光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體公開了光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明從綠色、環(huán)保、安全、高效的角度出發(fā)，以植物光葉鐵仔作為生物農(nóng)藥的原材料，通過甲醇、樹脂層析和硅膠層析進(jìn)行提取制備光葉鐵仔提取物，對(duì)家蠅及玉米小斑病菌、水稻稻瘟病菌等有害生物有明顯生物抑制活性，可應(yīng)用于農(nóng)藥制劑的制備中。
【專利說明】光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物提取【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用。【背景技術(shù)】
[0002]家蠅是城市內(nèi)主要的擾人昆蟲和環(huán)境衛(wèi)生害蟲，防治不及時(shí)將會(huì)對(duì)人們生活環(huán)境造成極大影響；玉米灰斑病、玉米小斑病、玉米紋枯病、水稻稻痕病是危害玉米、水稻的常見病害，有效防治將會(huì)降低農(nóng)作物的損失。
[0003]目前對(duì)于家蠅和這些病害的防治仍有賴于擬除蟲菊酯類藥劑和化學(xué)殺菌農(nóng)藥。但是環(huán)境和食品安全越發(fā)受到人們的關(guān)注，農(nóng)藥導(dǎo)致的農(nóng)殘超標(biāo)、環(huán)境污染及抗性等問題則為社會(huì)關(guān)注的焦點(diǎn)。因此，開發(fā)能有效控制有害生物的高效、低毒、低殘留的低碳環(huán)保型藥劑，已成為農(nóng)藥創(chuàng)制研究的首要目標(biāo)。目前農(nóng)藥行業(yè)的整體發(fā)展趨勢(shì)已從非選擇性農(nóng)藥轉(zhuǎn)向選擇性農(nóng)藥，從傳統(tǒng)的有機(jī)化學(xué)農(nóng)藥轉(zhuǎn)向生態(tài)合理農(nóng)藥和環(huán)境和諧農(nóng)藥，力求在施用過程中達(dá)到農(nóng)藥無公害化，保護(hù)環(huán)境，促進(jìn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。植物源農(nóng)藥因具有諸如易降解、不污染環(huán)境、安全間隔期短及不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)而成為農(nóng)藥研究與開發(fā)的熱點(diǎn)之
O
[0004]植物在進(jìn)化過程中為抵御昆蟲等有害生物的侵害，進(jìn)化出合成如生物堿、萜類、皂苷、甾體、類黃酮、酚類等活性次生代謝物的防御途徑，于是植物次生代謝物質(zhì)的直接應(yīng)用或作為先導(dǎo)化合物仿生合成性能更優(yōu)的化合物成為創(chuàng)制新型殺蟲劑的重要手段之一。因此，能夠開發(fā)一種植物源殺蟲抑菌物質(zhì)將會(huì)同時(shí)滿足人們對(duì)于綠色、環(huán)保、安全、高效的多方面要求。
[0005]光葉鐵仔是紫金牛科密花樹屬植物，灌木，高達(dá)2米；小枝多，纖細(xì)，無毛，葉柄下延不甚明顯。光葉鐵仔主要生長(zhǎng) 于云南東南部海拔1100-2100米密林中濕潤(rùn)的地方，在我國(guó)福建、浙江、廣東、廣西、貴州亦有分布。目前對(duì)該種植物的化學(xué)成分尚未有研究報(bào)道，也沒有關(guān)于光葉鐵仔提取物在防治家蠅和玉米灰斑病、玉米小斑病、玉米紋枯病、水稻稻瘟病方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用，使所提供的光葉鐵仔提取物能夠?qū)蚁壖坝衩谆野卟【?、玉米小斑病菌、玉米紋枯病菌、水稻稻瘟病菌有明顯抑制活性。
[0007]為實(shí)現(xiàn)以上發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
[0008]光葉鐵仔提取物I的制備方法，將光葉鐵仔的根、莖或葉干燥后，粉碎，用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到浸膏，即為光葉鐵仔提取物I。除此之外，本發(fā)明還優(yōu)選將分別得到的根部光葉鐵仔提取物1、莖部光葉鐵仔提取物I以及葉部光葉鐵仔提取物I進(jìn)行兩兩組合或者全部混合，得到混合的光葉鐵仔提取物I。優(yōu)選為根部光葉鐵仔提取物I和莖部光葉鐵仔提取物I組合。[0009]作為優(yōu)選，所述光葉鐵仔的根、莖或葉與甲醇的質(zhì)量體積比為lkg:5L。
