一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法，包括如下步驟：1）將由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一張新的子脾組成的蜂群封閉在固定的空間內(nèi)，讓蜂王在子脾上產(chǎn)卵24小時后，阻止蜂王在其上繼續(xù)產(chǎn)卵但不限制工蜂喂養(yǎng)幼蟲，并在食源中添加待測外源物質(zhì)供工蜂采集和飼喂幼蟲；2）定時拍照記錄子脾的發(fā)育狀況，并統(tǒng)計各項發(fā)育指標來量化待測外源物質(zhì)對蜜蜂卵期至成蟲前影響。本發(fā)明具有以下優(yōu)點：該方法具有操作性強、操作簡便、外源物質(zhì)添加劑量、時間均可控等優(yōu)點，同時，對于蜜蜂個發(fā)育節(jié)點時間選擇正確且具有較強的可比性，能很好的客觀的評價外源物質(zhì)對蜜蜂這一階段的危害。
【專利說明】一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蜜蜂生態(tài)安全評價領(lǐng)域，具體涉及一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蜜蜂是高級社會性昆蟲，以群體為單位過著社會性生活。一個正常蜂群由一只蜂王、上萬只工蜂及千百只雄峰組成，蜂王、工蜂和雄峰統(tǒng)稱為三型蜂。蜂群中，蜂王擔負著產(chǎn)卵的功能，工蜂擔負保溫孵卵、清潔蜂房、采集食物、哺育等功能，而雄峰則主要擔負交配的功能。蜜蜂的存在不僅能為人類提供大量營養(yǎng)豐富、滋補保健的蜂產(chǎn)品，更為重要的是蜜蜂授粉對提高農(nóng)作物產(chǎn)量、改善果實品質(zhì)和維護生態(tài)平衡具有十分重要的作用。
[0003]蜜蜂為全變態(tài)昆蟲，其個體發(fā)育須經(jīng)過卵期、幼蟲期、蛹期和成蟲期四個時期。蜂王在王臺中產(chǎn)下受精卵或未受精卵后，卵經(jīng)過3天孵化成小幼蟲，卵期不取食任何飼料。初孵化的幼蟲為淡青色，不具足，平臥房底，此階段的前三天蜜蜂幼蟲由工蜂飼喂王漿，爾后，蜂王幼蟲繼續(xù)被飼喂營養(yǎng)豐富的王漿直至化蛹；但工蜂和雄峰幼蟲改吃由蜂蜜、花粉直接調(diào)和成的食物，此期間，每只幼蟲平均每天被飼喂1300多次，差不多每分鐘一次。在幼蟲后期，工蜂將幼蟲房的房口封上一層蠟，稱為封蓋，之后幼蟲在封蓋房內(nèi)共進行5次蛻皮、吐絲、作繭和化蛹。蜜蜂蛹期不進食，但幼蟲期形成的各種組織和器官在繼續(xù)分化和改造，逐漸形成成蟲的各種器官。當成蟲在蛹殼內(nèi)完全形成時，蛹殼裂開，蜜蜂咬破巢房蠟蓋羽化出房并開始成蟲期。
[0004]以往評價諸如農(nóng)藥或其它等環(huán)境外源物質(zhì)對蜜蜂的危害往往集中在其對成年蜂的影響上，比如農(nóng)藥等蜜蜂工蜂的急性毒性或者亞致死效應(yīng)上，或者是比較粗放的去評估環(huán)境有害物質(zhì)對蜜蜂卵期及幼蟲期的危害，而忽略了對蜜蜂卵一成蟲前的影響。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為解決在不影響生理、生活習性的同時客觀評價外源物質(zhì)對蜜蜂卵——成蟲前的影響的難題，本發(fā)明提供一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法。
[0006]本發(fā)明檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法，包括如下步驟:
[0007]I)將由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一張新的子脾組成的蜂群封閉在固定的空間內(nèi)，讓蜂王在子脾上產(chǎn)卵24小時后，阻止蜂王在其上繼續(xù)產(chǎn)卵但不限制工蜂喂養(yǎng)幼蟲，并在食源中添加待測外源物質(zhì)供工蜂采集和飼喂幼蟲；
[0008]2)定時拍照記錄子脾的發(fā)育狀況，并統(tǒng)計各項發(fā)育指標來量化待測外源物質(zhì)對蜜蜂卵期至成蟲前影響。
[0009]其中，步驟I)所述將蜂群封閉在固定的空間內(nèi)為將蜂群封閉在紗網(wǎng)圍成的空間中。
[0010]其中，步驟I)所述蜂群由一只蜂王、若干框的工蜂和雄峰及一張新子脾組成。
[0011]其中，步驟I)所述蜂群優(yōu)選由一只蜂王、兩框的工蜂和雄峰及一張新子脾組成。[0012]其中，步驟I)所述食源為糖水和/或花粉。
