)的青貯飼料,產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及ー種微生物飼料添加劑領(lǐng)域中的復(fù)合菌劑及其制備方法,尤其涉及一種用于香蕉莖葉青貯飼料中的微生物復(fù)合菌劑及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]青貯飼料就是把青(半干)飼料裝入青貯窖內(nèi),在厭氧條件下,靠乳酸菌發(fā)酵制成能長(zhǎng)期保存的飼料。這種飼料能有效地保存青綠植物的營(yíng)養(yǎng)成分,保證原料青綠時(shí)的鮮嫩汁液,氣味芳香,質(zhì)地柔軟,適ロ性強(qiáng),采食量高,內(nèi)含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化利用率最高。實(shí)踐證明,青貯飼料是科學(xué)養(yǎng)畜,特別是飼養(yǎng)反芻家畜必不可少的基礎(chǔ)飼料。
[0003]青貯飼料經(jīng)過(guò)厭氧微生物發(fā)酵后,營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得以保存,而且在發(fā)酵過(guò)程中微生物的活動(dòng)可以產(chǎn)生很多動(dòng)物所需要的小分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。微生物菌體本身可提供菌體蛋白,添加一定的微生物可以降解原料中的纖維素成分轉(zhuǎn)化為小分子的單糖、寡糖或者低聚糖,所以微生物菌劑與化學(xué)添加劑相比,有著安全、易操作、無(wú)污染等優(yōu)點(diǎn),近年來(lái)被廣泛采用。
[0004]常用青貯原料有玉米、苜蓿、甘薯和南瓜等,但香蕉莖葉作為青貯飼料原料比較少見(jiàn)。香蕉的莖葉是香蕉生產(chǎn)的主要副產(chǎn)品,長(zhǎng)期以來(lái)這些莖葉、果軸等產(chǎn)物往往被作為廢棄物處理,不僅污染環(huán)境,也造成了很大的浪費(fèi)。研究發(fā)現(xiàn),香蕉果軸中含有大量的纖維素和半纖維素,香蕉莖葉中含有蛋白質(zhì)、脂肪、纖維素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),如香蕉莖葉干物質(zhì)中含有23.7%的粗纖維,6.4%的粗蛋白,0.8%的粗脂肪和56%的無(wú)氮浸出物。與其他農(nóng)作物秸桿相比,其無(wú)氮浸出物含量豐富,粗纖維含量低,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和能量高,可作為優(yōu)質(zhì)的飼料資源。
[0005]如將香蕉莖桿加工成青貯飼料,對(duì)充分利用農(nóng)作物資源,促進(jìn)畜牧業(yè)的科學(xué)發(fā)展,擴(kuò)大飼料資源、降低飼料成本,循環(huán)發(fā)展農(nóng)牧業(yè),減少環(huán)境污染,提高農(nóng)民增收等一系列國(guó)計(jì)民生都有著巨大的現(xiàn)實(shí)意義和深遠(yuǎn)的戰(zhàn)略意義。
[0006]香蕉莖葉中含有大量有毒性的聚合程度小而活性大的單寧(鞣酸),它不但影響適ロ性,而且能抑制多種酶的活性,隨動(dòng)物的采食量增加而使消化率下降,同時(shí)它還影響到對(duì)其它飼料蛋白質(zhì)的吸收,因此,將新鮮的香蕉莖葉直接作為飼料資源是不科學(xué)的,而如何除去單寧是開(kāi)發(fā)利用香蕉莖葉的關(guān)鍵。
[0007]香蕉莖葉的粗蛋白很低,制約著它的深加工發(fā)展。另外,香蕉莖葉富含纖維素、半纖維素和木質(zhì)素,很難被降解,近幾十年來(lái)國(guó)內(nèi)外都采用物理、化學(xué)等處理方法,但降解率仍然很低,故營(yíng)養(yǎng)價(jià)值提高幅度不大,制約著其發(fā)展。
[0008]并且,香蕉栽培在北緯30°以?xún)?nèi),廣西尤其是香蕉主產(chǎn)區(qū),有著豐富的資源,如果能把香蕉莖葉作為青貯飼料的技術(shù)難題克服,無(wú)疑對(duì)廣西甚至全國(guó)的香蕉種植產(chǎn)業(yè)有巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009]本發(fā)明針對(duì)香蕉莖葉作為飼料本身單寧含量高、粗纖維多、粗蛋白含量少等不足,提供ー種微生物復(fù)合菌劑,使青貯飼料具有更好的適ロ性、更低的纖維素含量和更高的蛋白含量,全面提升其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