[0010]本發(fā)明分別用由光葉鐵仔根、莖、葉部獲得的光葉鐵仔提取物I處理家蠅成蟲36h各處理結(jié)果表明，莖部的校正死亡率最高，為32.58%，其次為根部，其校正死亡率為22.92%，葉部的校正死亡率為10.11%，均對(duì)家蠅有效；48h后各處理結(jié)果表明，莖部的校正死亡率最高，為56.81%，其次為根部，其校正死亡率為50.16%，葉部的校正死亡率為23.59%，對(duì)家蠅效果隨時(shí)間延長(zhǎng)提高。
[0011]同時(shí)，本發(fā)明采用含毒介質(zhì)法分別測(cè)定了光葉鐵仔根、莖、葉部光葉鐵仔提取物I對(duì)玉米灰斑病菌、玉米小斑病菌、玉米紋枯病菌、水稻稻瘟病菌的抑菌作用，結(jié)果表明，根、莖、葉部分光葉鐵仔提取物I對(duì)上述病菌均表現(xiàn)出一定的抑菌活性。
[0012]因此，本發(fā)明提供一種有本發(fā)明所述制備方法制備的光葉鐵仔提取物I。
[0013]此外，本發(fā)明還提供一種光葉鐵仔提取物2的制備方法，將光葉鐵仔的根和莖分別干燥、粉碎，并分別用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到光葉鐵仔根部浸膏和光葉鐵仔莖部浸膏，合并兩部分浸膏得到混合浸膏，加水溶解混合浸膏，離心取上清，經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂層析后，用水單獨(dú)洗脫3個(gè)柱體積或用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，得到洗脫物，即為光葉鐵仔提取物2。
[0014]可以看出，光葉鐵仔提取物2的制備方法是在光葉鐵仔提取物I制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行制備的。DlOl型大孔吸附樹脂層析可按照本領(lǐng)域常規(guī)操作進(jìn)行，所述洗脫3個(gè)柱體積為本領(lǐng)域常規(guī)術(shù)語，即用洗脫劑洗脫至洗脫液的體積為DlOl型大孔吸附樹脂層析柱體積的3倍。為了更加清楚的說明本發(fā)明技術(shù)方案，對(duì)本發(fā)明所述用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮步驟進(jìn)行說明，用水洗脫3個(gè)柱體積后無需收集洗脫液接著用95%乙醇洗脫，最后收集的是經(jīng)95%乙醇洗脫后的洗脫液。
[0015]作為優(yōu)選，所述光葉鐵仔的根或莖與甲醇的質(zhì)量體積比為lkg:5L ；
[0016]作為優(yōu)選，所述混合浸膏與溶解用水的質(zhì)量體積比為lg: 10mL。
[0017]作為優(yōu)選，所述DlOl型大孔吸附樹脂優(yōu)選購(gòu)自于長(zhǎng)沙市大禹化工有限公司的DlOl型大孔吸附樹脂。
[0018]本發(fā)明采用胃毒法分別測(cè)定單獨(dú)用水洗脫得到的光葉鐵仔提取物2和先后用水、乙醇洗脫得到的光葉鐵仔提取物2對(duì)家蠅成蟲的殺蟲活性，結(jié)果表明，其中單獨(dú)用水洗脫得到的光葉鐵仔提取物2對(duì)家蠅的毒性隨著時(shí)間增加，毒性增加，其校正死亡率從12h的3.3%增加到最后48h的55.6% ;先后用水、乙醇洗脫得到的光葉鐵仔提取物2在12h時(shí)對(duì)家蠅的毒性達(dá)到23.33%，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，校正死亡率分別為57.13%，85.71%，最后在48h后全部死亡。
[0019]同時(shí)，本發(fā)明還檢測(cè)了上述兩種光葉鐵仔提取物2(水洗脫得到的光葉鐵仔提取物2和先后用水、乙醇洗脫得到的光葉鐵仔提取物2)對(duì)玉米灰斑病菌、玉米小斑病菌、玉米紋枯病菌、水稻稻瘟病菌的抑菌作用，結(jié)果表明，兩種光葉鐵仔提取物2對(duì)上述病菌均表現(xiàn)出一定的抑菌活性。
[0020]因此，本發(fā)明還提供一種由本發(fā)明所述制備方法制備的光葉鐵仔提取物2。
[0021]最后，本發(fā)明還提供一種光葉鐵仔提取物3的制備方法，將光葉鐵仔的根和莖分別干燥、粉碎，并分別用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到光葉鐵仔根部浸膏和光葉鐵仔莖部浸膏，合并兩部分浸膏得到混合浸膏，加水溶解混合浸膏，離心取上清，經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂層析后，用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，得到洗脫物；
[0022]然后所得洗脫物進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑進(jìn)行梯度濃度洗脫，每個(gè)濃度洗脫量為4個(gè)柱體積，收集最終濃度洗脫劑洗脫的洗脫液減壓濃縮，得到光葉鐵仔提取物3。