[0013]其中，步驟2)所述發(fā)育指標選自孵化率、化蛹率、羽化率、孵化時間、封蓋時間、封蓋率、出房時間以及出房率等中的一種或幾種。
[0014]其中，步驟2)所述定時拍照記錄子脾的發(fā)育狀況為每隔一定時間將子脾從蜂箱中取出，用相機拍照，然后放回蜂箱中。
[0015]本發(fā)明還提供所述檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法在評價蜜蜂生態(tài)安全中的應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明的優(yōu)點是:本發(fā)明旨在不打破蜜蜂固有生物學特性的基礎(chǔ)上，將外源物質(zhì)添加到蜜蜂飼糧中以評判外源物質(zhì)對蜜蜂的影響，尤其是蜜蜂卵期——成蟲前的影響。將蜂群封閉在紗網(wǎng)中，使蜜蜂能在有限空間內(nèi)自由活動，但不會對其生物學行為特性有過多改變?？蓪⒋郎y外源物質(zhì)加入封閉空間內(nèi)的食源中，使得蜜蜂的食源可控，添加外源物質(zhì)的濃度、劑量及時間均可控，能最大程度模仿大田環(huán)境下外源物質(zhì)對蜜蜂卵一成蟲前(卵、幼蟲和蛹期)的危害。同時，在蜜蜂發(fā)育關(guān)鍵時期定時采用高分辨率的相機對子脾的發(fā)育狀況進行拍照，可在電腦上檢查蜂子的發(fā)育狀況，避免因操作或環(huán)境因素而給蜜蜂卵一成蟲期帶來的影響，以孵化時間、孵化率、封蓋時間、封蓋率、出房時間和出房率為指標，可量化評價外源物質(zhì)對蜜蜂卵-成蟲前的影響。
[0017]該方法具有操作性強、操作簡便、外源物質(zhì)添加劑量、時間均可控等優(yōu)點，同時，對于蜜蜂個發(fā)育節(jié)點時間選擇正確且具有較強的可比性，能很好的客觀的評價外源物質(zhì)對蜜蜂這一階段的危害。
【具體實施方式】
[0018]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0019]實施例1評價不同劑量Bt-CrylAc對蜜蜂成蜂前的影響
[0020]傳統(tǒng)的方式為:
[0021]在開發(fā)的環(huán)境下，將新子脾加入蜂箱中供蜂王產(chǎn)卵24小時，然后用隔王板限制蜂王在其上產(chǎn)卵和其它工蜂喂養(yǎng)，在幼蟲期每天定時用微量移液器往蜂巢中依次加入花粉和蜂蜜的混合物，并設(shè)置添加不同劑量Bt-CrylAc的處理，操作起來費時費力，且由于操作時間過長，幼蟲發(fā)育過程中要求的恒溫35°C得不到保障，幼蟲發(fā)育受到嚴重影響，在衡量不同劑量Bt-Cry I Ac對成蟲前發(fā)育影響時,對照組(不含Bt-Cry I Ac)由卵發(fā)育成蜂的比率過低，導致實驗數(shù)據(jù)的可靠性大打折扣。
[0022]采用本發(fā)明的方法為:
[0023]試驗開始前，將具有一只蜂王、兩框的工蜂和雄峰的蜂群放入16目紗網(wǎng)圍成的3mX3mX2.5m—封閉空間中，供以足量的質(zhì)量比2:1混合而成的花粉和蜂蜜的混合物(所用花粉和花蜜為普通市購花粉和花蜜即可)，并輔以清潔的清水，每兩天更換一次。待蜂群穩(wěn)定后，將一張新子脾加入蜂箱中供蜂王產(chǎn)卵24小時，然后再用隔王板或其它措施阻止蜂王在其上繼續(xù)產(chǎn)卵，但不限制其它工蜂喂養(yǎng)幼蟲。
[0024]按上述方式準備若干蜂群，在不同處理蜂群的食源中添加不同劑量Bt-CrylAc，為設(shè)置的不同劑量處理，添加的時間為蜂王產(chǎn)卵滿24小時開始使用隔王板或其它措施時。以后每隔一定時間檢查卵的孵化率、孵化時間、封蓋時間、封蓋率、出房時間以及出房率等。[0025]本發(fā)明的方法省去了用微量移液器往蜂巢中加入花粉和蜂蜜混合物的繁瑣過程，其而由于操作時間大大減少，操作和環(huán)境因素對蜜蜂的影響降到了最低，卵發(fā)育成蜂的比率高達95%，遠高于前者的70%，從而能保證試驗順利的進行。
[0026]實施例2評價不同劑量吡蟲啉對蜜蜂成蜂前的影響
[0027]將具有一只蜂王、兩框工蜂和雄峰的蜂群放入16目紗網(wǎng)(圍成的3mX3mX2.5m封閉空間中。待蜂群穩(wěn)定后，將新子脾加入蜂箱中供蜂王產(chǎn)卵24小時，然后用隔王板限制蜂王在其上產(chǎn)卵，但不限制其它工蜂喂養(yǎng)幼蟲。封閉空間內(nèi)人工提供足量的質(zhì)量比2:1混合而成的花粉和蜂蜜的混合物，再輔以清潔的清水，每兩天更換一次。按上述方式準備若干蜂群，在不同處理蜂群的食源中添加不同劑量吡蟲啉。添加的時間為蜂王產(chǎn)卵滿24小時開始使用隔王板或其它措施時。