[0010]本發(fā)明提供一種用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑,包括:植物乳桿菌凍干菌齊U、產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑和單寧酶凍干粉劑。
[0011]本發(fā)明還提供一種制備用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,包括以下幾個(gè)步驟:
步驟A:制備植物乳桿菌凍干菌劑:將植物乳桿菌NL4-10,接種于MRS培養(yǎng)基中,靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定期,離心后去上清液,菌泥用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌后,離心后重懸于無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入等體積的脫脂乳溶液作為保護(hù)劑,預(yù)凍,再后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得植物乳桿菌凍干菌劑;
步驟B:制備凍干產(chǎn)朊假絲酵母:將產(chǎn)朊假絲酵母GM2.148接種量,接種于麥芽汁培養(yǎng)基中,靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定期,離心后去上清液,菌泥用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌后,離心再重懸于無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入聚こニ醇和L-谷氨酸鈉的混合溶液作為保護(hù)劑,預(yù)凍后進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑;
步驟C:制備凍干單寧酶:將黑曲霉NC22接種于查氏液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng),定性濾紙過(guò)濾后得胞外單寧粗酶液,再離心,上清液為胞外單寧酶液,將得到的上清液加入硫酸銨沉淀,再經(jīng)蒸餾水透析除鹽得到濃縮的單寧酶液,再將單寧酶液按體積比加入聚こニ醇和甘露醇的混合液作為保護(hù)劑,預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得單寧酶凍干粉劑。
[0012]步驟D:依次復(fù)活植物乳桿菌凍干菌劑、產(chǎn)朊假絲酵母和單寧酶:
Dl:植物乳桿菌復(fù)活:用水溶解MRS培養(yǎng)基,再加入植物乳桿菌凍干劑,常溫下復(fù)活;D2:產(chǎn)朊假絲酵母復(fù)活:用水溶解麥芽汁培養(yǎng)基,加入產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑,常溫下復(fù)活;
D3:單寧酶復(fù)活:在檸檬酸鈉鹽酸緩沖液中,加入單寧酶凍干粉劑,常溫下復(fù)活;
步驟E:將步驟Dl、D2和D3所得到的復(fù)活菌劑充分?jǐn)嚢韬笾瞥蓮?fù)活水,保持復(fù)活水中含菌量在 108cfu/mL?101° cfu/mL ;
步驟F:將香蕉莖葉切成2-4cm大小,處理至其含水量在60%飛5%左右,將步驟E所得的復(fù)活水與香蕉莖葉攪拌均勻,裝入發(fā)酵桶中,壓實(shí)、密封后在常溫下避光,即可制得香蕉莖葉青忙飼料。
[0013]優(yōu)選的,所述植物乳桿菌NL4-10與MRS培養(yǎng)基,產(chǎn)朊假絲酵母GM2.148與麥芽汁培養(yǎng)基的質(zhì)量比均為1:10,凍干單寧酶與檸檬酸鈉鹽酸緩沖液培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2:1。
[0014]優(yōu)選的,所述查氏液體發(fā)酵培養(yǎng)基含質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的單寧酸。
[0015]優(yōu)選的,所述步驟A和步驟B中,靜置培養(yǎng)的溫度為37°C和28°C,時(shí)間均為36小時(shí)。
[0016]優(yōu)選的,所述步驟C中,培養(yǎng)的溫度為30°C,速率為120r/min,時(shí)間為72小時(shí)。
[0017]優(yōu)選的,所述步驟A和步驟B中,離心的溫度為4 °C,時(shí)間為10分鐘,速度為10000 X g,無(wú)菌磷酸鹽的pH值為6.5。