[0023]可以看出，光葉鐵仔提取物3的制備方法是在光葉鐵仔提取物I制備方法以及光葉鐵仔提取物2的制備方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行制備的。硅膠柱層析可按照本領(lǐng)域常規(guī)操作進(jìn)行，所述洗脫3個(gè)柱體積或4個(gè)柱體積為本領(lǐng)域常規(guī)術(shù)語，即用洗脫劑洗脫至洗脫液的體積為硅膠柱體積的3倍或4倍。為了更加清楚的說明本發(fā)明技術(shù)方案，對(duì)本發(fā)明所述用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮步驟進(jìn)行說明，用水洗脫3個(gè)柱體積后無需收集洗脫液接著用95%乙醇洗脫，最后收集的是經(jīng)95%乙醇洗脫后的洗脫液。
[0024]作為優(yōu)選，所述氯仿-甲醇的梯度濃度為以下情形之一:
[0025]⑴氯仿:甲醇=5:1;
[0026](2)氯仿:甲醇=5:1、4:1 ;
[0027](3)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1 ;
[0028](4)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1 ；
[0029](5)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1、1:1 ；
[0030](6)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0:1 (即全部是甲醇);
[0031]其中，所述氯仿和甲醇之間的比例為體積比。本發(fā)明在洗脫時(shí)，上述各種梯度濃度情形均按照從5:1-0:1這種梯度濃度順序進(jìn)行。且收集洗脫液均是收集最后一個(gè)濃度梯度洗脫的洗脫液。
[0032]作為優(yōu)選，所述硅膠柱為正向硅膠，目數(shù)為100-200目，硅膠柱為玻璃層析柱，規(guī)格為:直徑X長(zhǎng)度=50mmX 100mm。
[0033]本發(fā)明采用胃毒法測(cè)定光葉鐵仔提取物3對(duì)家蠅成蟲的殺蟲活性，結(jié)果表明，光葉鐵仔提取物3對(duì)家蠅成蟲的毒力隨時(shí)間延長(zhǎng)而不斷提高，至48h達(dá)到18-100%不同程度的校正死亡率。
[0034]同時(shí)，本發(fā)明還檢測(cè)了光葉鐵仔提取物3對(duì)玉米灰斑病菌、玉米小斑病菌、玉米紋枯病菌、水稻稻瘟病菌的抑菌作用，結(jié)果表明，光葉鐵仔提取物3對(duì)上述病菌均表現(xiàn)出一定的抑菌活性。
[0035]因此，本發(fā)明還提供一種由本發(fā)明所述制備方法制備的光葉鐵仔提取物3。
[0036]本發(fā)明提供的光葉鐵仔提取物均對(duì)家蠅、玉米灰斑病菌、玉米小斑病菌、玉米紋枯病菌和水稻稻瘟病菌的抑制活性，因此本發(fā)明提供所述光葉鐵仔提取物1、葉鐵仔提取物2和葉鐵仔提取物3在防治家蠅、玉米灰斑病、玉米小斑病、玉米紋枯病和水稻稻瘟病中的應(yīng)用。同時(shí)，所述光葉鐵仔提取物1、葉鐵仔提取物2和葉鐵仔提取物3也可應(yīng)用到具體的農(nóng)藥制劑生產(chǎn)中。
[0037]由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明從綠色、環(huán)保、安全、高效的角度出發(fā)，以植物光葉鐵仔作為生物農(nóng)藥的原材料，通過甲醇、樹脂層析和硅膠層析進(jìn)行提取制備光葉鐵仔提取物，對(duì)家蠅及玉米小斑病菌、水稻稻瘟病菌等有害生物有明顯毒力，可應(yīng)用于農(nóng)藥制劑的制備中。
【具體實(shí)施方式】
[0038]本發(fā)明公開了光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的光葉鐵仔提取物及其制備方法和應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的化合物和制備方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0039]下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0040]實(shí)施例1:光葉鐵仔提取物I的制備
[0041]取光葉鐵仔的根2.0kg自然風(fēng)干后，粉碎，用IOL甲醇常溫下浸提2次，每次48h，減壓濃縮后得到光葉鐵仔根部提取物300g，即光葉鐵仔提取物I。
[0042]實(shí)施例2:光葉鐵仔提取物I的制備
[0043]取光葉鐵仔的莖2.0kg自然風(fēng)干后，粉碎，用IOL甲醇常溫下浸提2次，每次48h，減壓濃縮后得到光葉鐵仔莖部提取物250g，即光葉鐵仔提取物I。
