一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，經(jīng)過鏈霉素、聚維酮碘和次氯酸鈉消毒后，接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中誘導(dǎo)再生芽的形成，以PES培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，1LPES培養(yǎng)基中添加NAA?0.5～4mg、KT0.5～2mg、抗壞血酸5～10mg、蔗糖30g；以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，鏈霉素、聚維酮碘和次氯酸鈉配合使用可以獲得豐富的無菌外植體，以PES為基本培養(yǎng)基，添加NAA和KT后有效的促進(jìn)假根外植體再分化，形成大量的再生芽，誘導(dǎo)率高達(dá)81%。
【專利說明】一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]擬小葉喇口八藻(Turbinaria conoides )隸屬于褐藻門、墨角藻目、馬尾藻科、喇口八藻屬，是我國常見的一種大型褐藻。擬小葉喇叭藻中含有豐富的海洋留體化合物如海洋甾醇，海洋留醇與陸生植物的留醇相比，具有更為豐富的骨架和支鏈，這種獨(dú)特的結(jié)構(gòu)賦予它具有抗腫瘤、抗病毒、消炎殺菌的特殊功效，且可以用來制備酶抑制劑，因此，海洋留體化合物成為醫(yī)療與制藥業(yè)中引人矚目的一類成分。 [0003]目前，擬小葉喇叭藻主要以野生資源為主，但是野生資源也不豐富；人工栽培技術(shù)還不成熟，限制人工育種的主要因素是種藻來源不穩(wěn)定、種質(zhì)資源匱乏。植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以快速繁殖，周年生產(chǎn)，不受季節(jié)限制；種苗整齊度高，可以進(jìn)行新品種培育，所需材料較少，繁殖系數(shù)大，可以在一年內(nèi)由一個莖段培養(yǎng)出數(shù)百萬種苗。海洋植物的組織培養(yǎng)技術(shù)比較落后，究其主要原因是無法獲得大量無菌且可行的外植體，海藻主要是由細(xì)胞組成，雖然大型海藻的結(jié)構(gòu)相對復(fù)雜，但是消毒劑的種類和劑量對外植體的影響非常顯著，劑量高容易殺死外植體，而劑量低又不容易殺死進(jìn)入到海藻細(xì)胞內(nèi)部的細(xì)菌或真菌。并且，海洋植物組織培養(yǎng)中培養(yǎng)基的種類和激素配比還處于探索階段，所以擬小葉喇叭藻的植物組織培養(yǎng)技術(shù)還比較落后，很難誘導(dǎo)出愈傷組織、芽或者根，或者誘導(dǎo)率極低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，擬小葉喇叭藻的假根外植體可以形成大量的再生芽，為擬小葉喇叭藻提供豐富的種質(zhì)資源。
[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，包括如下步驟:
(1)制備外植體:以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為I~5%的鏈霉素中浸泡2~4h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒I~3min，，再將外植體取出放入濃度為I~3%的次氯酸鈉溶液中消毒I~5min,最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；
(2)接種:無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到液體再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段；
(3)培養(yǎng):搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C，培養(yǎng)4-6周至再生芽形成。
[0006]優(yōu)選的，所述的鏈霉素的濃度為2%，浸泡時間為3h。
[0007]優(yōu)選的，所述的聚維酮碘的消毒時間為2min。[0008]優(yōu)選的，所述的次氯酸鈉的濃度為2%，消毒時間為3min。
[0009]優(yōu)選的，所述的擬小葉喇叭藻的再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:以PES培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 0.5~4mg、KT 0.5~2mg、抗壞血酸5~10mg、鹿糖30g。
[0010]優(yōu)選的，所述的擬小葉喇叭藻的再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:以PES培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 2mg、KT lmg、抗壞血酸7mg、鹿糖30g。
[0011]本發(fā)明的有益效果是: 以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，鏈霉素、聚維酮碘和次氯酸鈉配合使用可以獲得豐富的無菌外植體，以PES為基本培養(yǎng)基，添加NAA和KT后有效的促進(jìn)假根外植體再分化，形成大量的再生芽，誘導(dǎo)率高達(dá)81%。
【具體實(shí)施方式】
[0012]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的有益效果:
實(shí)施例1:
以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為2%的鏈霉素中浸泡3h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒2min，，再將外植體取出放入濃度為2%的次氯酸鈉溶液中消毒3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段，共接種100塊切段；搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C;培養(yǎng)基的配方為IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 0.5mg、KT 0.5mg、抗壞血酸5mg、鹿糖30g ;培養(yǎng)4周至再生芽形成，100塊切段中，有68塊切段有芽形成，誘導(dǎo)率為68%。
[0013]實(shí)施例2:
以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為2%的鏈霉素中浸泡3h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒2min，，再將外植體取出放入濃度為2%的次氯酸鈉溶液中消毒3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段，共接種100塊切段；搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C;培養(yǎng)基的配方為IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 4mg、KT 2mg、抗壞血酸10mg、鹿糖30g ;培養(yǎng)4周至再生芽形成，100塊切段中，有70塊切段有芽形成，誘導(dǎo)率為70%。
[0014]實(shí)施例3:
以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為2%的鏈霉素中浸泡3h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒2min，，再將外植體取出放入濃度為2%的次氯酸鈉溶液中消毒3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段，共接種100塊切段；搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C;培養(yǎng)基的配方為IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 4mg、KT 0.5mg、抗壞血酸7mg、鹿糖30g ;培養(yǎng)4周至再生芽形成，100塊切段中，有72塊切段有芽形成，誘導(dǎo)率為72%。
[0015]實(shí)施例4:
以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為2%的鏈霉素中浸泡3h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒2min，，再將外植體取出放入濃度為2%的次氯酸鈉溶液中消毒3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段，共接種100塊切段；搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C;培養(yǎng)基的配方為IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 2mg、KT lmg、抗壞血酸7mg、鹿糖30g ;培養(yǎng)4周至再生芽形成，100塊切段中，有71塊切段有芽形成，誘導(dǎo)率為81%。
[0016]實(shí)施例5:
以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為2%的鏈霉素中浸泡3h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒2min，，再將外植體取出放入濃度為2%的次氯酸鈉溶液中消毒3min，最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈；無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段，共接種100塊切段；搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C;培養(yǎng)基的配方為IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 2mg、KT 2mg、抗壞血酸7 mg、鹿糖30g ;培養(yǎng)4周至再生芽形成，100塊切段中，有67塊切段有芽形成，誘導(dǎo)率為67%。
[0017]上述實(shí)例只是為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思以及技術(shù)特點(diǎn)，并不能以此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)該涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.一種擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)制備外植體:以擬小葉喇叭藻的假根作為外植體，用毛刷將外植體上附著的雜藻等附著物清除干凈后，將外植體置于濃度為I~5%的鏈霉素中浸泡2~4h，然后再將外植體取出，于1%聚維酮碘中消毒I~3min，，再將外植體取出放入濃度為I~3%的次氯酸鈉溶液中消毒I~5min,最后用冷卻的過濾高壓滅菌海水沖洗干凈； (2)接種:無菌操作臺中將假根外植體切成長度為0.2-0.5cm的切段，并將切段接種到液體再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，每個培養(yǎng)皿中接種5個切段； (3)培養(yǎng):搖床培養(yǎng)，搖床的速度為80~100r/min，培養(yǎng)條件為光強(qiáng)4000~5000Lx、光照時間12h、溫度18~22°C，培養(yǎng)4-6周至再生芽形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的鏈霉素的濃度為2%，浸泡時間為3h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的聚維酮碘的消毒時間為2min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的次氯酸鈉的濃度為2%，消毒時間為3min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的擬小葉喇叭藻的再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:以PES培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，IL PES培養(yǎng)基中添加NAA0.5~4mg、KT 0.5~2mg、抗壞血酸5~10mg、鹿糖30g。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求5所述的擬小葉喇叭藻組織培養(yǎng)的方法，其特征在于，所述的擬小葉喇叭藻的再生誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配方為:以PES培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，IL PES培養(yǎng)基中添加NAA 2mg、KT lmg、抗壞血酸7mg、鹿糖30g。
【文檔編號】A01H4/00GK103718953SQ201310584061
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】張明 申請人:青島佰眾化工技術(shù)有限公司