[0018]優(yōu)選的,所述步驟A、B和C中的預(yù)凍方法包括:-20°C預(yù)凍2小時(shí)后,_80°C再預(yù)凍8小時(shí),預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,冷阱溫度為_(kāi)60°C,真空度為4-6Pa,真空冷凍干燥時(shí)間為16小吋。[0019]優(yōu)選的,步驟A中,所述脫脂乳溶液的質(zhì)量濃度為10%,所述步驟C中,硫酸銨沉淀的濃度為2mol/mL,與胞外單寧酶液的體積比5%。
[0020]優(yōu)選的,步驟B中的保護(hù)劑中聚こニ醇的體積比1%和L-谷氨酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7% ;所述步驟C中的保護(hù)劑中聚こニ醇和甘露醇的混合液與濃縮后的單寧酶液體積比均為1%。
[0021]本發(fā)明采用以上方法,可以變廢為寶,能清除和鈍化香蕉莖葉中不利于消化的單寧,降低纖維素含量,開(kāi)發(fā)出優(yōu)質(zhì)的青貯飼料,產(chǎn)生巨大的經(jīng)濟(jì)效益。
[0022]
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面對(duì)本發(fā)明的較優(yōu)的實(shí)施例作進(jìn)ー步的詳細(xì)說(shuō)明:
實(shí)施例1:
1、微生物復(fù)合菌劑制作
1.1制備植物乳桿菌凍干菌劑
將植物乳桿菌NL4-10按1%接種量,接種于MRS培養(yǎng)基中,37°C靜置培養(yǎng)36小時(shí)至穩(wěn)定期。在4°C吋,10000 Xg離心10分鐘,去上清液,菌泥用濃度為60mM、pH值為6.5的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌2次后,再I(mǎi)OOOOXg離心10分鐘,重懸于200mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入等體積的濃度為10% (m/v)的脫脂乳溶液作為保護(hù)劑,-20°C預(yù)凍2小時(shí)后,-80°C再預(yù)凍8小時(shí),預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,冷阱溫度為_(kāi)60°C,真空度為4-6Pa,真空冷凍干燥時(shí)間為16小吋,即可獲得植物乳桿菌凍干菌劑。
[0024]其中,植物乳桿菌NL4-10的制備方法:稱(chēng)取50g新鮮香蕉葉,剪成0.5cm小塊后裝入3cmX 20cm的無(wú)菌試管中,加入無(wú)菌水至沒(méi)過(guò)所有物料,30°C、120r/min振蕩30min,取懸浮液用于MRS固體培養(yǎng)基平板劃線進(jìn)行分離純化。挑取單菌落用MRS液體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)至培養(yǎng)基渾濁,培養(yǎng)液繼續(xù)用平板劃線進(jìn)行分離純化,多次劃線分離直至平板菌落無(wú)其他雜菌出現(xiàn)。
[0025]1.2制備凍干產(chǎn)朊假絲酵母
將產(chǎn)朊假絲酵母GM2.148按1%接種量,接種于麥芽汁培養(yǎng)基中,28°C恒溫靜置培養(yǎng)36小時(shí)至穩(wěn)定期,在4°C吋,IOOOOXg離心10分鐘,去上清液,菌泥用濃度為60mM、pH值為6.5的無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌2次后,再10000 X g離心10分鐘,重懸于200mL無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入1%聚こニ醇和7%L-谷氨酸鈉作為保護(hù)劑,_20°C預(yù)凍2小時(shí)后,_80°C再預(yù)凍8小時(shí),預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,冷阱溫度為_(kāi)60°C,真空度為4-6Pa,真空冷凍干燥時(shí)間為16小吋,即可獲得產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑。
[0026]其中,產(chǎn)朊假絲酵母GIM2.148保藏于廣東省微生物研究所菌種保藏中心,產(chǎn)朊假絲酵母GMCC編號(hào):GIM2.148。
[0027]1.3凍干單寧酶
將黑曲霉NC22按1%接種量,接種于含2%單寧酸的查氏液體發(fā)酵培養(yǎng)基,在30°C、120r/min條件下培養(yǎng)72小時(shí),定性濾紙過(guò)濾后得胞外單寧粗酶液,粗酶液在4°C環(huán)境中IOOOOXg離心30分鐘,上清液為胞外單寧酶液。上清液以體積比5%的2mol/mL硫酸銨沉淀,蒸餾水透析除鹽得到濃縮的單寧酶液。單寧酶液按體積比加入1%聚こニ醇和1%甘露醇作為保護(hù)劑,-20°C預(yù)凍2小時(shí)后,_80°C再預(yù)凍8小時(shí),預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,冷阱溫度為_(kāi)60°C,真空度為4-6Pa,真空冷凍干燥時(shí)間為16小吋,即可獲得單寧酶凍干粉劑。