[0028]但在檢查蜂群發(fā)育時，采用傳統(tǒng)方法，具體為:事先采用一張和巢框同樣大小、高透明的塑料膜覆蓋在巢框上，每次用記號筆在相應(yīng)位置上進行畫圈標記，然后進行統(tǒng)計分析。該方法同樣費時費力，且和實施例1中一樣，子脾脫離蜂箱時間較長，蜂群發(fā)育受到一定影響。
[0029]而采用本發(fā)明的方法檢查蜂群發(fā)育，即:
[0030]在幼蟲發(fā)育關(guān)鍵時期每隔6小時用高分辨率相機尼康D800將蜂群發(fā)育動態(tài)記錄下來。檢查前，準備一張與子脾同樣大小的鋼絲脾框一個，根據(jù)子脾的大小，將其分成4X8個同等大小的，使得每個小區(qū)里面的蜂巢數(shù)為100個。觀察時，在各發(fā)育節(jié)點時間左右每6小時將子脾從蜂箱中取出，將鋼絲框脾套在子脾上，然后用高分辨率相機拍攝記錄固定區(qū)域內(nèi)蜂子發(fā)育狀況，然后再迅速的將子脾放回蜂箱中，以此減少環(huán)境因素對蜂子的影響。將拍攝來的照片上傳到電腦，然后統(tǒng)計該區(qū)域內(nèi)的卵數(shù)、幼蟲數(shù)、封蓋數(shù)以及出房數(shù)及相應(yīng)的時間。即可根據(jù)這些數(shù)據(jù)計算相應(yīng)的孵化率、孵化率、孵化時間、封蓋時間、封蓋率、出房時間以及出房率等發(fā)育指標，并據(jù)此來推斷外源物質(zhì)對蜜蜂卵——成蟲前的危害。
[0031]在未采用本發(fā)明之前，檢查每個小區(qū)的時間長達三分鐘，若以每框3個小區(qū)計算，含有幼蟲的巢框暴露在陽光和無保溫措施環(huán)境下的時間長達10分鐘以上，而采用本發(fā)明的方法后，幼蟲脫離蜂群恒溫保護的檢查時間可縮短在一分鐘以內(nèi)，大大縮減了檢查的時間，從而保證了其它干擾因素的影響，可科學的根據(jù)蜂群發(fā)育各項指標來判斷不同劑量吡蟲啉對蜜蜂成蜂前的影響。
[0032]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法，包括如下步驟: 1)將由一只蜂王、若干工蜂和雄峰及一張新的子脾組成的蜂群封閉在固定的空間內(nèi)，讓蜂王在子脾上產(chǎn)卵24小時后，阻止蜂王在其上繼續(xù)產(chǎn)卵但不限制工蜂喂養(yǎng)幼蟲，并在食源中添加待測外源物質(zhì)供工蜂采集和飼喂幼蟲； 2)定時拍照記錄子脾的發(fā)育狀況，并統(tǒng)計各項發(fā)育指標來量化待測外源物質(zhì)對蜜蜂卵期至成蟲前影響。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述將蜂群封閉在固定的空間內(nèi)為將蜂群封閉在紗網(wǎng)圍成的空間中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述蜂群由一只蜂王、若干框的工蜂和雄峰及一張新子脾組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟I)所述蜂群由一只蜂王、兩框的工蜂和雄峰及一張新子脾組成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述食源為糖水和/或花粉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述發(fā)育指標選自孵化率、化蛹率、羽化率、孵化時間、封蓋時間、封蓋率、出房時間以及出房率等中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述定時拍照記錄子脾的發(fā)育狀況為每隔一定時間將子脾從蜂箱中取出，用相機拍照，然后放回蜂箱中。
8.權(quán)利要求1-7任一項所述檢測外源物質(zhì)對蜜蜂成蜂前影響的方法在評價蜜蜂生態(tài)安全中的應(yīng)用。
【文檔編號】A01K67/033GK103734084SQ201310467361
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2013年10月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月9日
【發(fā)明者】羅術(shù)東, 梁革梅, 劉佳霖, 秦加敏, 逯彥果, 田自珍 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院蜜蜂研究所