[0044]實(shí)施例3:光葉鐵仔提取物I的制備
[0045]取光葉鐵仔的葉2. 0kg自然風(fēng)干后，粉碎，用IOL甲醇常溫下浸提2次，每次48h，減壓濃縮后得到光葉鐵仔葉部提取物500g，即光葉鐵仔提取物I。
[0046]實(shí)施例4:光葉鐵仔提取物I的殺蟲活性
[0047]采用胃毒法測(cè)定實(shí)施例1-3所制備的光葉鐵仔提取物I對(duì)家蠅成蟲的殺蟲活性:
[0048]稱取0.1g光葉鐵仔提取物1，用丙酮溶解并定容至20mL容量瓶中，配制成5mg/mL溶液。稱取0.5g白砂糖于指形管中。用ImL移液器將配成的溶液吸取0.5mL轉(zhuǎn)入指形管中，讓溶劑在自然條件下風(fēng)干，使樣品均勻附著在白砂糖上備用。挑選羽化后2-3天整齊一致的家蠅成蟲，向每管中接入10頭家蠅成蟲。每處理設(shè)3次重復(fù)，每重復(fù)10頭試蟲，丙酮做空白對(duì)照。處理24h、36h、48h后分別記錄死亡蟲數(shù)，計(jì)算死亡率和校正死亡率，結(jié)果見表
1
【權(quán)利要求】
1.光葉鐵仔提取物I的制備方法，其特征在于，將光葉鐵仔的根、莖或葉干燥后，粉碎，用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到浸膏，即為光葉鐵仔提取物I。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，所述光葉鐵仔的根、莖或葉與甲醇的質(zhì)量體積比為1kg: 5L。
3.權(quán)利要求1或2制備的光葉鐵仔提取物I。
4.光葉鐵仔提取物2的制備方法，其特征在于，將光葉鐵仔的根和莖分別干燥、粉碎，并分別用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到光葉鐵仔根部浸膏和光葉鐵仔莖部浸膏，合并兩部分浸膏得到混合浸膏，加水溶解混合浸膏，離心取上清，經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂層析后，用水單獨(dú)洗脫3個(gè)柱體積或用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，得到洗脫物，即為光葉鐵仔提取物2。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述光葉鐵仔的根或莖與甲醇的質(zhì)量體積比為1kg: 5L。
6.權(quán)利要求4或5制備的光葉鐵仔提取物2。
7.光葉鐵仔提取物3的制備方法，其特征在于，將光葉鐵仔的根和莖分別干燥、粉碎，并分別用甲醇常溫下浸提2次，每次48h，合并2次浸提液減壓濃縮后得到光葉鐵仔根部浸膏和光葉鐵仔莖部浸膏，合并兩部分浸膏得到混合浸膏，加水溶解混合浸膏，離心取上清，經(jīng)DlOl型大孔吸附樹脂層析后，用水洗脫3個(gè)柱體積后接著用95%乙醇洗脫3個(gè)柱體積，收集洗脫液進(jìn)行減壓濃縮，得到洗脫物； 然后所得洗脫物進(jìn)行硅膠柱層析，以氯仿-甲醇為洗脫劑進(jìn)行梯度濃度洗脫，每個(gè)濃度洗脫量為4個(gè)柱體積，收集最終濃度洗脫劑洗脫后的洗脫液減壓濃縮，得到光葉鐵仔提取物3。.
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述制備方法，其特征在于，所述氯仿-甲醇的梯度濃度為以下情形之一: (1)氯仿:甲醇=5:1; ⑵氯仿:甲醇=5:1、4:1 ； ⑶氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1 ； ⑷氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1 ； (5)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1、1:1； (6)氯仿:甲醇=5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、0:1; 其中，所述氯仿和甲醇之間的比例為體積比。
9.權(quán)利要求7或8制備的光葉鐵仔提取物3。
10.權(quán)利要求3、6、9任意一項(xiàng)所述光葉鐵仔提取物在防治家蠅、玉米灰斑病、玉米小斑病、玉米紋枯病和水稻稻痕病中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A01N65/08GK103461392SQ201310456261
【公開日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】王學(xué)貴, 李倩, 王文明, 沈麗淘, 李慶, 楊群芳, 余慧靈, 郝強(qiáng), 樊晶, 李燕 申請(qǐng)人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)