[0028]其中,黑曲霉NC22的制備方法:稱(chēng)取20g新鮮香蕉葉,粉碎后加入90mL 0.1%的蛋白胨水溶液中,300C、120r/min振蕩30min,過(guò)濾得到分離原液,將分離原液進(jìn)行梯度稀釋后涂布于馬丁氏瓊脂培養(yǎng)基,挑取生長(zhǎng)較好的單菌落,接種于PDA培養(yǎng)基,多次劃線分離直至得到該黑曲霉菌株。
[0029]2、使用方法:
2.1植物乳桿菌復(fù)活:取MRS培養(yǎng)基100g以500mL 42°C水溶解,加入凍干植物乳桿菌凍干劑10g,常溫下復(fù)活30分鐘;
2.2產(chǎn)朊假絲酵母復(fù)活:取麥芽汁培養(yǎng)基50g以42°C水溶解,加入產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑5g,常溫下復(fù)活30分鐘;
2.3單寧酶復(fù)活:在5g檸檬酸鈉鹽酸緩沖液中,加入單寧酶凍干粉劑10g,常溫下復(fù)活30分鐘;
2.4將步驟2.1-2.3所復(fù)活菌劑充分?jǐn)嚢韬笾瞥蓮?fù)活水,保持復(fù)活水中含菌量在108cfu/mL^1010 cfu/mL ;
2.5將200kg香蕉莖葉切成2-4cm左右大小,處理至含水量在60%飛5%左右,將步驟
2.4所得的復(fù)活水與香蕉莖葉攪拌均勻,裝入50L的發(fā)酵桶中,壓實(shí)、密封后在常溫下避光培養(yǎng)25天,即可制得復(fù)合要求的香蕉莖葉青貯飼料。
[0030]經(jīng)過(guò)上述エ 藝青貯發(fā)酵以后制得的香蕉莖葉青貯料具有良好的酸香味、顔色亮、質(zhì)地柔軟,且具固形物和粗蛋白分別提高了 14.39%和38.33%,纖維素和單寧分別降低了21.22%和19.9%,菌種在生長(zhǎng)過(guò)程中利用可溶性化合物從而降低了 17.01%,但是氨態(tài)氮比對(duì)照組降低了 15.60%,說(shuō)明在青貯發(fā)酵過(guò)程中蛋白質(zhì)破壞小,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高,達(dá)到優(yōu)等青貯料的品質(zhì)要求。
[0031]以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)ー步詳細(xì)說(shuō)明,不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限 于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō),在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下,還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換,都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑,其特征在于,包括:植物乳桿菌凍干菌劑、產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑和單寧酶凍干粉劑。
2.一種制備如權(quán)利要求1所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,包括以下幾個(gè)步驟: 步驟A:制備植物乳桿菌凍干菌劑:將植物乳桿菌NL4-10,接種于MRS培養(yǎng)基中,靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定期,離心后去上清液,菌泥用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌后,離心后重懸于無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入等體積的脫脂乳溶液作為保護(hù)劑,預(yù)凍,再后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得植物乳桿菌凍干菌劑; 步驟B:制備凍干產(chǎn)朊假絲酵母:將產(chǎn)朊假絲酵母GIM2.148,接種于麥芽汁培養(yǎng)基中,靜置培養(yǎng)至穩(wěn)定期,離心后去上清液,菌泥用無(wú)菌磷酸鹽緩沖液洗滌后,離心再重懸于無(wú)菌磷酸鹽緩沖液,加入聚乙二醇和L-谷氨酸鈉的混合溶液作為保護(hù)劑,預(yù)凍后進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑; 步驟C:制備凍干單寧酶:將黑曲霉NC22接種于查氏液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng),定性濾紙過(guò)濾后得胞外單寧粗酶液,再離心,上清液為胞外單寧酶液,將得到的上清液加入硫酸銨沉淀,再經(jīng)蒸餾水透析除鹽得到濃縮后的單寧酶液,再將單寧酶液按體積比加入聚乙二醇和甘露醇的混合液作為保護(hù)劑,預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,即可獲得單寧酶凍干粉劑; 步驟D:依次復(fù)活植 物乳桿菌凍干菌劑、產(chǎn)朊假絲酵母和單寧酶: Dl:植物乳桿菌復(fù)活:用水溶解MRS培養(yǎng)基,再加入植物乳桿菌凍干劑,常溫下復(fù)活; D2:產(chǎn)朊假絲酵母復(fù)活:用水溶解麥芽汁培養(yǎng)基,加入產(chǎn)朊假絲酵母凍干粉劑,常溫下復(fù)活; D3:單寧酶復(fù)活:在檸檬酸鈉鹽酸緩沖液中,加入單寧酶凍干粉劑,常溫下復(fù)活; 步驟E:將步驟Dl、D2和D3所得到的復(fù)活菌劑充分?jǐn)嚢韬笾瞥蓮?fù)活水,保持復(fù)活水中含菌量在 108cfu/mL~101° cfu/mL ; 步驟F:將香蕉莖葉切成2-4cm大小,處理至其含水量在60%飛5%左右,將步驟E所得的復(fù)活水與香蕉莖葉攪拌均勻,裝入發(fā)酵桶中,壓實(shí)、密封后在常溫下避光,即可制得香蕉莖葉青忙飼料。
3.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述植物乳桿菌NL4-10與MRS培養(yǎng)基,產(chǎn)朊假絲酵母GM2.148與麥芽汁培養(yǎng)基的質(zhì)量比均為1:10,凍干單寧酶與檸檬酸鈉鹽酸緩沖液培養(yǎng)基的質(zhì)量比為2:1。
4.如權(quán)利要求3所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述查氏液體發(fā)酵培養(yǎng)基含質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%的單寧酸。
5.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述步驟A和步驟B中,靜置培養(yǎng)的溫度為37°C和28°C,時(shí)間均為36小時(shí)。
6.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述步驟C中,培養(yǎng)的溫度為30°C,速率為120r/min,時(shí)間為72小時(shí)。
7.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述步驟A和步驟B中,離心的溫度為4°C,時(shí)間為10分鐘,速度為10000Xg,無(wú)菌磷酸鹽的pH值為6.5。
8.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,所述步驟A、B和C中的預(yù)凍方法包括:-20°C預(yù)凍2小時(shí)后,_80°C再預(yù)凍8小吋,預(yù)凍后放入冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行冷凍干燥,冷阱溫度為-60°C,真空度為4-6Pa,真空冷凍干燥時(shí)間為16小吋。
9.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,步驟A中,所述脫脂乳溶液的質(zhì)量濃度為10%,所述步驟C中,硫酸銨沉淀的濃度為2mol/mL,與胞外單寧酶液的體積比5%。
10.如權(quán)利要求2所述的用于香蕉莖葉青貯的微生物復(fù)合菌劑的方法,其特征在于,步驟B中的保護(hù)劑中聚乙二醇的體積比為1%,L-谷氨酸鈉的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7% ;所述步驟C中的保護(hù)劑中聚乙二醇 和甘露醇的混合液與濃縮后的單寧酶液體積比均為1%。
【文檔編號(hào)】A23K1/165GK103598420SQ201310584256
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】游向榮, 李志春, 張雅媛, 付桂明, 孫健, 陸少峰, 劉成梅, 車(chē)江旅, 萬(wàn)茵, 李明娟, 李麗, 李昌寶, 黎昌炎, 衛(wèi)萍 申請(qǐng)人:廣西壯族自治區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所